黃婧芫,劉偉平,鐘輝秀,章梁君,徐紫齡,宋碧輝

自貢市第一人民醫(yī)院檢驗科,四川自貢 643000

急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)是急性白血病的一種,主要起源于B系、T系淋巴祖細(xì)胞,可導(dǎo)致白血病細(xì)胞在骨髓內(nèi)增生與聚集,抑制機(jī)體正常造血功能從而誘發(fā)貧血,降低血小板及中性粒細(xì)胞水平,并侵入腦膜、淋巴結(jié)及骨組織等[1]。ALL好發(fā)于兒童,少見于成年人,ALL占急性白血病的30%～40%,嚴(yán)重威脅兒童健康[2]。目前臨床對于ALL的診斷主要依據(jù)病理活檢結(jié)果,但該檢查方式屬于有創(chuàng)檢查,不利于患者后續(xù)治療[3]。因此,臨床需要積極尋找ALL相關(guān)的可用于非侵入性檢查的生物學(xué)標(biāo)志物。髓過氧化物酶(MPO)是源于中性粒細(xì)胞中的蛋白質(zhì),采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞質(zhì)髓過氧化物酶(cMPO)屬于臨床常用的MPO檢測方式,MPO與急性白血病關(guān)系密切[4]。人類白細(xì)胞抗原(HLA)-B27是第6號染色HLA基因B座一個等位基因的表達(dá)產(chǎn)物,能夠促進(jìn)CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的病毒清除。有研究報道,HLA基因多態(tài)性與白血病發(fā)生有關(guān)[5]。由此推測cMPO、HLA-B27表達(dá)情況可能與ALL發(fā)生及治療效果有關(guān)。因此,本研究分析cMPO、HLA-B27表達(dá)情況與ALL發(fā)生及治療效果的關(guān)系,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2020年10月至2022年10月本院收治的45例ALL患者納入研究作為ALL組,另選取同期于本院治療的45例非惡性血液疾病患者作為非ALL組。ALL組男26例,女19例;年齡4～12歲,平均(8.27±3.15)歲;免疫細(xì)胞分型:B細(xì)胞39例,T細(xì)胞6例;疾病危險度分級:標(biāo)危29例,中危10例,高危6例。非ALL組男22例,女23例;年齡4～13歲,平均(8.03±3.09)歲;增生性貧血32例,特發(fā)性血小板減少性紫癜13例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)ALL組患者符合ALL的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],并經(jīng)病理學(xué)檢查確診;(2)初次確診ALL。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并先天性疾病;(2)有化療禁忌證;(3)合并免疫功能障礙;(4)過敏體質(zhì)。本研究經(jīng)自貢市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)?；純杭覍賹Ρ狙芯恐橥獠⒑炇鹬橥鈺?。

1.2儀器與試劑 磷酸鹽緩沖液為德國西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品有限公司產(chǎn)品;Navios 8 COLORS型流式細(xì)胞儀為貝克曼庫爾特公司產(chǎn)品;cMPO檢測試劑盒為INOVA Diagnostics公司產(chǎn)品;HLA-B27檢測試劑盒為貝克曼庫爾特公司產(chǎn)品。破膜劑PBS-Triton購自語純生物公司。

1.3方法

1.3.1cMPO、HLA-B27的檢測 受試者入院時進(jìn)行這兩項指標(biāo)的檢測。cMPO的檢測:采集患兒清晨空腹外周肘靜脈血5 mL,加入熒光標(biāo)記抗體,混勻后,避光放置30 min,離心后去上清液,然后加入磷酸鹽緩沖液30 μL,破膜劑PBS-Triton 40 μL混勻,避光放置30 min,洗滌、離心后去除上清液,加入細(xì)胞質(zhì)抗體20 μL混勻,避光放置30 min,使用流式細(xì)胞儀檢測cMPO表達(dá)情況,熒光強(qiáng)度顯示“negative”為陰性,積分為0分,積分為1～3分為陽性。HLA-B27的檢測:按照HLA-B27檢測試劑盒要求進(jìn)行操作,流式細(xì)胞儀所用抗體為HLA-B27-FITC/CD3-PE;實際檢測標(biāo)本經(jīng)FACSCalibur FCM HLA-B27 專用軟件分析后報告檢測結(jié)果,以CD3-PE標(biāo)記的T淋巴細(xì)胞設(shè)門并檢測細(xì)胞HLA-B27的平均熒光強(qiáng)度,與校準(zhǔn)誤的數(shù)值比較,≥校準(zhǔn)誤的數(shù)值為陽性,否則為陰性。

1.3.2基線資料收集及比較 比較兩組性別、年齡、體重、骨髓幼稚細(xì)胞比例、肝大情況、脾大情況、淋巴結(jié)大情況、白細(xì)胞計數(shù)(WBC)、血紅蛋白(Hb)、血小板計數(shù)(PLT)、出血情況。

1.2.3治療方案及療效評估 參照《兒童急性淋巴細(xì)胞白血病診療建議(第四次修訂)》[6]給予常規(guī)治療,第1、8、15、22天靜脈注射長春新堿(深圳萬樂藥業(yè)有限公司,國藥準(zhǔn)字H44021772)2 mg/m2;第1～3天及第15～17天靜脈注射柔紅霉素(瀚暉制藥有限公司,國藥準(zhǔn)字H33020925)30 mg/m2;第19～28天靜脈滴注左旋門冬酰胺酶(天津生物化學(xué)制藥有限公司,國藥準(zhǔn)字H19993445);第1～14天口服潑尼松(國藥集團(tuán)容生制藥有限公司,國藥準(zhǔn)字H41020636)30 mg/m2,第15～28天開始適當(dāng)減量。于療程結(jié)束后參照文獻(xiàn)[7]中的方法評估患者臨床療效。臨床癥狀消失或有所改善、血常規(guī)檢查恢復(fù)正?；蚋纳茷橛行?無明顯改善或病情加重為無效。將有效患者納入有效組,將無效患者納入無效組。

2 結(jié) 果

2.1兩組基線資料比較 ALL組cMPO陽性、HLA-B27陽性比例高于非ALL組(P<0.05),其他項目兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

表1 兩組基線資料比較[n(%)或

2.2ALL發(fā)生的影響因素分析 將患者ALL發(fā)生情況(0=非ALL,1=ALL)作為因變量,將cMPO抗體、HLA-B27表達(dá)情況(0=陰性,1=陽性)作為自變量,經(jīng)單項Logistics回歸分析后,將P值放寬至<0.1,納入符合條件的因素,行二元Logistics回歸分析,結(jié)果顯示,cMPO、HLA-B27陽性是ALL發(fā)生的危險因素(OR>1,P<0.05)。見表2。

表2 ALL發(fā)生的影響因素分析

2.3不同療效患者基線資料比較 45例ALL患者經(jīng)4次給藥后,有效35例,無效10例,無效組骨髓幼稚細(xì)胞比例、Hb、PLT低于有效組,WBC高于有效組(P<0.05);兩組其他項目比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同療效患者基線資料比較[n(%)或

2.4ALL治療無效的影響因素分析 將ALL患者治療效果(0=有效,1=無效)作為因變量,將cMPO抗體、HLA-B27表達(dá)情況(0=陰性,1=陽性)作為自變量,經(jīng)單項Logistics回歸分析后,將P值放寬至<0.1,納入符合條件的因素,行二元Logistics回歸分析,結(jié)果顯示,cMPO、HLA-B27陽性是ALL患者治療無效的危險因素(OR>1,P<0.05)。見表4。

表4 cMPO抗體、HLA-B27與ALL治療無效的相關(guān)性

3 討 論

ALL是由于造血干細(xì)胞在分化為淋巴細(xì)胞過程中發(fā)生惡性增殖所致,影響機(jī)體正常造血,并浸潤肝、脾、淋巴結(jié)等組織造成器官腫大,引發(fā)相應(yīng)臨床癥狀。ALL發(fā)病急驟、進(jìn)展迅猛,臨床患者多表現(xiàn)出貧血、出血等癥狀。目前臨床對于ALL主要采取化療及免疫治療,據(jù)相關(guān)研究結(jié)果顯示,ALL患兒經(jīng)治療后5年無病生存期超過80%,但仍有部分患者療效一般[8-9]。

目前臨床對于ALL的評估主要依靠骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)及組織化學(xué)法,但上述評估方法易受檢查者主觀因素影響,對檢查者臨床經(jīng)驗要求較高。同時部分細(xì)胞蛋白表達(dá)信息存在一定特殊性及易變性,從而影響臨床評估,不利于臨床治療方案的制訂。因此,臨床仍需積極尋找可影響ALL發(fā)生及治療效果的指標(biāo)。MPO是人類中性粒細(xì)胞水平最高的一種蛋白質(zhì),據(jù)相關(guān)研究顯示,MPO孤立表達(dá)與急性B淋巴細(xì)胞白血病患者生存結(jié)局相關(guān)[10]。HLA-B27抗原為HLA-Ⅰ類基因B座位上的抗原,是一組緊密相關(guān)的組織相容性抗原,可控制細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的特異性[11]。有研究報道,HLA基因表達(dá)與白血病患病風(fēng)險關(guān)系密切[12]。由此推測cMPO、HLA-B27表達(dá)情況可能與ALL的發(fā)生及臨床療效相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示,ALL組cMPO陽性、HLA-B27陽性患者比例高于非ALL組,二元Logistics回歸分析結(jié)果顯示,cMPO、HLA-B27陽性是ALL發(fā)生的危險因素,表明ALL患者cMPO、HLA-B27呈陽性表達(dá),且與ALL的發(fā)生關(guān)系密切。cMPO檢測主要采用組織化學(xué)染色或流式細(xì)胞術(shù),使用了各類抗血細(xì)胞表面分化抗原的單克隆抗體,通過測定熒光染色強(qiáng)度,從而獲取各種抗原水平[12-13]。cMPO合成是在早幼粒細(xì)胞階段,再經(jīng)加工、包裝進(jìn)入嗜天青顆粒。MPO陽性表達(dá)是細(xì)胞髓系來源的標(biāo)志,而ALL正是由于白血病細(xì)胞在骨髓內(nèi)異常增殖與聚集造成,并可侵犯髓外組織,因此ALL cMPO呈陽性表達(dá)[14]。MPO SpSp基因還可促進(jìn)髓前體細(xì)胞增殖,使其失去分化為成熟血細(xì)胞能力,從而增加白血病發(fā)生風(fēng)險[15]。

HLA-B27在一般人群中陽性率僅為5%左右,HLA-B27在多種疾病中呈陽性表達(dá),如強(qiáng)直性脊柱炎及多系統(tǒng)炎癥性疾病[16]。ALL是造血細(xì)胞的惡性克隆性疾病,造血干細(xì)胞是血液及免疫系統(tǒng)的起始細(xì)胞,由此可見免疫功能障礙與ALL關(guān)系密切。有研究指出,HLA可能是導(dǎo)致白血病重要的遺傳因素之一[17]。HLA-B27可將抗原肽提呈給T細(xì)胞識別,從而起到特異性免疫應(yīng)答,并參與免疫應(yīng)答的遺傳學(xué)控制及T細(xì)胞發(fā)育,從而導(dǎo)致患者出現(xiàn)免疫功能異常,增加ALL發(fā)生風(fēng)險[18]。人類T淋巴細(xì)胞病毒Ⅰ型是造成T淋巴細(xì)胞白血病重要原因[19]。而HLA-B27與病毒感染密切相關(guān),HLA-B27在抗病毒感染過程中起到重要作用,HLA-B27可促進(jìn)CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的病毒清除,從而清除機(jī)體病毒[20]。HLA-B27陽性表達(dá)也提示患者病毒感染較為嚴(yán)重,ALL發(fā)生風(fēng)險增加,影響臨床治療效果[21]。

綜上所述,cMPO、HLA-27陽性表達(dá)與ALL的發(fā)生及臨床療效密切相關(guān),臨床可通過檢測cMPO、HLA-27表達(dá)情況,針對性地制訂治療方案,從而提高ALL患者臨床療效。