滕立勤 王思寅 董 穎

肝癌是發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤,早期常無癥狀,病情不斷進(jìn)展可逐漸誘發(fā)乏力、肝區(qū)疼痛、腹脹等癥狀,若不及時治療,癌細(xì)胞可經(jīng)血液循環(huán)等多種途徑發(fā)生轉(zhuǎn)移,增加患者死亡風(fēng)險[1-2]。冠心病則為常見心血管疾病,多由冠脈供血不足所致,可引起心肌缺血缺氧性損傷,影響心功能[3]。兩種疾病合并后可使得病情更為復(fù)雜,肝癌治療過程中需做好冠心病基礎(chǔ)治療,以避免急性心血管事件的發(fā)生,改善患者預(yù)后。肝癌治療多以早確診、早治療為原則,早期患者預(yù)后尚可,中晚期則生存率較低,且肝癌惡性程度高,即使經(jīng)手術(shù)為主的綜合方案治療后,仍存在較高的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險,尤其在合并冠心病的前提下,其預(yù)后更差,故臨床需深入研究肝癌相關(guān)分子機(jī)制,為抗腫瘤治療尋找新的靶點,以便于提高整體生存率[4]。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)是1種促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長的特異性因子,其在多種惡性腫瘤中存在異常表達(dá),與腫瘤血管生成關(guān)系密切[5-6]。同時,VEGF在冠心病中也存在明顯表達(dá),與冠心病患者動脈狹窄程度存在一定相關(guān)性。但VEGF表達(dá)在肝癌合并冠心病患者中相關(guān)研究較少,且具體表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系值得進(jìn)一步研究。鑒于此,本研究分析VEGF表達(dá)與肝癌合并冠心病患者預(yù)后的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年5月至2019年5月我院收治的90例肝癌合并冠心病患者臨床資料。其中男性49例,女性41例;年齡51～76歲,平均年齡(62.52±5.32)歲;體質(zhì)量指數(shù)18.6～28.3 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(23.63±2.19)kg/m2;冠心病病程1～8年,平均病程(3.86±0.42)年;Child-Pugh分級:50例A級,40例B級;文化程度:35例高中及以上,55例初中及以下。納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)手術(shù)病理證實為肝癌;經(jīng)冠脈造影確診為冠心病;精神狀態(tài)正常;臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):存有肝腎功能衰竭;存有凝血功能障礙;合并急慢性感染;伴有其他惡性腫瘤;術(shù)前行放化療。

1.2 方法

所有患者均行手術(shù)治療,術(shù)中切除癌組織,并切除癌旁正常組織,術(shù)后及時送檢,采用免疫組織化學(xué)法檢測癌組織及癌旁組織內(nèi)VEGF表達(dá)。免疫組化染色:組織標(biāo)本先用10%甲醛溶液固定24 h后,之后常規(guī)脫水,以石蠟包埋,連續(xù)切片,保持厚度4 μm;采用檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復(fù),待自然冷卻后,以PSB沖洗,之后3%過氧化氫封閉;滴加一抗后在4攝氏度環(huán)境下孵育過夜,再以PBS液沖洗,加入二抗后孵育30 min,再次PBS液沖洗;滴入DAB顯色液進(jìn)行顯色處理,返藍(lán)10 min,以蒸餾水沖洗,蘇木精復(fù)染,再以清水沖洗后,酒精分化,返藍(lán),梯度酒精脫水,二甲苯透明,最后以中性樹膠封片,鏡下觀察染色情況。結(jié)果判斷:VEGF陽性表達(dá)可在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒,并每張切片選取5個高倍鏡視野觀察,計算陽性細(xì)胞比;著色強(qiáng)度:0分為無色,1分為黃色,2分為棕黃色,3分為棕黃色;陽性細(xì)胞比:0分為<5%,1分為6%～25%,2分為26%～50%,3分為51%～75%,4分為>75%;兩者乘積>3分為陽性,反之為陰性。所有患者開展長達(dá)3年隨訪,隨訪內(nèi)容為存活情況,隨訪方式為電話或門診復(fù)查。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)VEGF表達(dá)情況:兩組均采集癌組織及癌旁組織行免疫組織化學(xué)法檢測,比較癌組織與癌旁組織內(nèi)VEGF表達(dá)差異。(2)VEGF表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系:比較不同VEGF表達(dá)患者年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)、腫瘤直徑、分化程度、腫瘤分期、肝功能分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、冠脈狹窄程度等的差異,其中冠脈狹窄程度通過冠脈造影進(jìn)行明確。(3)VEGF表達(dá)與預(yù)后間相關(guān)性:隨訪3年,統(tǒng)計90例患者存活情況,比較不同VEGF表達(dá)患者存活率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 VEGF表達(dá)情況

癌組織VEGF陽性表達(dá)率高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組VEGF表達(dá)情況比較(例,%)

2.2 VEGF表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

腫瘤直徑≥5 cm、分化程度低分化、腫瘤分期Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、冠脈狹窄程度重度狹窄患者VEGF陽性表達(dá)率,高于腫瘤直徑<5 cm、分化程度中高分化、腫瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、冠脈狹窄程度輕中度狹窄患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 VEGF表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系(例,%)

2.3 VEGF表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性

隨訪3年,90例患者存活55例,存活率為61.11%(55/90);VEGF陽性表達(dá)組存活率低于VEGF陰性表達(dá)組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表3。

表3 不同VEGF表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性(例,%)

3 討論

肝癌病因復(fù)雜,臨床認(rèn)為在病毒感染、肝硬化、不良飲食等多種因素長期影響下,可影響肝細(xì)胞的DNA系統(tǒng),使得肝細(xì)胞生長出現(xiàn)增殖失控現(xiàn)象,最終發(fā)生癌性變化,形成惡性腫瘤[7-8]。而肝臟為人體代謝重要器官,且存在豐富血供,一旦發(fā)生惡性變化則對機(jī)體代謝損傷較大,且腫瘤在獲得充足營養(yǎng)后能迅速增長,并持續(xù)侵襲周圍組織,患者死亡風(fēng)險較高。冠心病也是危害人類健康的重要疾病,肝癌與冠心病并發(fā)后會加重患者病情進(jìn)展,使得整體預(yù)后欠佳[9]。因此,臨床需尋找一種能夠?qū)Ω伟┖喜⒐谛牟』颊哳A(yù)后進(jìn)行良好預(yù)測的分子標(biāo)志物,為臨床治療提供指導(dǎo),以提高患者生存率。

腫瘤血管生成一直以來都是惡性腫瘤研究熱點,腫瘤的生長離不開血管生成,當(dāng)血供豐富,則可為腫瘤生長、轉(zhuǎn)移提供提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)[10-11]。而VEGF則是一種高度特異性促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子,能夠選擇性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞膜絡(luò)氨酸激酶受體,使得內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂加速,從而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖,加快內(nèi)皮細(xì)胞遷移速度,促使微血管形成[12-13]。正常情況下VEGF在機(jī)體內(nèi)處于低表達(dá)狀態(tài),當(dāng)惡性腫瘤發(fā)生后可見VEGF表達(dá)水平升高,且在大腸癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等多種惡性腫瘤內(nèi)均可見VEGF高表達(dá),故VEGF表達(dá)水平在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中具有重要作用。本研究結(jié)果顯示,癌組織VEGF陽性表達(dá)率高于癌旁組織,腫瘤直徑≥5 cm、分化程度低分化、腫瘤分期Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、冠脈狹窄程度重度狹窄患者VEGF陽性表達(dá)率高于腫瘤直徑<5 cm、分化程度中高分化、腫瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、冠脈狹窄程度輕中度狹窄患者;90例患者中存活55例,存活率為61.11%(55/90),VEGF陽性表達(dá)組存活率低于VEGF陰性表達(dá)組。提示VEGF在肝癌合并冠心病患者中呈高表達(dá),腫瘤直徑長、分化程度低、腫瘤分期高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者表達(dá)水平更高,且陽性表達(dá)高患者存活率低,能夠較好的預(yù)測患者預(yù)后。其原因為當(dāng)VEGF處于高表達(dá)狀態(tài)時,可加速腫瘤新生血管生成,從而為腫瘤生長提供充足營養(yǎng),增強(qiáng)腫瘤增殖、侵襲能力,故腫瘤體積大,臨床分期高,也更易發(fā)生轉(zhuǎn)移[14-15]。而臨床分期高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均為影響肝癌合并冠心病患者預(yù)后的高危因素,故VEGF陽性表達(dá)患者整體預(yù)后較差。本研究結(jié)果顯示,冠脈重度狹窄患者VEGF陽性表達(dá)更高。其原因為心肌處于缺血缺氧狀態(tài)時,可促使VEGF表達(dá)增加,以加速內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移,誘導(dǎo)血管生成,盡早建立側(cè)支循環(huán),在缺血心肌組織中起到重要代償作用。而冠心病狹窄程度越高則心肌缺氧越嚴(yán)重,也會進(jìn)一步誘發(fā)VEGF表達(dá),當(dāng)合并肝癌時則會加速腫瘤血管形成,故預(yù)后較差。但本研究納入樣本量較少,所得研究結(jié)果仍可能存在一定偏倚,后續(xù)還需擴(kuò)大樣本量,開展大樣本研究,以進(jìn)一步剖析VEGF在肝癌合并冠心病患者中的表達(dá)。

綜上所述,VEGF表達(dá)與肝癌合并冠心病患者預(yù)后關(guān)系密切,當(dāng)VEGF高表達(dá)時,則腫瘤分期高、分化程度低,且易經(jīng)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,故患者存活率較低。