高 浩，雍 玥，吳曉琿，陳文婷

1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院麻醉科（上海 201203）；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院針麻研究所（上海 201203）

針刺作為中醫(yī)學(xué)的重要治療方法，已經(jīng)普遍被國(guó)際主流醫(yī)學(xué)界所認(rèn)可和接納，并廣泛應(yīng)用于臨床各種疾病的預(yù)防和治療。其中，電針在調(diào)理胃腸功能、促進(jìn)胃動(dòng)力恢復(fù)、治療胃腸損傷等方面具有顯著療效［1-3］。

前期研究［4］證實(shí)，電針足三里穴、梁丘穴可顯著提高腹腔鏡手術(shù)患者圍術(shù)期胃黏膜血流量，抑制胃黏膜酸化，提示電針具有胃黏膜保護(hù)效應(yīng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)［5-6］也證實(shí)，電針“足三里”穴可以抑制乙醇或非甾體抗炎藥引起的大鼠應(yīng)激性潰瘍，提高胃黏膜血流量，促進(jìn)胃黏膜修復(fù)，這與臨床研究結(jié)果一致。在基礎(chǔ)研究領(lǐng)域，已有研究［7-9］證實(shí)針刺治療應(yīng)激性潰瘍可能與一些修復(fù)因子的釋放有關(guān)。此外，低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）對(duì)缺血及損傷的胃黏膜具有修復(fù)作用［10］。但是，電針是否能夠有效提高修復(fù)因子釋放及HIF-1α 表達(dá)，從而促進(jìn)胃黏膜損傷修復(fù)，仍缺乏相關(guān)研究證實(shí)。本研究旨在觀察電針對(duì)促進(jìn)應(yīng)激性潰瘍小鼠胃黏膜損傷修復(fù)的影響，探討電針的修復(fù)作用與促進(jìn)修復(fù)因子釋放及上調(diào)HIF-1α表達(dá)水平的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 雄性SPF 級(jí)C57BL/6 小鼠27 只，體質(zhì)量22～25 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006。小鼠飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（滬）2020-0009。小鼠自由攝食和飲水，控制飼養(yǎng)溫度（21 ℃）和光照時(shí)間（上午7：00 至晚上21：00）在穩(wěn)定的條件下。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理批準(zhǔn)號(hào)：2019-0014）。

1.1.2 藥物與試劑 異氟烷，江蘇恒瑞醫(yī)藥有限公司（批號(hào)：S190815）；磷酸化蛋白酶抑制劑，武漢賽維爾生物科技有限公司（批號(hào)：G2007）；二喹啉甲酸比色法（BCA）蛋白定量檢測(cè)試劑盒，武漢賽維爾生物科技有限公司（批號(hào)：G2026）；抗小鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）單克隆抗體 ，武漢賽維爾生物科技有限公司（批號(hào)：GB12002）；抗小鼠HIF-1α 抗體，武漢賽維爾生物科技有限公司（批號(hào)：GB14165）；RNA 酶抑制劑，美國(guó)Invitrogen 公司（批號(hào)：c10777000）；cDNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒（First Strand cDNA synthesis Kit），美國(guó)Invitrogen 公司（批號(hào)：K1622）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR 試劑盒（QuantityNova SYBR Green PCR Kit），德國(guó)QIAGEN 公司（批號(hào)：208052）；cDNA 反轉(zhuǎn)錄隨機(jī)引物，美國(guó)Invitrogen公司（批號(hào)：17504044）。

1.1.3 主要儀器 電子天平，德國(guó)Sartorius公司（型號(hào)：SecuraSQP）；電針儀，蘇州醫(yī)療用品廠有限公司（型號(hào)：SDZ-ⅡB）；一次性無(wú)菌針灸針（規(guī)格：0.16 mm×7 mm），蘇州天協(xié)針灸器械有限公司；動(dòng)物麻醉機(jī)，上海玉研科技儀器有限公司（型號(hào)：ABS-100）；梯度PCR 儀，美國(guó)Thermo Fisher Scitific 公司（型號(hào)：Veriti DX）；熒光定量PCR 儀，瑞士Roche 公司（型號(hào)：Roche 480Ⅱ Real Time PCR System）；凝膠成像系統(tǒng)，上海天能科技有限公司。

1.2 造模 采用冷束縛應(yīng)激（cold restraint stress，CRS）建立小鼠應(yīng)激性潰瘍模型，參照既往已形成的穩(wěn)定的CRS 小鼠模型建立方法［11-12］。小鼠以2%～3%的異氟烷吸入麻醉，至小鼠昏睡、呼吸平穩(wěn)，鑷子輕夾胡須及身體無(wú)體動(dòng)，停止吸入異氟烷。將昏睡小鼠上肢和下肢分別用膠布纏繞固定，然后放入自制的塑料固定器中，露出頭端及尾部，供小鼠正常呼吸（見(jiàn)圖1）。整個(gè)固定過(guò)程約5 min，小鼠在此過(guò)程中始終處于昏睡狀態(tài)，便于操作固定和減少應(yīng)激反應(yīng)。隨后將小鼠連同固定器放于4 ℃冰箱，關(guān)閉箱門(mén)，45 min后取出并松綁。按此方法連續(xù)CRS造模3 d，每日2次，上、下午各1次。CRS 小鼠應(yīng)激性潰瘍模型穩(wěn)定性檢測(cè)：造模3 d后，小鼠呈現(xiàn)安靜、萎靡不振、身體蜷縮、寒戰(zhàn)等狀態(tài)，為造模成功的行為學(xué)標(biāo)準(zhǔn)；體視鏡下可見(jiàn)胃黏膜充血、水腫、全胃散在多發(fā)點(diǎn)狀/片狀糜爛及出血，胃黏膜潰瘍指數(shù)（UI）評(píng)分5分以上，為造模成功的形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。

圖1 小鼠束縛后放入自創(chuàng)固定裝置

1.3 分組與干預(yù) 在實(shí)驗(yàn)前16～20 h，小鼠禁止攝入食物，但可以自由飲水。將小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分成對(duì)照組（Sham 組）、模型組（CRS 組）及模型+電針組（CRS+EA組），每組9只。

3 組小鼠干預(yù)方法如下。①Sham 組：不進(jìn)行冷束縛應(yīng)激的造模和電針干預(yù)，其他與③相同；②CRS 組：不進(jìn)行電針干預(yù)，其他操作與③相同；③CRS+EA 組：建立CRS 的小鼠應(yīng)激性潰瘍模型，造模3 d 后進(jìn)行電針干預(yù)。

小鼠針灸穴位的定位標(biāo)準(zhǔn)均參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［13］。①“足三里”穴（ST36）：膝關(guān)節(jié)下外側(cè)，腓骨小頭下3.5 mm 處。②“梁丘”穴（ST34）：在膝關(guān)節(jié)上外方2 mm 處，股直肌和股外側(cè)肌之間，與外膝眼在一條直線上（見(jiàn)圖2）。自造模第4 天開(kāi)始，用自制硅膠束縛器對(duì)小鼠進(jìn)行束縛，暴露小鼠后肢。在小鼠清醒狀態(tài)下用0.16 mm×7 mm（直徑×長(zhǎng)度）針灸針斜刺入小鼠兩側(cè)“足三里”穴和“梁丘”穴，“足三里”穴接正極，“梁丘”穴接負(fù)極。將電針儀金屬夾子夾于針灸針針尾，參數(shù)設(shè)置為連續(xù)波型，電流脈沖頻率2 Hz，刺激強(qiáng)度0.5 mA，刺激時(shí)間為15 min，上、下午各1次，持續(xù)2 d。

圖2 鼠科動(dòng)物“足三里”穴（ST36）、“梁丘”穴（ST34）與尾部非經(jīng)穴圖解［13］

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第6 天取材。每組中3 只用于蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）及實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）檢測(cè)，6只用于UI評(píng)分。小鼠吸入2%～3%的異氟烷麻醉氣體，3～5 min后呈現(xiàn)麻醉狀態(tài)（鑷子夾起胡須無(wú)反應(yīng)），置于操作臺(tái)，迅速備皮，外科鑷夾住皮膚輕提，外科剪沿正中線剪開(kāi)腹部皮膚，鈍性分離皮下、脂肪及肌肉組織，向上翻開(kāi)大網(wǎng)膜，游離胃組織，沿胃體向上分離胃賁門(mén)部，并用縫線結(jié)扎，同樣沿胃體向下探尋至胃幽門(mén)部并結(jié)扎。用一次性針筒斜刺入胃體內(nèi)并注射4%中性甲醛溶液2 mL，兩端結(jié)扎線向外上提起，順勢(shì)摘下小鼠全胃，浸沒(méi)在20 mL 的4%中性甲醛溶液中，固定大約30 min。輕提結(jié)扎線，沿著小鼠胃大彎側(cè)全層剖開(kāi)，暴露胃體內(nèi)部，在操作板上展開(kāi)全胃組織，頭針作周邊固定，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的氯化鈉溶液清洗胃內(nèi)容物。觀察胃黏膜的形態(tài)學(xué)變化，可見(jiàn)胃黏膜呈現(xiàn)多發(fā)的點(diǎn)狀出血或數(shù)個(gè)潰瘍?cè)?。UI評(píng)分5 分以上為造模成功的形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。體視鏡下可見(jiàn)胃黏膜充血、水腫，全胃散在多發(fā)點(diǎn)狀/片狀糜爛及出血或多個(gè)潰瘍點(diǎn)，潰瘍基底部可見(jiàn)白色或黃白色厚苔，其中個(gè)別潰瘍點(diǎn)可深達(dá)肌層甚至穿孔（見(jiàn)圖3）。

圖3 小鼠造模3 d后胃黏膜形態(tài)學(xué)變化

1.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法 電針治療結(jié)束后取小鼠全胃，評(píng)估UI評(píng)分以及檢測(cè)修復(fù)因子［三葉因子2（TFF2）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、熱休克蛋白70（HSP70）］和調(diào)控因子HIF-1α表達(dá)水平。

1.4.1 胃黏膜損傷修復(fù)的檢測(cè)指標(biāo)（UI評(píng)分） 電針治療結(jié)束后取材小鼠全胃，評(píng)估UI 評(píng)分。UI 評(píng)分：參照GUTH法［11］計(jì)算，全胃中各糜爛、出血點(diǎn)、潰瘍?cè)畹鹊拈L(zhǎng)度所對(duì)應(yīng)的分值相加之和。0 分：無(wú)損傷；1 分：1 mm以內(nèi)的損傷（包括糜爛點(diǎn)）；2 分：2～4 mm 的損傷；3 分：≥4 mm的損傷；損傷寬度>2 mm者分值加倍。

1.4.2 胃黏膜組織修復(fù)因子（TFF2、VEGF、HSP70）和調(diào)控因子HIF-1α的mRNA 表達(dá) 采用RT-qPCR 法檢測(cè)胃組織TFF2、VEGF、HSP70及HIF-1αmRNA 表達(dá)水平，取-80 ℃凍存的大鼠胃組織，以TRIzol 法提取結(jié)腸組織總RNA ，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為20 μL ，根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)操作，按條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。反應(yīng)條件：40 ℃，30～60 min；95 ℃，5 min。擴(kuò)增引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列見(jiàn)表1。PCR 反應(yīng)條件：95 ℃、5 min，95 ℃、15 s，60 ℃、30 s，40 個(gè)循環(huán)。采用Melt 曲線分析，以GAPDH 的表達(dá)為內(nèi)參，每個(gè)樣品重復(fù)3 次，擴(kuò)增結(jié)束，記錄Ct 值，按照2-ΔΔCt公式計(jì)算目的基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

表1 引物序列

1.4.3 HIF-1α 的蛋白表達(dá)水平 采用Western blot 法檢測(cè)胃組織中HIF-1α 蛋白表達(dá)。取全胃組織，用冷磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌去污，切塊置于勻漿器；加入組織后在-20 ℃冰上徹底勻漿，將勻漿液振蕩；加入RIPA裂解液，冷浴20 min，然后反復(fù)吹打，確保細(xì)胞完全裂解；12 000 r/min 離心10 min，收集上清為總蛋白溶液；再用BCA 測(cè)蛋白濃度；十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）處理45 min。轉(zhuǎn)膜：準(zhǔn)備濾紙和聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，在墊子上墊海綿、兩層濾紙，并除氣泡、打濕，25 V恒壓轉(zhuǎn)膜過(guò)夜。免疫反應(yīng)：5%的脫脂牛奶封閉1 h，4 ℃孵育一抗3 h，脫色搖床上洗3 次，每次5 min；孵育二抗，30 min，脫色搖床上洗3 次，每次5 min。化學(xué)發(fā)光：進(jìn)行顯影和定影，根據(jù)不同的光強(qiáng)度調(diào)整曝光條件，凝膠圖像分析；膠片掃描，存檔，整理去色，Alpha 軟件處理?xiàng)l帶光密度值；以β-actin 作為內(nèi)參蛋白，重復(fù)3次。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 1.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±s表示。所有數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布者，多組計(jì)量資料之間比較采用單因素方差分析，方差齊者用LSD 和SNK 法，方差不齊者用Tamhane's T2 或Dunnett's T3 法；不符合正態(tài)分布者采用多組資料的秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)UI評(píng)分的影響 與Sham 組比較，CRS 組、CRS+EA 組UI 評(píng)分顯著升高（P<0.05）。與CRS 組比較，CRS+EA 組UI 評(píng)分顯著下降（P<0.05）。上述說(shuō)明電針治療可以促進(jìn)胃黏膜損傷后的修復(fù)，減輕胃黏膜損傷。見(jiàn)表2、圖4。

表2 各組小鼠胃黏膜UI評(píng)分比較（n=6，±s，分）

表2 各組小鼠胃黏膜UI評(píng)分比較（n=6，±s，分）

注：Sham組為對(duì)照組，CRS組為模型組，CRS+EA組為模型+電針組。UI為潰瘍指數(shù)。與Sham組比較，*P<0.05；與CRS組比較，#P<0.05。

UI評(píng)分0.67±0.33 43.50±18.01*16.33±5.20*#組別Sham組CRS組CRS+EA組

圖4 各組小鼠胃黏膜的形態(tài)學(xué)變化

2.2 對(duì)TFF2、VEGF、HSP70mRNA 表達(dá)的影響 與Sham 組比較，CRS 組VEGF、HSP70mRNA 顯著升高（P<0.05），CRS 組TFF2 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），CRS+EA 組TFF2、VEGF、HSP70mRNA 顯著升高（P<0.05）。與CRS 組比較，CRS+EA 組TFF2、VEGF、HSP70mRNA 顯著升高（P<0.05）。上述說(shuō)明電針治療可以促進(jìn)修復(fù)因子TFF2、VEGF、HSP70mRNA 分泌，可能與電針增強(qiáng)胃黏膜損傷后的修復(fù)能力有關(guān)。見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠胃組織TFF2、VEGF、HSP70 mRNA的表達(dá)水平比較（2-ΔΔCt）（n=3，±s）

表3 各組小鼠胃組織TFF2、VEGF、HSP70 mRNA的表達(dá)水平比較（2-ΔΔCt）（n=3，±s）

注：TFF2 為三葉因子2 基因，VEGF 為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因，HSP70為熱休克蛋白70 基因。Sham 組為對(duì)照組，CRS 組為模型組，CRS+EA 組為模型+電針組。與Sham組比較，*P<0.05；與CRS組比較，#P<0.05。

HSP70 0.97±0.19 2.28±0.45*3.90±0.82*#組別Sham組CRS組CRS+EA組TFF2 1.21±0.82 2.08±0.74 5.23±1.39*#VEGF 1.03±0.27 2.33±0.52*3.55±0.68*#

2.3 對(duì)HIF-1αmRNA 及蛋白表達(dá)的影響 與Sham 組比較，CRS 組HIF-1αmRNA 及蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），CRS+EA 組HIF-1αmRNA 及蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.05）。與CRS組比較，CRS+EA組HIF-1αmRNA 及蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.05）。上述說(shuō)明電針能夠上調(diào)HIF-1α mRNA 及蛋白表達(dá)水平，增強(qiáng)胃黏膜損傷的修復(fù)。見(jiàn)表4、圖5。

表4 各組小鼠胃組織HIF-1α mRNA 及蛋白的表達(dá)水平（n=3，±s）

表4 各組小鼠胃組織HIF-1α mRNA 及蛋白的表達(dá)水平（n=3，±s）

注：HIF-1α 為低氧誘導(dǎo)因子-1α。Sham 組為對(duì)照組，CRS組為模型組，CRS+EA 組為模型+電針組。與Sham 組比較，*P<0.05；與CRS 組比較，#P<0.05。

HIF-1α 蛋白1.00±0.01 1.52±0.27 4.07±0.48*#組別Sham組CRS組CRS+EA組HIF-1α mRNA 1.01±0.11 1.72±0.86 5.98±1.28*#

圖5 各組小鼠胃組織HIF-1a蛋白電泳條帶

3 討論

創(chuàng)傷患者、重癥顱腦疾病患者將面臨應(yīng)激性潰瘍出血的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致血流動(dòng)力學(xué)劇烈波動(dòng)，在重癥監(jiān)護(hù)室停留時(shí)間延長(zhǎng)以及死亡風(fēng)險(xiǎn)增加［14-15］，探索其發(fā)病機(jī)制并尋找安全有效的防治方法具有重要的臨床意義。針灸可通過(guò)調(diào)節(jié)體內(nèi)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng)功能，從而溫?zé)崞⑽?、調(diào)和陰陽(yáng)、預(yù)防脾胃病，其被廣泛應(yīng)用于臨床治療胃黏膜病變，但相關(guān)的作用機(jī)制有待進(jìn)一步論證［16］。本研究通過(guò)CRS 的方法建立應(yīng)激性潰瘍小鼠模型，并采用電針治療。結(jié)果顯示，模型組小鼠胃黏膜充血、水腫，全胃散在多發(fā)點(diǎn)狀/片狀糜爛及出血，潰瘍基底部可見(jiàn)白色或黃白色厚苔，個(gè)別潰瘍點(diǎn)可深達(dá)肌層甚至穿孔，UI 評(píng)分顯著升高，提示模型建立成功；而CRS+EA 組UI 評(píng)分顯著降低。在明確證實(shí)針刺有效的前提下，我們采用分子生物學(xué)手段進(jìn)一步證實(shí)了針刺的作用機(jī)制與促進(jìn)修復(fù)因子的釋放以及HIF-1α的表達(dá)升高有關(guān)。

3.1 選穴的理論與臨床依據(jù) 足三里穴是足陽(yáng)明胃經(jīng)的合穴，它又是胃的下合穴，治療胃痛、嘔吐、腹脹、泄瀉、便秘等胃腸系統(tǒng)疾病有明確的療效?！鹅`樞·四時(shí)氣》記載：“胃氣逆則嘔苦……取三里以下胃氣?！泵鞔禅P所著《針灸大全》記載足三里穴“善治胃中寒”，而高度總結(jié)和概括該穴位主治作用的是《四總穴歌》中所述“肚腹三里留”?，F(xiàn)代實(shí)驗(yàn)研究［17］證明，針刺足三里穴具有調(diào)節(jié)腸蠕動(dòng)、提高多種消化酶活性、改善胃腸黏膜血流等作用，在防治胃病方面具有重要性、特異性、廣泛性的特點(diǎn)。臨床實(shí)踐證明，針刺足三里穴治療胃腸疾病有明顯療效。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)［18-19］亦證實(shí)針刺足三里穴對(duì)胃黏膜具有保護(hù)作用。足陽(yáng)明胃經(jīng)的郄穴是梁丘，它的主治功效主要集中在調(diào)整胃腸道蠕動(dòng)功能方面。研究［20］證實(shí)，針刺梁丘穴對(duì)于胃腸道具有雙向調(diào)節(jié)作用［1］?；谏鲜雠R床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)研究，結(jié)合中醫(yī)古代文獻(xiàn)為理論依據(jù)，本研究從中醫(yī)最常用的治療胃病穴位——足三里穴、梁丘穴為切入點(diǎn)，進(jìn)行基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究，以進(jìn)一步闡明電針對(duì)應(yīng)激性潰瘍胃黏膜修復(fù)作用的相關(guān)機(jī)制。

3.2 修復(fù)因子參與胃黏膜損傷修復(fù) 有研究［7-9］認(rèn)為，針刺、艾灸、經(jīng)皮穴位電刺激可通過(guò)增加相關(guān)修復(fù)因子的釋放，促進(jìn)應(yīng)激性潰瘍損傷的修復(fù)。修復(fù)因子VEGF可調(diào)控黏膜血管的生成，促進(jìn)胃潰瘍損傷后的修復(fù)［21］。組織因子（TFFs）又稱為三葉因子家族，分為T(mén)FF1、TFF2 和TFF3。其中，TFF2 通常由黏液分泌細(xì)胞表達(dá)于小腸和大腸，可保護(hù)胃腸內(nèi)分泌的多種酸性物質(zhì)和蛋白酶不被降解，并促進(jìn)損傷后黏膜的重建，它是損傷后的快速反應(yīng)肽［22-23］。熱休克蛋白（HSPs）是一種普遍存在且高度守恒的蛋白家族，能夠形成一種特殊機(jī)制來(lái)防止各種環(huán)境壓力和不利條件對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞，其主要功能是保護(hù)細(xì)胞、對(duì)抗壓力，維持細(xì)胞正常生理機(jī)能，增加細(xì)胞對(duì)刺激的防御和適應(yīng)能力［24］。本研究結(jié)果顯示，電針可減輕應(yīng)激性潰瘍模型小鼠的胃黏膜損傷，并促進(jìn)修復(fù)因子TFF2、VEGF、HSP70表達(dá)水平顯著升高。上述說(shuō)明電針干預(yù)的有效性主要體現(xiàn)在促進(jìn)修復(fù)因子釋放，進(jìn)而增強(qiáng)胃黏膜損傷后的修復(fù)能力。

3.3 HIF-1α 參與胃黏膜損傷修復(fù) 研究［25］發(fā)現(xiàn)，一種控制基因表達(dá)的細(xì)胞氧感應(yīng)系統(tǒng)廣泛存在于多種病理環(huán)境之中，HIF-1α 被確定為低氧轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)因子，在氧濃度正常的條件下，HIF-1α通過(guò)氧敏性HIF-1α 特異性脯氨酰羥化酶（PHD1、PHD2、PHD3）發(fā)生羥基化。當(dāng)氧濃度降低時(shí)，HIF-1α將不被羥基化，在細(xì)胞核中積累，并與HIF-1β 結(jié)合，形成HIF-1 復(fù)合體，該復(fù)合體在轉(zhuǎn)錄上變得活躍。在應(yīng)激性潰瘍胃黏膜損傷的狀態(tài)下，胃黏膜組織局部處于缺血、低氧的狀態(tài)，氧濃度下降使HIF-1α蛋白穩(wěn)定性增加，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞分化，促進(jìn)血管重建及改善缺血，進(jìn)而增強(qiáng)胃黏膜損傷后的修復(fù)作用［10］。研究［26］顯示，小鼠皮膚和黏膜損傷后的局部缺血、低氧性改變，可促進(jìn)HIF-1α 蛋白穩(wěn)定，激活體液因子的分泌與表達(dá)，其中最為顯著的是VEGF。此外，Tsuchida 等［27］證實(shí)，將家兔的軟骨細(xì)胞置于低氧環(huán)境中，可通過(guò)刺激HIF-1α 的大量生成，誘導(dǎo)HSP70 的高度表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞生成、減少凋亡。本研究結(jié)果顯示，通過(guò)電針干預(yù)模型小鼠，可減輕其胃黏膜損傷，顯著降低UI評(píng)分，顯著升高HIF-1α 表達(dá)。上述說(shuō)明電針對(duì)HIF-1α 具有一定的調(diào)控作用，電針干預(yù)可能通過(guò)上調(diào)HIF-1α 的表達(dá)水平，增強(qiáng)應(yīng)激性潰瘍后胃黏膜損傷的修復(fù)作用。

3.4 小結(jié) 本研究證實(shí)，電針促進(jìn)應(yīng)激性潰瘍胃黏膜損傷的修復(fù)能力與HIF-1α 的上調(diào)、以及修復(fù)因子（TFF2、VEGF、HSP70）的表達(dá)增強(qiáng)有關(guān)，但這種相關(guān)性是否具有因果關(guān)系，抑或電針是如何通過(guò)上游調(diào)控機(jī)制來(lái)上調(diào)HIF-1α的表達(dá)，促進(jìn)修復(fù)因子的釋放，增強(qiáng)應(yīng)激性潰瘍胃黏膜損傷修復(fù)，這些尚有待進(jìn)一步的基礎(chǔ)研究來(lái)證實(shí)。

綜上所述，電針治療可以促進(jìn)應(yīng)激性潰瘍小鼠修復(fù)因子的釋放，促進(jìn)胃黏膜損傷后的修復(fù)，顯著上調(diào)HIF-1α表達(dá)水平。本研究結(jié)果有助于推動(dòng)電針應(yīng)用于應(yīng)激性潰瘍的臨床治療，并為進(jìn)一步優(yōu)化針刺對(duì)低氧誘導(dǎo)因子為關(guān)鍵調(diào)控靶點(diǎn)的電針穴位治療提供科學(xué)依據(jù)。