徐佳紅，劉 杰，2，3，簡(jiǎn)梨娜，龔羽龍，郭江濤

(1 貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2 國(guó)家苗藥工程技術(shù)研究中心，貴州 貴陽 550025；3 貴州中藥炮制與制劑工程技術(shù)研究中心，貴州 貴陽 550025)

本品為百合科植物庫(kù)拉素蘆薈(AloebarbadensisMiller.)、好望角蘆薈(AloeferoxMiller.)或其他同屬近源植物葉的汁液濃縮干燥物。蘆薈具有抗菌[1]、抗癌[2-3]、抗病毒[4]、抗糖尿病[5]、促進(jìn)傷口的愈合[6-8]等作用，在藥用[9]和食用[10]領(lǐng)域具有良好的發(fā)展前景，目前蘆薈的開發(fā)利用多集中在化妝品領(lǐng)域。本文將不同產(chǎn)地的蘆薈按照《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003版炮制規(guī)范中的炒制法進(jìn)行炮制，以《中國(guó)藥典》為參考依據(jù)，對(duì)蘆薈炒品進(jìn)行薄層鑒別、水分及總灰分測(cè)定，并采用HPLC法建立蘆薈苷含量測(cè)定方法，為提升和修訂《貴州省中藥飲片炮制規(guī)范》奠定基礎(chǔ)，也為進(jìn)一步研制相關(guān)的功能性食品和藥品提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

SPD-20A高效液相色譜儀，日本島津；5C18-MS-II(4.6×250 mm，5 μm)色譜柱，COSMOSIL；ZF-1三用紫外分析儀，上海金鵬分析儀儀器有限公司；AUW120D電子分析天平，日本島津；SK8200H超聲波清洗器，上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司；DZF-6050真空干燥箱，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；SX2-5-12箱式電阻爐，瀘南電爐烘箱廠；FA2204N電子天平，上海菁海儀器有限公司；1001-A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，天津天泰儀器有限公司；GZX-9240MBE數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海雙捷實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；DK-98-II電子恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司；硅膠G板20180105薄層板，青島海洋化工有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

1.2.1 對(duì)照品與試劑

蘆薈苷對(duì)照品(批號(hào)110787-201808，純度：92.4%)，中國(guó)食藥品檢定研究院；甲醇(色譜純)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙腈(色譜純)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；超純水。

1.2.2 藥材

所有供試品經(jīng)由貴州中醫(yī)藥大學(xué)謝軍麗老師鑒定為百合科植物蘆薈。蘆薈樣品編號(hào)：生品為SA-1～SA-8，炒品為CA-1～CA-8。樣品信息詳見表1。

表1 蘆薈樣品信息表

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 性狀鑒別

蘆薈生品呈不規(guī)則塊狀，深褐色至暗褐色，略顯綠色，粉末顯暗綠色至暗褐色，炒制后呈不規(guī)則顆粒狀，暗褐色。

2.1.2 理化鑒別

參照《中國(guó)藥典》蘆薈【鑒別】項(xiàng)下[11]方法。取生品、研品粉末各0.5 g，分別進(jìn)行如下試驗(yàn)：加水50 mL，振搖，濾過，取濾液5 mL，加硼砂0.2 g，加熱使溶解，取溶液數(shù)滴，加水30 mL，搖勻。供試品的生品與研品均顯綠色熒光。

取生品、炒品粉末各0.5 g，分別進(jìn)行如下試驗(yàn)：加水50 mL，振搖，濾過，取濾液2 mL，加硝酸2 mL，搖勻，再取濾液2 mL，加等量飽和溴水。供試品的生品與研品都生成黃色沉淀。

2.1.3 薄層鑒別

取本品粉末0.5 g，加甲醇20 mL，置水浴上加熱至沸，振搖數(shù)分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取蘆薈對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取供試品溶液和對(duì)照品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%氫氧化鉀溶液的顯色劑，在紫外光燈(365 nm)下觀察視。參照《中國(guó)藥典》2020版第四部薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)[12]。結(jié)果顯示，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，結(jié)果如圖1所示。

圖1 八批蘆薈生品、炒品TLC

2.2 水分、總灰分測(cè)定

依照2020版《中國(guó)藥典》第四部(通則0832[13]、2302[14])對(duì)8批樣品進(jìn)行水分、總灰分的測(cè)定，所測(cè)8批蘆薈生品與炒品的水分分別為5.66%～8.09%、1.60%～4.95%，總灰分分別為0.88%～2.18%、0.96%～8.59%，表明不同產(chǎn)地蘆薈及其炮制品之間的水分及總灰分含量存在差異。結(jié)果見表2。

表2 蘆薈及炮制品水分和總灰分含量

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件

流動(dòng)相為乙腈-水(23∶77)等度洗脫，柱溫為30 ℃，波長(zhǎng)為365 nm，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，理論塔板數(shù)按蘆薈苷峰計(jì)算不應(yīng)低于2000(見圖2)。

圖2 蘆薈苷對(duì)照品(A)、非洲庫(kù)拉索蘆薈生品(B)、非洲庫(kù)拉索蘆薈炒品(C)

2.3.2 供試品溶液

精密稱定過60目篩的蘆薈炒品(非洲庫(kù)拉索)藥材粉末約0.6 g，加甲醇制成每1 mL含0.6 mg的溶液(mg/mL)，作為供試品試劑。

2.3.3 對(duì)照品溶液

蘆薈苷對(duì)照品儲(chǔ)備液的配制：精密稱取蘆薈苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.6 mg的溶液(mg/mL)，作為對(duì)照品試劑。

2.3.4 線性關(guān)系考察試驗(yàn)

精密稱取對(duì)照品適量，加甲醇溶液制成1.2 mg/mL的溶液，搖勻，依次稀釋成1.0 mg/mL、0.8 mg/mL、0.6 mg/mL、0.4 mg/mL、0.2 mg/mL濃度的溶液。按“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得到回歸方程為y=3×10-7x+222443(r=0.9995)，表明在0.2～1.2 mg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液10 μL，按照“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。得峰面積平均值為8012856.8，RSD為1.37%。表明儀器的精密度良好。

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取蘆薈炒品(非洲庫(kù)拉索)供試品溶液10 μL，按照“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次。計(jì)算蘆薈炒品(非洲庫(kù)拉索)中蘆薈苷的平均含量為1.40%，RSD為1.29%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液10 μL，按照“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件，分別在(0、3、6、9、12、24 h)的時(shí)間段進(jìn)樣。得蘆薈苷的峰面積平均值為7325771.89，RSD為0.35%，可以得出蘆薈苷溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.3.8 加樣回收試驗(yàn)

精密稱取蘆薈炒品(非洲好望角)粉末9份，約為0.3 g，分別按質(zhì)量分?jǐn)?shù)加入蘆薈苷對(duì)照品，按照“2.3.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件分析，得蘆薈炒品(非洲好望角)中蘆薈苷平均加樣回收率98.60%，RSD為1.67%，表明該方法測(cè)定準(zhǔn)確度高。結(jié)果見表3。

表3 蘆薈加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.9 樣品含量測(cè)定

取8個(gè)不同產(chǎn)地蘆薈及其炒品，按照“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件，吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。蘆薈中蘆薈苷含量在12.78%～34.43%，蘆薈炒品中蘆薈苷含量在8.94%～28.41%。結(jié)果表明除印度庫(kù)拉索蘆薈外，同一產(chǎn)地的蘆薈經(jīng)過炒制之后，蘆薈苷含量均降低，結(jié)果見表4。

表4 蘆薈生品、炒品的含量測(cè)定

3 結(jié) 論

本文首次對(duì)貴州制法蘆薈炮制品進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，采用HPLC法建立了蘆薈炒品中蘆薈苷的含量測(cè)定方法。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見：蘆薈經(jīng)過炒制之后，其水分、總灰分、蘆薈苷的含量均有所變化。炒制品中蘆薈苷含量明顯降低，可能是由于炒制的過程中蘆薈苷被氧化而轉(zhuǎn)變?yōu)樘J薈大黃素。且在炮制過程中，炒制品苦味明顯增加，也表明部分蘆薈苷可能已經(jīng)轉(zhuǎn)變成蘆薈大黃素。蘆薈炮制前后蘆薈苷含量的變化，揭示了蘆薈炮制前后其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)生了改變。該研究為不同產(chǎn)地蘆薈的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供了依據(jù)，為提升《貴州省中藥飲片炮制規(guī)范》中蘆薈及其炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)也為蘆薈及其炮制品的用藥安全和質(zhì)量控制提供依據(jù)。