錢世慶,楊海萍,余 俊,楊玉坤

1.安徽省廬江縣人民醫(yī)院,安徽合肥 231500;2.六安市人民醫(yī)院,安徽六安 237000;3.合肥諾森醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心,安徽合肥 230000

漿液性卵巢癌是臨床常見(jiàn)的卵巢癌病理類型之一,其中高級(jí)別的漿液性卵巢癌具有惡性程度高、侵襲性強(qiáng)、預(yù)后較差等特點(diǎn)。據(jù)統(tǒng)計(jì),即使此類患者接受積極治療,半年內(nèi)期復(fù)發(fā)率仍高達(dá)25%左右,且5年生存率僅為31%[1-2]。因此,及早明確漿液性卵巢癌級(jí)別,尋找潛在的生物標(biāo)志物,制訂針對(duì)性的治療方案以提高療效具有重要意義。微小RNA(miRNA)miR-1246屬于腫瘤促進(jìn)因子,在結(jié)直腸癌、宮頸鱗癌等多種惡性腫瘤中呈高表達(dá)[3]。人附睪蛋白4(HE4)是一種分泌性糖蛋白,參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、遷移及侵襲過(guò)程[4]。甲殼質(zhì)酶蛋白-40(YKL-40)屬于外殼質(zhì)酶家族,與多種細(xì)胞的分化、增殖、細(xì)胞外組織重塑及血管形成等生物學(xué)行為聯(lián)系緊密,在惡性腫瘤組織中存在特異性表達(dá)[5]。但關(guān)于三者對(duì)漿液性卵巢癌級(jí)別的診斷價(jià)值及與預(yù)后的關(guān)系的研究報(bào)道較少,故本課題組對(duì)此進(jìn)行了探討,旨在為臨床診斷提供參考,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將安徽省廬江縣人民醫(yī)院2019年1月至2020年7月收治的漿液性卵巢癌患者87例納入研究。納入研究的患者年齡40～72歲、平均(57.31±5.02)歲,體重指數(shù)(BMI)17～29 kg/m2、平均(24.88±1.16)kg/m2;FIGO分期:Ⅰ～Ⅱ期45例,Ⅲ～Ⅳ期42例;其中有吸煙史18例,有飲酒史27例。根據(jù)病理檢查確定的漿液性卵巢癌級(jí)別將納入研究的患者分為低級(jí)別組(30例)與高級(jí)別組(57例)。兩組年齡、BMI、吸煙史、飲酒史比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);兩組FIGO分期比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):(1)經(jīng)病理檢查確診為漿液性卵巢癌;(2)初診患者;(3)參與本研究前未接受任何抗腫瘤治療;(4)患者及家屬均知情同意并自愿簽訂知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并內(nèi)分泌疾病;(2)心、肝、腎、肺等重要器官功能異常;(3)伴有其他部位良/惡性腫瘤;(4)并發(fā)全身急慢性感染;(5)合并結(jié)締組織疾病;(6)妊娠期、哺乳期女性。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 所有納入研究者于入院當(dāng)日清晨采集空腹靜脈血4 mL,置入不加抗凝劑的離心管(購(gòu)自鑫聯(lián)城潤(rùn)生物技術(shù)有限公司),在室溫條件下靜置1 h,以3 000 r/min離心10 min,取上清液,于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2血清miR-1246水平檢測(cè) 采用RNA提取試劑盒(購(gòu)自賽默飛公司)提取總RNA,行逆轉(zhuǎn)錄后采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)檢測(cè),檢測(cè)儀器為賽默飛公司的Applied Biosystems PCR儀,以U6為內(nèi)參,采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-1246的相對(duì)表達(dá)水平。

1.3.3血清HE-4、YKL-40水平檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法檢測(cè)血清HE-4、YKL-40水平,試劑盒購(gòu)自瑞典康乃格公司,酶標(biāo)儀購(gòu)自Molecular Devices公司,所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.4隨訪 對(duì)納入研究的患者進(jìn)行2年隨訪。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清miR-1246、HE4、YKL-40水平比較 高級(jí)別組血清miR-1246、HE4、YKL-40水平均高于低級(jí)別組(P<0.05),見(jiàn)表2。

表2 兩組血清miR-1246、HE4、YKL-40水平比較

2.2血清miR-1246、HE4、YKL-40與漿液性卵巢癌級(jí)別的關(guān)系 血清miR-1246、HE4、YKL-40均與漿液性卵巢癌級(jí)別呈正相關(guān)(r=0.625、0.714、0.703,P<0.05)。

2.3血清miR-1246、HE4、YKL-40單獨(dú)及聯(lián)合診斷漿液性卵巢癌級(jí)別的價(jià)值 以高級(jí)別組作為陽(yáng)性樣本,低級(jí)別組作為陰性樣本,繪制ROC曲線,結(jié)果顯示,血清miR-1246、HE4、YKL-40診斷漿液性卵巢癌級(jí)別的曲線下面積(AUC)分別為0.830(95%CI:0.735～0.902)、0.812(95%CI:0.714～0.888)、0.833(95%CI:0.738～0.905)。3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合診斷漿液性卵巢癌級(jí)別的AUC為0.938(95%CI:0.865～0.979),約登指數(shù)為0.775,靈敏度為84.21%,特異度為93.33%,優(yōu)于各血清指標(biāo)單獨(dú)診斷,見(jiàn)表3、圖1。

注:A為3項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)診斷的ROC曲線;B為3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合診斷的ROC曲線。

表3 血清miR-1246、HE4、YKL-40診斷漿液性卵巢癌級(jí)別價(jià)值

2.4不同血清miR-1246、HE4、YKL-40水平患者2年生存率 隨訪2年,失訪4例。83例漿液性卵巢癌患者2年生存率為67.46%(56/83),見(jiàn)圖2。生存曲線分析顯示,血清miR-1246、HE4、YKL-40高水平患者2年生存率分別為53.49%(23/43)、52.50%(21/40)、56.60%(30/53),均低于低水平患者的82.50%(33/40)、81.40%(35/43)、86.67%(26/30),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)圖3。

圖2 漿液性卵巢癌患者生存曲線

圖3 不同血清miR-1246、HE4、YKL-40水平患者2年生存曲線

3 討 論

miRNA在生物轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)的負(fù)向調(diào)節(jié)方面發(fā)揮至關(guān)重要的作用,可經(jīng)由下游信號(hào)通路及調(diào)節(jié)靶基因等途徑產(chǎn)生抑癌基因或促癌基因的作用[6-7]。既往研究均指出,miRNA失調(diào)與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展聯(lián)系緊密[8-9]。其中,miR-1246在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)其呈高表達(dá),被認(rèn)為有促癌基因的作用[10]。楚麗等[11]報(bào)道顯示,miR-1246能夠加快肺上皮祖細(xì)胞增殖、分化,促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌進(jìn)展。在此基礎(chǔ)上,本研究發(fā)現(xiàn),高級(jí)別組血清miR-1246水平高于低級(jí)別組,與漿液性卵巢癌級(jí)別呈正相關(guān),可見(jiàn)miR-1246在漿液性卵巢癌發(fā)展過(guò)程中具有重要促進(jìn)作用。分析原因,主要在于腫瘤細(xì)胞可選擇性分泌富含miR-1246的外泌體,而這些外泌體會(huì)被周圍巨噬細(xì)胞吞噬,促使巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為與腫瘤相關(guān)的巨噬細(xì)胞,從而改變腫瘤細(xì)胞內(nèi)部微環(huán)境,加快腫瘤細(xì)胞增殖、分化、侵襲及轉(zhuǎn)移,提高腫瘤惡性程度[12]。同時(shí),一項(xiàng)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí),miR-1246可以顯著提高SKOV3卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力,抑制腫瘤細(xì)胞凋亡,促進(jìn)卵巢癌進(jìn)展[13]。本研究還發(fā)現(xiàn),血清miR-1246高水平患者2年生存率低于低水平患者,提示miR-1246表達(dá)異常升高還會(huì)對(duì)漿液性卵巢癌患者生存預(yù)后產(chǎn)生影響,可作為靶向治療的靶點(diǎn),以延長(zhǎng)生存期,改善預(yù)后。

HE4屬于抑蛋白酶家族,最早是在人附睪上皮細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),大量臨床實(shí)踐證實(shí),HE4是一種生殖相關(guān)、附睪特異性的蛋白[14-15]。既往研究表明,HE4在正常卵巢組織中不表達(dá)或處于低表達(dá)狀態(tài),在卵巢癌組織中呈高表達(dá)趨勢(shì),可作為臨床診斷卵巢癌的生物學(xué)標(biāo)志物[16-17]。本研究結(jié)果顯示,高級(jí)別漿液性卵巢癌患者血清HE4水平明顯高于低級(jí)別漿液性卵巢癌患者,說(shuō)明HE4不僅參與卵巢癌發(fā)生過(guò)程,還能促進(jìn)卵巢癌發(fā)展。結(jié)合LIU等[18]報(bào)道考慮為HE4具有調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移及凋亡作用,異常高表達(dá)能顯著提高腫瘤細(xì)胞侵襲能力,抑制腫瘤細(xì)胞凋亡,從而增加腫瘤組織惡性程度,加快卵巢癌病情進(jìn)展。本研究結(jié)果表明,血清HE4與漿液性卵巢癌級(jí)別呈正相關(guān),可為臨床準(zhǔn)確評(píng)估病理級(jí)別提供有效參考依據(jù)。同時(shí),本研究還發(fā)現(xiàn),HE4顯著升高表達(dá)會(huì)明顯降低漿液性卵巢癌患者2年生存率,提示臨床可將其作為生存預(yù)后判斷的重要輔助指標(biāo)。

YKL-40是哺乳動(dòng)物18糖蛋白家族中的成員之一,相關(guān)報(bào)道證實(shí),其在炎癥、細(xì)胞外基質(zhì)重塑、腫瘤血管形成、惡性腫瘤細(xì)胞增殖浸潤(rùn)等多種生理病理過(guò)程中具有重要作用[19]。楊華等[20]、HAO等[21]研究報(bào)道證實(shí),YKL-40在子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌中呈高表達(dá)。本研究在此基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn),高級(jí)別組血清YKL-40水平高于低級(jí)別組,與漿液性卵巢癌級(jí)別呈正相關(guān),可見(jiàn)血清YKL-40可作為臨床評(píng)估漿液性卵巢癌級(jí)別的血清學(xué)指標(biāo)。究其原因,主要是由于YKL-40具有腫瘤生長(zhǎng)因子作用,可有效促進(jìn)腫瘤新生血管形成,加快腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)、侵襲,從而發(fā)揮加速腫瘤病情進(jìn)展的作用,同時(shí),中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等間質(zhì)細(xì)胞也會(huì)不同程度表達(dá)YKL-40,隨著卵巢惡性腫瘤組織浸潤(rùn)、侵襲及轉(zhuǎn)移的范圍更為廣泛,其腫瘤間質(zhì)成分還會(huì)增加,導(dǎo)致YKL-40被過(guò)多表達(dá),進(jìn)一步促進(jìn)卵巢癌發(fā)展[22-23]。本研究結(jié)果還表明,血清YKL-40高水平患者2年生存率低于低水平患者,可見(jiàn)YKL-40高表達(dá)會(huì)提高漿液性卵巢癌死亡風(fēng)險(xiǎn),提示臨床可通過(guò)監(jiān)測(cè)其血清水平變化為評(píng)估生存預(yù)后提供有效信息。

此外,本研究發(fā)現(xiàn),血清miR-1246、HE4、YKL-40單獨(dú)診斷漿液性卵巢癌級(jí)別的價(jià)值欠佳,難以單獨(dú)應(yīng)用于臨床診斷中。為此,本研究探討了血清miR-1246、HE4、YKL-40聯(lián)合診斷的價(jià)值,結(jié)果發(fā)現(xiàn)聯(lián)合診斷的效能優(yōu)于三者單獨(dú)診斷,可以為臨床及早準(zhǔn)確評(píng)估漿液性卵巢癌級(jí)別提供新思路及可靠的數(shù)據(jù)支持。

綜上可知,血清miR-1246、HE4、YKL-40與漿液性卵巢癌級(jí)別呈正相關(guān),聯(lián)合診斷價(jià)值較高,而且與生存預(yù)后聯(lián)系緊密,可為臨床診治提供有效信息。本研究的不足之處:受臨床資料收集和時(shí)間限制,僅隨訪并統(tǒng)計(jì)了患者2年的生存情況,今后應(yīng)延長(zhǎng)隨訪時(shí)間,以得出更全面可靠的結(jié)論。