唐天培，黃自偉，張娜娜，閆博文*，趙建新，張 灝，陳 衛(wèi)，范大明

（1 江南大學食品學院 江蘇無錫 214122 2 泰安市強德食品有限公司 山東泰安 271000）

糖尿病是一種以高血糖為特征的代謝性疾病，主要分為1 型糖尿病（type 1 diabetes，T1D）、2型糖尿病（type 2 diabetes，T2D）和妊娠期糖尿?。╣estational diabetes mellitus，GDM）[1]。其中2 型糖尿病是最常見的糖尿病類型，占到所有糖尿病病例的90%以上。目前，對2 型糖尿病的臨床治療主要使用雙胍類、磺脲類、噻唑烷酮類和糖苷酶抑制劑等藥物[2]。此外，飲食控制也是治療2 型糖尿病的重要環(huán)節(jié)。以雜糧谷物制品為代表的低升糖指數(shù)（GI）食品能有效減緩餐后血糖的迅速上升，調(diào)節(jié)胰島素反應，近年來受到越來越多的關注。

山東煎餅作為我國北方地區(qū)的傳統(tǒng)主食之一，主要由玉米、小米、高粱等雜糧制成。山東煎餅的制作過程雖較為簡單但極需技巧，將谷物原料浸泡一段時間后，研磨成面糊，經(jīng)發(fā)酵或不發(fā)酵，在鏊子上用刮板快速均勻地攤制成薄薄的圓餅[3]。高溫、短時、低水分接觸的加工方式使得山東煎餅的淀粉糊化度顯著低于饅頭、干飯、粥等其它主食。淀粉糊化度越低，進食后消化吸收速度越慢，有利于減緩餐后血糖反應[4]。因此，山東煎餅因獨特的加工方式和雜糧谷物原料而被認為是適合糖尿病患者食用的主食。

酸面團是由谷物和水的混合物經(jīng)有活性的微生物（如酵母菌和乳酸菌）發(fā)酵后的產(chǎn)物，又被稱為“酵子”或“老面”，在米面食品的加工中通常被當作“引子”以促進米面食品的發(fā)酵[5]。酸面團技術不僅可以改善食品的質構和風味，也能賦予食品一定的功能特性。有研究表明，用乳酸菌酸面團發(fā)酵小麥和黑麥粉可以降低全麥面包的淀粉消化率[6]，這可能與酸面團發(fā)酵能降低淀粉糊化度相關。此外，在酸面團發(fā)酵過程中，乳酸菌通過糖基水解酶的催化合成大量的有機酸和胞外多糖。有機酸尤其是乳酸能降低淀粉消化率，乙酸和丙酸能延遲胃排空時間[7]。很多研究報道了多糖對糖尿病的緩解作用，主要集中在植物多糖如燕麥多糖、枸杞多糖和桑葉多糖等，而關于乳酸菌胞外多糖對糖尿病影響的研究較少。部分體外試驗表明，乳酸菌胞外多糖具有潛在的降血糖活性[8]。也有研究指出植物乳桿菌X1 的無細胞上清液通過抑制α葡萄糖苷酶活性顯示出潛在的抗糖尿病能力[9]。為了充分了解植物乳桿菌酸面團發(fā)酵對山東煎餅抗糖尿病特性的影響，需進行體內(nèi)試驗。

本研究以高脂飲食結合鏈脲佐菌素誘導的T2D 小鼠為試驗對象，研究植物乳桿菌發(fā)酵酸面團山東煎餅對T2D 小鼠體重、血糖、胰島素抵抗、血脂、胰腺組織、短鏈脂肪酸水平及腸道菌群等方面的影響，為開發(fā)適合糖尿病患者的功能性主食提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

玉米：購自中國無錫歐尚超市。

試劑：鏈脲佐菌素（STZ），美國Sigma 公司；60%高脂飼料，南通特洛菲飼料科技有限公司；二甲雙胍，阿拉丁試劑有限公司；蔗糖、牛肉膏、葡萄糖、酵母粉、乙酸鈉、檸檬酸氫二銨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、吐溫80、無水乙醇、乙醚、濃硫酸、乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、戊酸，國藥集團化學試劑有限公司；胰島素檢測試劑盒，南京森貝伽生物科技有限公司；總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒，南京建成生物工程研究所；PCR擴增引物及合成序列，上海生工生物工程有限公司；FastDNA Spin Kit for Feces 糞便基因組提取試劑盒，美國MP 公司；QIAquick Gel Extraction Kit 膠純化回收試劑盒，德國Qiagen 公司。

1.2 儀器與設備

恒溫恒濕培養(yǎng)箱，上海森信實驗儀器有限公司；膠體磨，河北廊坊科技有限公司；羅氏活力型血糖儀和血糖試紙，美國羅氏有限公司；MLS-3750 高壓蒸汽滅菌鍋，日本Sanyo 公司；5415R 型臺式高速冷凍離心機，德國Eppendorf 公司；SWCJ-1FD 型超凈工作臺，上海智誠科技有限公司；Leica ASP300S 型全自動脫水機、Leica RM2245型半自動切片機，德國LEICA 公司；Pannoramic MIDI 型組織切片掃描儀，匈牙利3D Histech Kft公司；1300-ISQ 型Thermo/Trace GC-MS、3020 型多功能酶標儀，美國Thermo 公司；PE300 型MiSeq高通量測序平臺，美國Illumina 公司；2100 型Agilent（安捷倫）生物分析儀，美國Agilent 科技有限公司。

1.3 菌懸液的制備

植物乳桿菌X1 因其高產(chǎn)胞外多糖的特性和潛在的降血糖能力[9-10]被選擇用來發(fā)酵酸面團，其由江南大學食品生物技術中心菌種庫提供。菌株通過劃線分離，挑取單菌落于液體MRS 培養(yǎng)基中，于37 ℃條件下培養(yǎng)18 h，再按2%接種量在液體MRS 培養(yǎng)基中37 ℃二代培養(yǎng)18 h。然后接種于液體MRS 培養(yǎng)基中37 ℃培養(yǎng)24 h 進行擴培。將擴培好的植物乳桿菌X1 在4 ℃，6 000 r/min 條件下離心10 min，所得菌泥用無菌水通過菌落計數(shù)方法調(diào)整活菌量在109CFU/mL 得到菌懸液，用于接下來的酸面團發(fā)酵。

1.4 酸面團發(fā)酵及山東煎餅的制備

將玉米按1∶1.2（質量比）浸泡在水中6 h，然后用膠體磨研磨成玉米面糊。將上述菌懸液加入面糊中混勻達到最終濃度108CFU/g，然后37 ℃發(fā)酵12 h 獲得酸面團（pH 3.72±0.10，1010CFU/g）。

未發(fā)酵山東煎餅是用100%未發(fā)酵玉米面糊在鏊子上攤制而成（140 ℃，40 s）。發(fā)酵山東煎餅是用80.0%的未發(fā)酵玉米面糊和20.0%的酸面團混合均勻后在鏊子上攤制而成（140 ℃，40 s）。

1.5 動物實驗方案設計

所有動物實驗的操作均嚴格遵守江南大學動物管理和使用委員會的章程（SYXK 2012-0002）。動物實驗的倫理審核號為 JN.No20210615c0600922[189]。60 只C57BL/6J 小鼠（SPF 級，雄性，3 周齡）購自北京維通利華實驗動物技術有限公司。適應性喂養(yǎng)1 周后，隨機分為空白組（8 只）飼喂正常小鼠飼料和糖尿病造模組（52 只）飼喂60%高脂飼料。4 周高脂飼料喂養(yǎng)后糖尿病組52 只小鼠禁食不禁水12 h，腹腔注射STZ 溶液（100 mg/kg 體重，溶于0.1 mol/L 檸檬酸鹽緩沖液，pH 4.5），同時空白組小鼠注射檸檬酸鹽緩沖液。繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)1 周后，測定空腹血糖（FBG），F(xiàn)BG＞11.1 mmol/L 即為造模成功[11]。

將造模成功的32 只T2D 小鼠隨機分成4組，每組8 只，分別是模型組（MC）、陽性對照組（PC）、未發(fā)酵煎餅組（NFP）和發(fā)酵煎餅組（FP）?？瞻捉M（NC）為正常小鼠始終飼喂標準飼料，模型組（MC）為T2D 小鼠飼喂標準飼料，陽性對照組（PC）為T2D 小鼠飼喂標準飼料同時每天灌胃二甲雙胍（200 mg/kg 體重），未發(fā)酵煎餅組（NFP）和發(fā)酵煎餅組（FP）為T2D 小鼠分別飼喂未發(fā)酵山東煎餅和發(fā)酵山東煎餅制成的飼料（煎餅樣品凍干后由江蘇協(xié)同生物有限公司按73%的對應樣品加27%的標準飼料制成棒狀飼料）。干預持續(xù)6周，小鼠可以自由獲得食物和水。每周禁食12 h后記錄體重。實驗結束前，用2 mL 滅菌干燥EP 管收集新鮮糞便樣本，立即冰上放置，并迅速轉移到-80 ℃的冰箱中。小鼠禁食不禁水12 h 后腹腔注射戊巴比妥鈉溶液麻醉（0.5 mL/10 g 體重），摘除眼球取血后頸椎脫臼處死。血液在4 ℃，3 000 r/min 離心15 min，收集血清保存在-80 ℃冰箱中。胰腺組織用4 ℃預冷的生理鹽水漂洗后固定在4%多聚甲醛溶液中。

1.6 空腹血糖、胰島素和胰島素抵抗指數(shù)的檢測

每周一小鼠禁食不禁水12 h 后采用尾部取血方式，使用羅氏血糖儀檢測空腹血糖值。

胰島素水平的檢測采用胰島素檢測試劑盒，檢測方法按照說明書進行。

胰島素抵抗指數(shù)按下列公式計算：

胰島素抵抗指數(shù)=（空腹胰島素含量×空腹血糖值）/22.5

1.7 血脂分析

總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）水平使用試劑盒測定。

1.8 胰腺組織病理學分析

用4%多聚甲醛溶液固定的胰腺組織經(jīng)過夜洗滌后，脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色。觀察并拍攝組織具有代表性的顯微照片。

1.9 糞便短鏈脂肪酸含量的測定

小鼠糞便凍干后稱取約50 mg 糞便樣品加入0.5 mL 飽和NaCl 溶液，再用20 μL H2SO4溶液酸化后加入1 mL 乙醚旋渦萃取，混合物12 000 r/min 離心15 min 并脫水后得到上層乙醚相，用氣質聯(lián)用儀（GC-MS）儀器測定乙酸、丙酸、丁酸等短鏈脂肪酸的含量。

1.10 腸道菌群的測定

小鼠糞便中細菌基因組的提取按照Fast DNA Spin 試劑盒說明書進行。對細菌16S rDNA的V4 區(qū)進行PCR 擴增，擴增產(chǎn)物進行1.2%瓊脂糖凝膠電泳，電壓120 V，30 min。按照膠回收試劑盒的說明書進行V4 區(qū)PCR 產(chǎn)物的膠回收。按等質量濃度原則混樣并用MiSeq 測序儀上機測序。獲得下機數(shù)據(jù)地址后，利用SSH Secure Shell Client 軟件進行數(shù)據(jù)提取和合并。去除嵌合體序列，進行OTU 聚類，選取OTU 代表性序列以進行后續(xù)分析。通過對序列進行分類，制定biom 格式的OTU 表。根據(jù)otu_table.biom 進行α、β 多樣性和腸道菌群門屬水平種類與豐度的分析。

1.11 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示，用SPSS 的單因素ANOVA 和鄧肯式多重比較對各組數(shù)據(jù)的差異進行分析，不同字母標注代表具有顯著差異（P＜0.05）。

2 結果與分析

2.1 空腹體重

小鼠空腹體重的變化如圖1a 所示。在6 周的干預過程中，空白組小鼠的體重不斷增加，而所有T2D 小鼠均出現(xiàn)體重減輕的典型病理特征[17]。陽性組小鼠從第2 周開始，體重開始回升并保持相對穩(wěn)定，說明二甲雙胍能緩解T2D 小鼠的體重快速下降。發(fā)酵煎餅組小鼠體重下降的幅度低于模型組和未發(fā)酵煎餅組，但這3 組小鼠的體重之間沒有顯著性差異（P＞0.05）。

圖1 飲食干預期間小鼠空腹體重（a）和空腹血糖（b）水平的變化Fig.1 Changes in fasting body weight（a）and fasting blood glucose（b）levels of mice during the dietary intervention

2.2 空腹血糖

空腹血糖是T2D 最常規(guī)的檢測指標，能夠反映患者糖代謝情況及胰島β 細胞功能狀態(tài)[12]。由圖1b 可知，在干預開始前，T2D 小鼠的空腹血糖值均明顯高于空白組小鼠（P＜0.05）。6 周的干預過程中，空白組小鼠空腹血糖值始終正常且穩(wěn)定，而模型組和未發(fā)酵煎餅組小鼠空腹血糖值始終保持上升趨勢。發(fā)酵煎餅組小鼠的空腹血糖值在干預后期（4～6 周）上升趨勢逐漸減緩甚至開始下降，表明發(fā)酵煎餅具有一定的降血糖作用。有研究表明，有活性的和經(jīng)過高溫處理殺死的乳酸菌均表現(xiàn)出一定程度的降低T2D 小鼠空腹血糖和餐后血糖的能力[13]。因此，發(fā)酵煎餅組觀察到的小鼠空腹血糖的下降可能與死菌和酸面團發(fā)酵過程中高產(chǎn)的胞外多糖等發(fā)酵產(chǎn)物有關，即使在煎餅加工過程中高溫殺死了絕大多數(shù)的活菌。

2.3 胰島素和胰島素抵抗

胰島素是由胰腺β 細胞分泌的一種參與血糖調(diào)節(jié)的蛋白質激素。胰島素抵抗是T2D 典型的特征，主要表現(xiàn)為胰島素敏感性下降，胰島素過度積累卻沒有發(fā)揮降血糖的作用[14]。如圖2a 和2b 所示，模型組小鼠的胰島素水平和胰島素抵抗指數(shù)均顯著高于空白組（P＜0.05），表明模型組小鼠出現(xiàn)了嚴重的胰島素抵抗。與模型組和未發(fā)酵煎餅組相比，發(fā)酵煎餅組小鼠的胰島素抵抗指數(shù)顯著降低（P＜0.05），表明發(fā)酵煎餅的干預在一定程度上可以改善T2D 小鼠的胰島素抵抗。有研究報道過，灌胃植物乳桿菌K68 發(fā)酵的果蔬汁比單純灌胃植物乳桿菌K68 或果蔬汁更能降低糖尿病大鼠的胰島素抵抗[15]。植物乳桿菌發(fā)酵果蔬汁過程中額外產(chǎn)生的胞外多糖可能是發(fā)酵果蔬汁更能改善胰島素抵抗的原因，這與我們觀察到的試驗結果相一致。

圖2 發(fā)酵煎餅對小鼠胰島素水平（a）和胰島素抵抗（b）的影響Fig.2 Effect of FP on insulin level（a）and homeostasis model assessment of insulin resistance（b）in mice

2.4 血脂

血脂異常也是T2D 的常見特征，通常通過血清TC、TG、HDL-C 和LDL-C 來表征。由表1 可知，相比于空白組，模型組小鼠的血脂異常主要表現(xiàn)為TC、TG 和LDL-C 的顯著升高（P＜0.05），而HDL-C 顯著降低（P＜0.05）[9]。與模型組相比，發(fā)酵煎餅組小鼠的LDL-C 水平?jīng)]有顯著性差異（P＞0.05），但TC 和TG 水平顯著降低（P＜0.05），HDLC 水平顯著升高（P＜0.05），表明長期飼喂發(fā)酵煎餅雖然沒有達到全面調(diào)節(jié)T2D 小鼠血脂4 項的效果，但在一定程度上改善了血脂異常的狀態(tài)。

表1 發(fā)酵煎餅對小鼠血脂的影響Table 1 Effect of FP on levels of serum lipids in mice

2.5 胰腺組織病理學分析

胰島損傷是高脂飲食和STZ 誘導T2D 小鼠模型的一個重要組織學特征。在模擬T2D 模型中，胰島細胞的損傷主要是由STZ 引起的[16]。各組小鼠胰腺組織切片HE 染色結果如圖3 所示?？瞻捉M小鼠胰島呈規(guī)則的圓形或近圓形，輪廓清晰，胰島細胞數(shù)目豐富，形態(tài)飽滿且排列整齊[17]。而模型組小鼠的胰島受到了嚴重的損傷，胰島體積變小，結構皺縮，分布較松散，胰島細胞數(shù)量減少，細胞空泡化現(xiàn)象嚴重。陽性藥物二甲雙胍對T2D 小鼠的胰島萎縮有明顯的緩解作用。與模型組和未發(fā)酵煎餅組相比，發(fā)酵煎餅組小鼠胰島受損情況得到了一定程度的改善，胰島大小顯著恢復，胰島細胞數(shù)量顯著增加。此外，胰島的形態(tài)和結構也趨向于完整[16，18]。

圖3 發(fā)酵煎餅對小鼠胰腺組織的影響（放大倍數(shù)，400×）Fig.3 Effect of FP on the pancreas in mice（magnification，400×）

2.6 短鏈脂肪酸

短鏈脂肪酸是未消化的淀粉和纖維經(jīng)過厭氧微生物發(fā)酵的主要產(chǎn)物，包括乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸和戊酸等，在調(diào)節(jié)腸道健康、保護腸道微生態(tài)平衡方面發(fā)揮著重要的作用[16]。不同干預組小鼠糞便中短鏈脂肪酸的水平如圖4 所示，模型組小鼠5 種短鏈脂肪酸的水平都低于空白組，這與Wang 等[17]報道的結果相一致。與模型組相比，未發(fā)酵煎餅組的丙酸、丁酸水平顯著升高（P＜0.05），這可能與玉米作為煎餅的原料粗纖維含量較高相關。發(fā)酵煎餅組5 種短鏈脂肪酸的水平均高于未發(fā)酵煎餅組和模型組，尤其是異丁酸和戊酸表現(xiàn)出顯著性的差異（P＜0.05）。有研究表明，補充植物乳桿菌NCU116 發(fā)酵胡蘿卜汁的大鼠糞便中短鏈脂肪酸水平顯著高于補充未發(fā)酵胡蘿卜汁[18]。類似于發(fā)酵胡蘿卜汁體系，植物乳桿菌發(fā)酵酸面團過程中同樣產(chǎn)生大量胞外多糖，這些多糖在腸道內(nèi)經(jīng)過厭氧微生物發(fā)酵產(chǎn)生一定量的短鏈脂肪酸因而導致了我們觀察到的結果。據(jù)報道，乙酸可以降低食欲，抑制體內(nèi)脂肪堆積[17]。丙酸可以降低膽固醇和甘油三酯水平，提高胰島素敏感性，從而改善葡萄糖代謝[19]。補充丁酸可以緩解小鼠的胰島素抵抗并增加能量消耗。此外，丁酸已被證明能激活胚胎干細胞中調(diào)節(jié)胰腺早期發(fā)育的基因，從而增加胰腺β 細胞的分化和胰島素相關基因的表達[20]。因此，可以推測，酸面團發(fā)酵煎餅能改善T2D 小鼠糖脂代謝紊亂，進一步緩解胰島素抵抗，可能是通過調(diào)控短鏈脂肪酸水平實現(xiàn)的。

圖4 發(fā)酵煎餅對小鼠糞便短鏈脂肪酸含量的影響Fig.4 Effect of FP on fecal short-chain fatty acids content in mice

2.7 腸道菌群

T2D 的發(fā)生發(fā)展與腸道菌群有著密切的聯(lián)系，飲食對腸道菌群結構的形成也起著至關重要的作用，不同飲食干預對T2D 小鼠腸道菌群α 多樣性的影響如圖5 所示，包括Shannon，Evenness，F(xiàn)aith_pd 和Observed_otus。相比于模型組，發(fā)酵煎餅組的Shannon 指數(shù)和Observed_otus 均有上升，表明長期飼喂發(fā)酵煎餅可以提高T2D 小鼠腸道菌群的多樣性和豐富度。為了更直觀地了解不同干預組小鼠腸道菌群組成的差異情況，我們對各組樣本的所有分類水平結果進行了主坐標成分（PCoA）分析如圖6 所示。空白組和模型組完全分開，沒有重疊，說明高脂飲食和STZ 注射造模導致模型組小鼠的腸道菌群結構發(fā)生了顯著變化。未發(fā)酵煎餅的干預對T2D 小鼠的菌群結構產(chǎn)生一定的影響，但沒有顯著差異。發(fā)酵煎餅組與陽性組產(chǎn)生較大重疊，即其腸道菌群表現(xiàn)出與陽性組較大的相似性，且其與未發(fā)酵煎餅組和模型組的差異顯著，表明發(fā)酵煎餅干預在一定程度上改善了小鼠腸道菌群多樣性，這可能有助于緩解糖尿病[21]。

圖5 發(fā)酵煎餅對α 多樣性指數(shù)的影響Fig.5 Effect of FP on α diversity index

圖6 發(fā)酵煎餅對β 多樣性的影響Fig.6 Effect of FP on β diversity

圖7 顯示了各組在門水平上的相對豐度，小鼠的腸道微生物主要由厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、變形菌門（Proteobacteria）和放線菌門（Actinobacteria）組成。與之前的報道一致[17]，相比于空白組，模型組小鼠腸道微生物中厚壁菌門相對豐度上升，擬桿菌門相對豐度下降，厚壁菌門/擬桿菌門的值升高，變形菌門相對豐度增加。厚壁菌門/擬桿菌門的值已被證明與血糖水平呈正相關[22]。與模型組相比，發(fā)酵煎餅組的小鼠厚壁菌門相對豐度下降，擬桿菌門相對豐度上升，厚壁菌門/擬桿菌門的值降低，這與發(fā)酵煎餅組小鼠觀察到的較低的血糖水平相符合。

圖7 不同組別小鼠腸道菌群門水平變化Fig.7 Changes at phylum level of mice fecal microbiota in different groups

圖8a 顯示了各組在屬水平上的相對豐度。為明確飲食干預對小鼠屬水平上的腸道菌群造成的影響，采用LEfSe 對不同組小鼠的腸道菌群進行差異性分析（設定LDA 值大于4），結果如圖8b 所示。陽性組的標記菌屬為擬桿菌屬，擬桿菌屬是重要的短鏈脂肪酸產(chǎn)生菌[23]，許多證據(jù)表明機體腸道微生物自發(fā)形成的短鏈脂肪酸對宿主健康具有十分重要的作用，二甲雙胍緩解T2D 的良好作用可能與其提高產(chǎn)短鏈脂肪酸菌群的豐度密切相關。未發(fā)酵煎餅組的標記菌屬為糞桿菌屬和副沙門氏菌屬，發(fā)酵煎餅組的標記菌屬為乳桿菌屬和脫硫弧菌屬。據(jù)報道，乳桿菌屬豐度的增加可促進胰島素的分泌，在T2D 患者中乳桿菌屬的比例與血糖水平呈負相關[23]。此外，乳桿菌屬能增強膽汁水解酶的活性，增加糞便中脂類的排泄，減少脂類堆積[24]，這與本研究中觀察到的發(fā)酵煎餅組小鼠血脂的改善相符合。因此，乳桿菌屬可能是調(diào)節(jié)T2D 小鼠血糖水平，緩解血脂異常的靶向菌之一。Yan 等[11]也報道過嗜酸乳桿菌干預導致T2D 小鼠脫硫弧菌屬豐度的增加，脫硫弧菌屬是人體腸道中主要的硫酸鹽還原菌，雖然有研究推測脫硫弧菌屬與腸道疾病有關，但二者之間的關系尚存爭議。屬水平上不同組之間具體的菌群差異如圖8c～8f 所示，除乳桿菌屬和脫硫弧菌屬外，與模型組和未發(fā)酵煎餅組相比，發(fā)酵煎餅組中的蘇黎世桿菌屬和黏液螺旋菌屬的相對豐度也顯著升高（P＜0.05）。蘇黎世桿菌屬被報道與腸道丁酸水平相關，而丁酸鹽的增加與胰島素敏感性的改善有關[25-26]。黏液螺旋菌屬也屬于短鏈脂肪酸產(chǎn)生菌，有研究認為黏液螺旋菌屬，糞球菌屬，擬桿菌屬和副桿菌屬等短鏈脂肪酸產(chǎn)生菌通過腸道菌群-短鏈脂肪酸-炎癥通路緩解胰島素抵抗，進一步改善糖代謝[17，27]。此外，Galle 等[8]報道過酸面團來源的胞外多糖能刺激結腸碳水化合物發(fā)酵產(chǎn)生短鏈脂肪酸，并增加腸道菌群的數(shù)量。因此，我們認為植物乳桿菌發(fā)酵酸面團過程中產(chǎn)生的發(fā)酵產(chǎn)物，如有機酸和胞外多糖等，是飼喂發(fā)酵煎餅能顯著改變T2D 小鼠腸道菌群結構，增加乳桿菌屬和產(chǎn)短鏈脂肪酸菌屬蘇黎世桿菌屬及黏液螺旋菌屬的豐度，并進一步影響其病理生理指標的主要原因。

圖8 不同組別小鼠腸道菌群屬水平變化Fig.8 Changes at genus level of mice fecal microbiota in different groups

3 結論

本試驗研究了植物乳桿菌發(fā)酵酸面團山東煎餅對T2D 小鼠的緩解作用。6 周的發(fā)酵煎餅干預可以降低T2D 小鼠空腹血糖水平和胰島素抵抗、改善血脂異常、保護胰島功能、調(diào)節(jié)SCFA 水平和腸道菌群。酸面團發(fā)酵過程中產(chǎn)生的發(fā)酵產(chǎn)物如有機酸和胞外多糖等，可能是發(fā)酵煎餅表現(xiàn)出顯著的抗糖尿病作用的原因。以上結果表明，植物乳桿菌發(fā)酵酸面團山東煎餅有望成為T2D 患者的功能性主食。