朱曉雨

乙型肝炎由乙型肝炎病毒(HBV)感染導(dǎo)致, 若患者未得到及時(shí)有效的治療, 可發(fā)展為肝硬化、肝癌,危及患者生命安全［1］。早期診斷對(duì)乙型肝炎的治療及預(yù)后具有重要意義［2］。乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物是臨床診斷HBV 感染的主要依據(jù), 包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 及HBcAb 5 項(xiàng), 其 中HBsAg 是HBV感染后最先出現(xiàn)在血清中的病毒抗原, 故臨床主要以HBsAg 指標(biāo)協(xié)助乙型肝炎的早期診斷。目前臨床常用的血清學(xué)檢測方法有膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫法及化學(xué)發(fā)光免疫分析法等, 其中膠體金免疫層析法操作簡便, 但診斷特異度較低；酶聯(lián)免疫法成本低, 但存在操作步驟繁瑣、操作時(shí)間長等不足；化學(xué)發(fā)光免疫分析法靈敏度和準(zhǔn)確度均較高, 但存在試劑穩(wěn)定性差、發(fā)光過程短等問題［3,4］?；诖? 本研究比較了上述三種免疫檢測法對(duì)乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的檢測價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年6 月～2020 年6 月于本院門診就診的57 例疑似乙型肝炎患者為研究對(duì)象, 納入標(biāo)準(zhǔn)：因疲倦乏力、惡心、食欲下降、口干等癥狀來院就診；初次接受乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物檢查；既往無肝病史；年齡>18 歲；影像學(xué)檢查及病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并血液系統(tǒng)疾病者；合并其他肝臟疾病者；合并心、腎等臟器功能不全者。其中, 男32 例, 女25 例；年齡21～75 歲, 平均年齡(39.28±14.21)歲；體質(zhì)量40～72 kg, 平均體質(zhì)量(53.59±7.47)kg。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 ①膠體金免疫層析法采用膠體金免疫層析分析儀(廣州?？松锟萍加邢薰? 粵械注準(zhǔn)20222220802), 所用試劑盒均購自英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司。②酶聯(lián)免疫法采用BK-EL10A 型酶聯(lián)免疫檢測儀(山東博冠生物技術(shù)有限公司, 魯械注準(zhǔn)20212220931)及配套洗板機(jī), 所用試劑盒均購自沈陽惠民生物技術(shù)有限公司。③化學(xué)發(fā)光免疫分析法采用全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(深圳安賽診斷技術(shù)有限公司, 粵械注準(zhǔn)20222220387), 所用試劑盒均購自北京泰格科信生物科技有限公司。

1.2.2 檢測方法 采集患者清晨空腹靜脈血6 ml, 以14 cm 離心半徑, 3500 r/min 離心, 10 min 后取上清液,均分為3 份, 分別采用膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫法及化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物。

1.2.3 陽性標(biāo)準(zhǔn) ①膠體金免疫層析法：若試紙條檢測線及對(duì)照線各出現(xiàn)一條紫紅色反應(yīng)線, 則檢測結(jié)果為陽性；僅對(duì)照線顯色為陰性；對(duì)照線不顯色表明實(shí)驗(yàn)失敗, 需重測。②酶聯(lián)免疫法：以吸光度(OD 值)/臨界值為標(biāo)準(zhǔn), HBsAg、HBeAg、HBsAb 的OD 值/臨界值≥1.0, HBeAb、HBcAb 的OD 值/臨界值<1.0, 即可判定為陽性。③化學(xué)發(fā)光免疫分析法：以樣本信號(hào)/cut-off 值(s/co) 判 斷, HBsAg、HBeAg：s/co≥1 為 陽性, s/co<0.9 為陰性, 若s/co 為0.9～1.0 則需重復(fù)檢測確認(rèn)；HBcAb、HBeAb：s/co>1 則為陰性, 反之為陽性；HBsAb 含量≥10 mU/ml 則為陽性, 反之為陰性。

1.2.4 熒光定量PCR 檢驗(yàn) 采用AGS4800 型實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀(杭州安譽(yù)科技有限公司, 國械注準(zhǔn)20173220921), 乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)定量檢測試劑盒由圣湘公司提供。取200 μl 血清加入450 μl DNA 濃縮液, 在100℃溫育器中進(jìn)行10 min 預(yù)熱, 以12000 r/min 在冰凍離心機(jī)離心5 min 后, 將20 μl 上清液置入PCR 管, 設(shè)置正確程序后放入儀器設(shè)備中檢測；設(shè)置陽性標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照、強(qiáng)陽性與弱陽性對(duì)照、陰性對(duì)照,結(jié)束反應(yīng)后采取Ct值作標(biāo)準(zhǔn)熒光曲線并計(jì)算DNA含量。1.3 觀察指標(biāo) ①統(tǒng)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢驗(yàn)結(jié)果。②以實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn), 比較三種檢驗(yàn)方法對(duì)乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的陽性檢出率。③比較三種檢驗(yàn)方法對(duì)HBsAg 的診斷效能, 準(zhǔn)確性=(真陰性+真陽性)/總例數(shù)×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%；靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢驗(yàn)結(jié)果 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢驗(yàn)結(jié)果顯示, 陽性21 例, 陰性36 例。

2.2 三種檢驗(yàn)方法對(duì)乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的陽性檢出率比較 膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫法及化學(xué)發(fā)光免疫分析法對(duì)HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBeAg、HBcAb的陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 三種檢驗(yàn)方法對(duì)乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物的陽性檢出率比較［n(%)］

2.3 三種檢驗(yàn)方法對(duì)HBsAg 的檢驗(yàn)結(jié)果及診斷效能比較 化學(xué)發(fā)光免疫分析法對(duì)HBsAg 的診斷準(zhǔn)確性及靈敏度均高于膠體金免疫層析法, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；化學(xué)發(fā)光免疫法對(duì)HBsAg 的診斷準(zhǔn)確性高于酶聯(lián)免疫法, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 三種檢驗(yàn)方法對(duì)HBsAg 的檢測結(jié)果及診斷效能比較(n, %)

3 討論

乙型肝炎患者臨床癥狀多表現(xiàn)為食欲不振、干嘔惡心和肢體乏力等, 若未得到及時(shí)治療, 可引發(fā)多種肝臟疾病, 如肝硬化、急慢性肝炎等, 嚴(yán)重影響降低患者生命質(zhì)量［3］。乙型肝炎具有較高的傳染率, 傳染途徑包括醫(yī)源性感染、母嬰傳播、性傳播和血液傳播等［4］。因此, 對(duì)乙型肝炎進(jìn)行有效、準(zhǔn)確診斷是防治的關(guān)鍵。乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物是臨床診斷乙型肝炎感染的常用指標(biāo), 包括HBeAg、HBsAg、HBeAb 等, 可有效反映HBV 在人體內(nèi)的轉(zhuǎn)變過程。酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫層析法和化學(xué)發(fā)光免疫分析法均為臨床檢測血清學(xué)標(biāo)志物的常用免疫檢測方法［5］。

酶聯(lián)免疫法是運(yùn)用放射免疫技術(shù)檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法, 原理是將抗原或抗體和酶連接, 使其成為保持免疫活性的酶標(biāo)抗原或抗體復(fù)合物, 然后加入底物, 經(jīng)酶的催化作用變?yōu)橛猩a(chǎn)物, 依據(jù)顏色的深淺度對(duì)抗原或抗體的水平進(jìn)行判斷, 常用來作定性或者定量的分析［6,7］。膠體金免疫層析法是以膠體金標(biāo)記與抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合的免疫標(biāo)記技術(shù),采用膠體金標(biāo)記抗體, 使抗原抗體反應(yīng)和洗滌在同一滲濾膜(一般為硝酸纖維素)上, 利用微孔膜毛細(xì)血管作用向膜的另一端滲移, 反應(yīng)后根據(jù)在膜上的顏色判斷結(jié)果?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法是運(yùn)用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)氧化等化學(xué)反應(yīng)后形成激發(fā)態(tài)中間體, 通過免疫反應(yīng)系統(tǒng)標(biāo)記在被檢測標(biāo)本上, 再用化學(xué)方法測定從激發(fā)態(tài)到基態(tài)狀態(tài)發(fā)出的光子量的方法。

本研究結(jié)果顯示, 膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫法及化學(xué)發(fā)光免疫分析法對(duì)HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBeAg、HBcAb 的陽性檢出率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與膠體金免疫層析法比較, 化學(xué)發(fā)光免疫分析法對(duì)HBsAg 的診斷準(zhǔn)確性及靈敏度均更高；與酶聯(lián)免疫法比較, 化學(xué)發(fā)光免疫法對(duì)HBsAg 的診斷準(zhǔn)確性更高, 提示化學(xué)發(fā)光免疫分析法應(yīng)用于乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物檢測中具有較高的診斷準(zhǔn)確性, 可為臨床診斷乙型肝炎提供可靠依據(jù)。分析原因?yàn)槊嘎?lián)免疫法可有效測定乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物水平, 通過分析相關(guān)數(shù)據(jù), 可獲取較為理想的檢測效果, 該方法具有成本低廉的優(yōu)勢(shì), 但操作較為復(fù)雜, 且易受到多種因素干擾,進(jìn)而對(duì)檢測結(jié)果產(chǎn)生影響［8,9］。膠體金免疫層析法成本低廉, 且具有操作簡便、檢測時(shí)間短等優(yōu)勢(shì), 適用于緊急情況如急診等快速檢測, 但對(duì)檢測低濃度標(biāo)本存在一定的局限性［10］?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法結(jié)合了化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)與免疫反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn), 不易受外界因素的干擾, 對(duì)于低濃度標(biāo)本亦有較高的靈敏度, 試劑穩(wěn)定且有效期長、檢測范圍廣, 操作快速簡單［11］, 對(duì)乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物診斷準(zhǔn)確性較高。

綜上所述, 膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫法及化學(xué)發(fā)光免疫分析法均為乙型肝炎血清標(biāo)志物檢測的常規(guī)免疫檢測法, 且各有優(yōu)缺點(diǎn), 相比之下, 化學(xué)發(fā)光免疫分析法的診斷準(zhǔn)確性更高。