尹碩 吳迪 羅雪婷 李秋梅 潘洪吉 師迎春

摘要 ［目的］研究滅幼脲在茶樹菇及其菌棒上的消解動態(tài)及最終殘留規(guī)律。［方法］以25%滅幼脲懸浮劑為供藥試劑開展田間試驗(yàn)，建立液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜殘留檢測分析方法，對茶樹菇及其菌棒上滅幼脲的消解動態(tài)規(guī)律和最終殘留進(jìn)行檢測分析。［結(jié)果］在0.010～0.500和0.004～0.200 mg/L，滅幼脲在茶樹菇和菌棒中的質(zhì)量濃度與其峰面積線性關(guān)系良好，R2為0.999。滅幼脲在茶樹菇和菌棒中的平均回收率為90%～105%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.6%～9.7%，其消解過程符合一級動力學(xué)模型，半衰期為2.39 d。以25%滅幼脲懸浮劑300、450 g/hm2間隔7 d施藥3次，安全間隔期為3 d，初步推薦滅幼脲最大殘留限量（MRL）為0.2 mg/kg。［結(jié)論］根據(jù)試驗(yàn)中滅幼脲最高殘留量（HR）計(jì)算出普通人群滅幼脲每日攝入量占日允許攝入量的4.7%左右，認(rèn)為該農(nóng)藥殘留對一般人群健康的風(fēng)險(xiǎn)是可接受的。

關(guān)鍵詞 滅幼脲；茶樹菇；殘留；消解動態(tài)；風(fēng)險(xiǎn)評估

中圖分類號 TS207.5? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2023）14-0194-03

作者簡介 尹碩（1986—），女，北京人，農(nóng)藝師，碩士，從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究。*通信作者，推廣技術(shù)研究員，碩士，從事蔬菜、食用菌病蟲防治技術(shù)研究。

茶樹菇學(xué)名柱狀田頭菇（Agrocybe aegerita），食用味道獨(dú)特鮮美，且蛋白質(zhì)含量高、富含多種氨基酸及B族維生素［1］，具有較高的食用和藥用價(jià)值，市場前景廣闊。近年來，中國茶樹菇種植產(chǎn)業(yè)不斷擴(kuò)大，除向市場供應(yīng)干品外，鮮品銷售量也在不斷增長。茶樹菇栽培過程中極易受到菇蚊、菇蠅、螨蟲、雜菌等有害生物的危害，其中以菇蚊、菇蠅發(fā)生普遍且嚴(yán)重，防治不及時可極大地影響產(chǎn)量甚至絕收［2-4］。目前，化學(xué)防治仍是有效控制菇蚊、菇蠅的重要手段，中國登記在食用菌上的農(nóng)藥產(chǎn)品共有45個，涉及農(nóng)藥有效成分18種（高效氯氟氰菊酯、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、噻菌靈、噻霉酮、咪鮮胺錳鹽、吡唑醚菌酯、代森聯(lián)、二氯異氰尿酸鈉、三十烷醇、滅蠅胺、赤霉酸、春雷霉素、呋蟲胺、吡丙醚、咪鮮胺、多菌靈、腐霉利、百菌清）［5］。各食用菌品種上都可以使用的登記農(nóng)藥只有1種殺蟲劑氯氟·甲維鹽，很難滿足生產(chǎn)需要。

滅幼脲為苯甲酰脲類幾丁質(zhì)合成抑制劑，主要通過抑制昆蟲表皮幾丁質(zhì)合成酶和尿核苷輔酶的活性，從而抑制昆蟲幾丁質(zhì)合成導(dǎo)致其死亡，對蚊蠅幼蟲有較高的活性，也可抑制雙翅目成蟲卵的孵化［6］。我國尚未制定滅幼脲在食用菌中的殘留測定方法及相應(yīng)的限量標(biāo)準(zhǔn)［7-9］。國內(nèi)外對滅幼脲殘留的檢測方法主要有液相色譜法［10-11］、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法［12-18］等，對其在茶樹菇中殘留的研究鮮見報(bào)道。該研究利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對茶樹菇及其菌棒中滅幼脲的殘留進(jìn)行了檢測，并對其殘留消解動態(tài)及最終殘留進(jìn)行了研究，開展了膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評估，為其科學(xué)合理使用以及制定最大殘留限量（MRL）標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

LC-MS 8045型三重四級桿液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，島津（香港）有限公司；TDL-40B低速臺式大容量離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；RJ-TDL-40B低速臺式離心機(jī)，無錫市瑞江分析儀器有限公司；DFY-500C型粉碎機(jī)，溫嶺市林大機(jī)械有限公司；QL-901旋渦混合器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司。

滅幼脲（chlorobenzuron）標(biāo)準(zhǔn)品，國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心 （沈陽）；25%滅幼脲懸浮劑，東莞市瑞德豐生物科技有限公司。

乙腈，色譜純，F(xiàn)isher Chemicals公司；C18、PSA，40～63 μm，天津博納艾杰爾科技有限公司；無水硫酸鎂、氯化鈉，分析純，北京市化學(xué)試劑公司。

1.2 田間試驗(yàn)

1.2.1 消解動態(tài)試驗(yàn)。

試驗(yàn)小區(qū)面積5 m2，設(shè)立2個重復(fù)小區(qū)，每個小區(qū)菌棒數(shù)約為400個，出菇后噴霧施藥1次；施藥劑量有效成分0.03 g/m2。分別于施藥后2 h及1、2、3、5、7、10、14、21、28 d取蘑菇和菌棒樣品。

1.2.2 最終殘留試驗(yàn)。

設(shè)4個不同施藥劑量和不同施藥次數(shù)的小區(qū)，每個小區(qū)面積5 m2，菌棒數(shù)量約400個，以滅幼脲有效成分300、450 g/hm2的劑量施藥2、3次，施藥間隔期7 d。于末次施藥間隔3、5、7、10 d取茶樹菇和菌棒樣品。另設(shè)對照區(qū)，不施藥，采集對照樣品。

1.2.3 采樣方法。

1.2.3.1 茶樹菇的采集。在試驗(yàn)小區(qū)內(nèi)以對角線法取不同位置采集12個點(diǎn)的生長正常的茶樹菇樣本，總量不少于1 kg，粉碎混勻后四分法縮分，裝入封口樣品容器中，于-20 ℃保存，待測。

1.2.3.2 菌棒的采集。在小區(qū)內(nèi)選擇對角線上6個點(diǎn)，取走整包菌棒。菌棒從出菇頂分為上（0～5 cm）、中（>5～10 cm）、下（>10～15 cm）3段，分別粉碎，裝入封口樣品容器中，于-20? ℃保存，待測。

1.3 樣品前處理方法

稱取茶樹菇樣品10 g，加入10.0 mL乙腈、3 g氯化鈉，渦旋5 min，以3 800 r/min離心5 min，取1 mL上清液，加入50 mg C18、50 mg PSA、50 mg無水MgSO4，渦旋1 min，取上清液過0.22 μm有機(jī)系濾膜，待LC-MS/MS分析測定。

稱取菌棒樣品5 g，加入25.0 mL乙腈、3 g氯化鈉，渦旋5 min后提取凈化，步驟同上。

1.4 儀器分析測定條件

1.4.1 液相色譜條件。色譜柱為Athena C18-WP（3.0 μm×2.1 mm×50 mm），柱溫為40 ℃，進(jìn)樣體積1 μL。流動相為0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈（B），流速為0.3 mL/min，流動相比例為A∶B=20∶80（V/V）。

1.4.2 質(zhì)譜條件。電噴霧電離源（ESI），正負(fù)離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；離子源溫度300 ℃；DL管溫度250 ℃；加熱塊溫度400 ℃；霧化氣體流速3.0 L/min;干燥氣體流速 10 L/min；加熱氣體流速10 L/min。定性定量檢測參數(shù)見表1。

1.5 方法學(xué)驗(yàn)證

準(zhǔn)確稱取滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0 g（精確至0.000 1 g），用乙腈溶解并定容于10 mL容量瓶中，配成質(zhì)量濃度1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于-20 ℃冰柜中避光保存。分別用茶樹菇、菌棒的空白提取溶液稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲備液，配制成0.010、0.020、0.050、0.100、0.500 mg/L的茶樹菇基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作液和0.004、0.008、0.020、0.040、0.200 mg/L的菌棒基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、定量離子峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

在空白茶樹菇、菌棒樣品中添加3 個水平的滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個水平重復(fù)5 次?？瞻撞铇涔綐悠分刑砑铀綖?.01、0.05、0.10 mg/kg；空白菌棒樣品中添加水平為0.02、0.10、1.00 mg/kg，計(jì)算添加回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法有效性評價(jià)

由表2可知，在0.010～0.500和0.004～0.200 mg/L，滅幼脲在茶樹菇及其菌棒中的峰面積與其質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，R2為0.999，能夠滿足該試驗(yàn)定量分析的要求。按照添加回收的最低濃度確定方法的定量限，滅幼脲在茶樹菇和菌棒樣品上的定量限（LOQ）分別為0.010和0.020 mg/kg。

滅幼脲在茶樹菇和菌棒中的添加回收率結(jié)果見表3。由表3可知，滅幼脲在茶樹菇中的平均回收率為90%～101%，RSD在0.6%～8.2%；滅幼脲在菌棒中平均回收率為94%～105%，RSD在2.6%～9.7%。表明方法的準(zhǔn)確度、精確度符合農(nóng)藥殘留分析標(biāo)準(zhǔn)的要求［19］。

2.2 消解動態(tài) 根據(jù)滅幼脲在茶樹菇、菌棒上的消解動態(tài)殘留量（表4）結(jié)果分析表明，滅幼脲在茶樹菇上消解過程符合一級動力學(xué)模型，消解曲線為y=0.043 5e-0.29x（R2=0.927 6）；半衰期為2.39 d。滅幼脲在菌棒中殘留量均小于定量限。2.3 最終殘留

最終殘留試驗(yàn)檢測結(jié)果（表5）表明，25%滅幼脲懸浮劑以300～450 g/hm2施藥2～3次，用藥3～10 d，滅幼脲在茶樹菇中的殘留量為0.024～0.078 mg/kg，在菌棒上段殘留量<0.020～0.136 mg/kg，在菌棒中段和下段殘留量<0.020 mg/kg。

2.4 膳食風(fēng)險(xiǎn)評估

滅幼脲的日允許攝入量（ADI）為1.25 mg/kg［7］。根據(jù)滅幼脲在中國登記使用情況［20］ 以及居民人均膳食結(jié)構(gòu)調(diào)查數(shù)據(jù)［21］ ，結(jié)合該試驗(yàn)得到的殘留試驗(yàn)結(jié)果及茶樹菇實(shí)際生長情況進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評估，選用采收間隔期3 d時滅幼脲最高殘留量（HR）0.078 mg/kg進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評估，滅幼脲在所有登記作物中的長期膳食攝入風(fēng)險(xiǎn)評估見表6。經(jīng)計(jì)算，一般人群滅幼脲的理論最大日攝入量（TEDI）為3.67 mg，占日允許攝入量（78.75 mg）的4.7%，小于100%，不會對一般人群健康造成不可接受的風(fēng)險(xiǎn)。目前，中國和國際食品法曲委員會（CAC）均尚未制定滅幼脲在茶樹菇中的MRL值。根據(jù)膳食風(fēng)險(xiǎn)評估結(jié)果和中國農(nóng)產(chǎn)品及食品中農(nóng)藥最大殘留限量制定指導(dǎo)原則，結(jié)合施藥劑量和采收間隔期（3 d）的HR值，初步建議推薦滅幼脲在茶樹菇上登記使用，安全間隔期為3 d，MRL值可暫定為0.2 mg/kg（具體試驗(yàn)還需相關(guān)部門進(jìn)一步驗(yàn)證）。

3 結(jié)論

該研究建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時測定茶樹菇及其菌棒中滅幼脲殘留的分析方法，方法的準(zhǔn)確性和精密度均達(dá)到殘留分析要求。

消解動態(tài)試驗(yàn)結(jié)果表明，滅幼脲在茶樹菇中半衰期為2.39 d。由于施藥方式為噴霧，滅幼脲要在菌棒頂端著藥，隨時間推移，未見由上至下淋溶現(xiàn)象，主要集中在菌棒上段。

最終殘留試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，滅幼脲殘留主要集中在菌棒上段，最終殘留試驗(yàn)中茶樹菇上的殘留量較菌棒中的殘留量低。目前，滅幼脲在中國暫未制定最大殘留限量（MRL）標(biāo)準(zhǔn)，國際食品法典委員會、美國、日本和韓國也沒有相關(guān)規(guī)定；該研究以25%滅幼脲懸浮劑300、450 g/hm2間隔7 d施藥3次，安全間隔期為3 d，初步推薦滅幼脲MRL值為 0.2 mg/kg。

在實(shí)際生產(chǎn)中，食用菌作為小宗作物相應(yīng)的登記產(chǎn)品較少，農(nóng)戶不知該如何科學(xué)選擇和使用農(nóng)藥，且缺乏管理依據(jù)，無法判定安全性，對于消費(fèi)者來說是潛在的健康風(fēng)險(xiǎn)。希望有關(guān)部門及農(nóng)藥企業(yè)盡快完善中國農(nóng)藥在食用菌上的登記及限量標(biāo)準(zhǔn)的制定，促進(jìn)小宗作物合理用藥。

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