李文平，郭延輝，張 鴻，權(quán)心嬌，付曉霞，王雨千*

1.榆樹市畜牧總站，吉林榆樹 130400；2.長春市乾藝生物科技研究院，吉林長春 136100；3.吉林省畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，吉林長春 130111；4.長春市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林長春 130111

布氏桿菌病病原是布氏桿菌，該病是一種多種動(dòng)物和人畜共患傳染病，不僅危害畜牧業(yè)發(fā)展而且損害人類健康，因此備受關(guān)注。而梅花鹿對(duì)牛、羊兩種類型的布氏桿菌最易感染。至今發(fā)現(xiàn)的病例中，以牛型占比最多，還沒有單獨(dú)的鹿型，這說明鹿布氏桿菌病應(yīng)該是由其它動(dòng)物傳播而發(fā)病，最可能就是從牛傳染給鹿。該病在一定條件下發(fā)生傳染，最主要經(jīng)消化道或者是經(jīng)皮膚傷口，或者是經(jīng)過黏膜感染，可通過氣溶膠傳播，所以呼吸道也是傳染的一個(gè)重要渠道。動(dòng)物或是人感染本病后，病菌主要侵害生殖系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)。感染公鹿通常發(fā)生睪丸炎和附睪炎，導(dǎo)致公鹿精子少，或是無精，從而失去配種能力。母鹿一般是發(fā)生流產(chǎn)和乳腺炎。母鹿流產(chǎn)大多是在第一胎，第二胎一般不表現(xiàn)流產(chǎn)癥狀，而是表現(xiàn)出胎兒弱小，或者畸形、病胎，仔鹿很難成活。分娩的物質(zhì)和奶液中含有大量布氏桿菌病原。

伴隨牛、羊、豬和狗等動(dòng)物布病被確診后，鹿的布氏桿菌病在1940 年被首次發(fā)現(xiàn)，并發(fā)展至今，全世界持續(xù)有報(bào)道的病例，并且該病發(fā)病率持續(xù)上升，發(fā)病的范圍逐漸擴(kuò)大直至發(fā)展到170 多個(gè)國家。該病的致病力也發(fā)生了變異，變異方向向更隱蔽更大的范圍發(fā)展，這給全世界人民開展防治布氏桿菌病造成了很多的障礙和困難，也給全世界帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。筆者現(xiàn)將經(jīng)歷的一例病例報(bào)告如下。

1 發(fā)病情況

2021 年5 月，在吉林省某鹿養(yǎng)殖戶的鹿群中，發(fā)現(xiàn)一頭初產(chǎn)的母鹿有生產(chǎn)癥狀，頻頻回顧腹部，四處游走，陰門有不清亮液體流出，過了2 h 還未產(chǎn)出，只有一個(gè)小蹄子時(shí)隱時(shí)現(xiàn)。決定助產(chǎn)，用吹針肌肉注射陸眠寧1 cm，母鹿在5 min 后麻醉臥倒后，術(shù)者雙手消毒并涂上液體石蠟后陰道探查，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)道開口不全，打催產(chǎn)針后，手臂勉強(qiáng)伸進(jìn)一半，發(fā)現(xiàn)有一只鹿腳可以碰到，將姿勢擺正，用產(chǎn)繩拴住鹿雙腿腕部，牽引助產(chǎn)，勉強(qiáng)牽引出仔鹿后，發(fā)現(xiàn)仔鹿已經(jīng)死亡，有惡臭味，胎兒有敗血癥病變，胎衣有黃色膠樣浸潤。懷疑感染布氏桿菌，遂決定做布氏桿菌病檢測。

2 初步檢測

2.1 檢測原理

布氏桿菌抗體快速檢測試紙基于膠體金免疫層析技術(shù)。檢測時(shí)，樣品中的布氏桿菌抗體與膠體金包被的抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，并沿著試紙流向NC膜的另一端。當(dāng)該復(fù)合物流到膜上的T區(qū)時(shí)，固定在膜上的特異性抗原捕獲該復(fù)合物并逐漸凝集成一條可見的T 線。C 線出現(xiàn)則表明免疫層析發(fā)生，即試紙有效；T 線出現(xiàn)則表明樣品中含有布氏桿菌抗體。

2.2 保存和穩(wěn)定性

試紙卡于室溫陰涼干燥處保存，不可冷凍，避免陽光直曬，自生產(chǎn)日期起18 個(gè)月內(nèi)有效。

2.3 測試步驟

2.3.1 采血1 mL，1 500 轉(zhuǎn)/min，離心(樣品若不能立即測試，應(yīng)冷藏保存，超過24 h，應(yīng)冷凍保存)。

2.3.2 將未開封的試紙卡和檢測樣品恢復(fù)至室溫。

2.3.3 用吸管吸取血清，向平坦放置的試紙卡加樣孔中緩慢滴入1 滴。

2.3.4 取出試紙卡包裝中的稀釋液，用吸管吸取，向試紙卡的加樣孔緩慢滴入2 滴。

2.3.5 5 min 判斷結(jié)果，10 min 后的結(jié)果無效。2.4 結(jié)果判斷

陽性：C 線顯示紅色的色帶，T 線也顯示紅色的色帶，無論顏色深淺結(jié)果均判斷為陽性。

陰性：C 線顯示紅色的色帶，T 線不顯示紅色的色帶，判為陰性。無效：C 線不顯示紅色的色帶，無論T 線是否顯示紅色的色帶，該試紙均判為無效。

該母鹿經(jīng)檢測結(jié)果為陽性，初步判斷該母鹿感染了布氏桿菌病。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測

鑒于布氏桿菌病有可能由實(shí)驗(yàn)室感染，所以，按照規(guī)定凡涉及本病的樣本檢測，均應(yīng)在生物安全2 級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，凡涉及本菌的培養(yǎng)，則需要在生物安全3 級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)操作。因條件有限，該病細(xì)菌學(xué)檢查沒有去做。

3.1 血清學(xué)檢查

用已知抗體可以鑒定分離菌是否為布氏桿菌及其定型。普遍和實(shí)用的檢測方式目前還是依賴于血清學(xué)檢測。通?？贵w在動(dòng)物感染7 ～15 d 后出現(xiàn)。臨床癥狀出現(xiàn)后，證明感染已經(jīng)達(dá)到可以檢測到抗體的時(shí)間。

首先利用虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）檢測，虎紅平板凝集試驗(yàn)使用的虎紅抗原（pH3.65 左右），能抑制引起非特異性反應(yīng)的IgM 和增強(qiáng)特異性IgG的活性，特異性優(yōu)于試管凝集試驗(yàn)。一般血清凝集價(jià)達(dá)到1:100 時(shí)判為陽性。操作方法：病鹿頸靜脈采血5 mL 左右放置于試管中并離心，待分離血清后，在水浴鍋滅活后冷藏冰箱保存?zhèn)溆?。?jīng)檢測該樣品結(jié)果為陽性。

3.2 ELISA 復(fù)檢

采取母鹿的全血5 mL,室溫自然凝固10 min，離心15 min（2 000 轉(zhuǎn)/min），小心收集上清液，保存過程中如果出現(xiàn)沉淀，再離心取上清液。用該樣本，采用ELISA 方法檢測布氏桿菌抗體檢測，檢測結(jié)果陽性。通過畜主詢問，得知該母鹿未接種過布氏桿菌疫苗。

綜合以上試驗(yàn)檢測及臨床癥狀，可以判斷該鹿感染了布氏桿菌病野毒,其傳播途徑未知。

4 處理方法

4.1 該母鹿4 歲，初產(chǎn)母鹿，分析是近半年以來該母鹿感染了布氏桿菌病，除本次發(fā)生流產(chǎn)、難產(chǎn)癥狀以外，未發(fā)現(xiàn)明顯的其它癥狀。該鹿體重正常，在難產(chǎn)前經(jīng)飼養(yǎng)員回憶，有過吃料不積極的現(xiàn)象，喜趴臥，有時(shí)在圈舍內(nèi)疾走，總體表現(xiàn)癥狀不夠明顯。

4.2 首先將該圈鹿隔離飼養(yǎng)，將該圈原地隔離，周圍相鄰圈舍內(nèi)鹿全部清空，保持該圈鹿和其它鹿不接觸；有專門的飼喂人員、飼喂的飼料，以及用具都單獨(dú)區(qū)分出來使用。

4.3 對(duì)該圈舍全體鹿采用布氏桿菌試紙條做布氏桿菌檢測，其中又發(fā)現(xiàn)一例陽性，經(jīng)虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）和ELISA 進(jìn)一步檢測，確診該鹿也感染布氏桿菌病。4.4 因?yàn)椴际蠗U菌病是國家乙類傳染病，無特殊治療藥物，動(dòng)物感染后，只能控制癥狀，并防止疾病傳播感染其它動(dòng)物。所以，對(duì)患病的兩只母鹿做無公害處理。

4.5 對(duì)產(chǎn)出的流產(chǎn)胎兒、胎衣、羊水和少量產(chǎn)道分泌物通過深埋的方式進(jìn)行處理。對(duì)全圈舍用3%的火堿徹底消毒，連續(xù)消毒3 d；取漂白粉2 kg，加水8 kg，充分?jǐn)噭?，即?0%的漂白粉混懸液，消毒鹿糞及糞溝，連用3 d。

4.6 10 d 后，對(duì)該圈母鹿再做一次布氏桿菌試紙條檢測，結(jié)果全部是陰性。一個(gè)月后又檢測，還是陰性。以后每隔3 個(gè)月做一次布病檢測，直至連續(xù)6 個(gè)月內(nèi)無新增的病例。同時(shí)，叮囑飼養(yǎng)人員重點(diǎn)觀察，并戴好口罩手套，做好個(gè)人防護(hù)。

5 討論

5.1 布氏桿菌病目前檢測手段主要有病原檢測、虎紅平板凝集（RBT）、試管凝集（SAT）、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)（CFT）、全乳環(huán)狀試驗(yàn)、免疫層析（膠體金、銀光微球、彩色微球）、瓊脂擴(kuò)散、熒光偏振（FPA）、ELISAD 等方法。目前臨床最實(shí)用就是膠體金試紙檢測技術(shù)和虎紅平板凝集方法，該方法優(yōu)點(diǎn)是價(jià)格低、使用簡單、可操作性強(qiáng)；目前最先進(jìn)的方法是熒光偏振的方法，該方法可以將免疫產(chǎn)生的抗體和野毒產(chǎn)生的抗體區(qū)別開來，從而辨別出該動(dòng)物是否感染了布氏桿菌病野毒，特異性檢出率可以達(dá)到99.1%。

5.2 主要采取以預(yù)防接種布氏桿菌疫苗為主，檢疫隔離或淘汰為輔是我國布氏桿菌病的主要防制措施。當(dāng)前使用比較多的疫苗有牛型19 號(hào)弱毒活苗和豬源菌株經(jīng)培養(yǎng)基連續(xù)傳代致弱的S2 株弱毒活菌苗；滅活苗有牛布氏桿菌45/20 和羊布氏桿菌53H38 菌苗，鹿群防制布氏桿菌主要接種布氏桿菌S2 菌苗。

布氏桿菌病的疫苗研究還存在許多的問題。弱毒疫苗要注意免疫抑制問題，也就是說弱毒疫苗并非菌數(shù)越多產(chǎn)生的免疫效果越好。布氏桿菌的特點(diǎn)是會(huì)使機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制，從而使機(jī)體在免疫后處于免疫低水平狀態(tài)，繼而繼發(fā)其它疾病。

無論是野毒感染還是弱毒疫苗免疫，其導(dǎo)致的免疫抑制問題會(huì)存在，必須值得注意，這也是該病流行多年，具有難治愈、難凈化、傳染快、隱形傳播的一種原因，值得獸醫(yī)臨床上考慮。

5.3 消滅或控制布氏桿菌病的傳播，首先應(yīng)用疫苗免疫。在疫苗免疫的同時(shí)兼顧大型養(yǎng)殖鹿場的疾病凈化，切斷傳播的途徑，有規(guī)律的檢測梅花鹿群體，有計(jì)劃的撲殺病鹿，對(duì)易感染人群做好個(gè)人防護(hù)。這些所有的工作，也都需要大量的布病凈化技術(shù)培訓(xùn)、推廣以及政策的引導(dǎo)和支持。