李錦巍 劉 晴 馬艷美 秦 雪

子宮內(nèi)膜癌常見婦科惡性腫瘤疾病之一,目前認(rèn)為此類疾病的發(fā)生與遺傳、老齡化等有關(guān)[1]。其發(fā)病率較高,已經(jīng)成為育齡期女性身體健康的主要原因之一[2]。據(jù)報(bào)道[3],糖尿病或者肥胖人群中發(fā)生子宮內(nèi)膜癌幾率更大。研究稱,遠(yuǎn)期隨訪發(fā)現(xiàn),子宮內(nèi)膜癌患者出現(xiàn)多臟器功能障礙的幾率最高可達(dá)到5%,其中處于晚期的患者疾病進(jìn)展更快。通過對(duì)子宮內(nèi)膜癌發(fā)生和發(fā)展過程中腫瘤相關(guān)蛋白水平進(jìn)行監(jiān)測,可以預(yù)測腫瘤進(jìn)展程度。Ras相關(guān)蛋白1b(RAS-associated protein 1b,Rap 1b)屬于一類Ras樣GTP酶,主要參與機(jī)體免疫及造血系統(tǒng)[4]。也有研究發(fā)現(xiàn)[5],Rap 1b與其靶分子參與多種癌癥疾病的發(fā)生和發(fā)展。但是關(guān)于Rap 1b蛋白與子宮內(nèi)膜的關(guān)系報(bào)道較少,本次研究探討Rap 1b蛋白在子宮內(nèi)膜組織表達(dá)及與臨床病理參數(shù)關(guān)系,為明確Rap 1b蛋白作為疾病預(yù)測指標(biāo)具有參考意義,內(nèi)容報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選取2017年3月至2019年6月于我院病理中心收集的子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本82例(癌組織)。納入標(biāo)準(zhǔn):其中子宮內(nèi)膜癌疾病均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的第四版《子宮內(nèi)膜癌診斷與治療指南》中診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],均進(jìn)行病理學(xué)檢查,且均未進(jìn)行放、化療等治療干預(yù);均具有分娩史。排除標(biāo)準(zhǔn):既往均無惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)類、機(jī)體重要臟器等疾病史;入院資料不完整。同時(shí)期選取子宮脫垂等手術(shù)過程中獲取的正常子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本45例(正常組織)。年齡39～72歲,平均年齡(58.3±8.5)歲,國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(Federation of International of Gynecologists and Obstetricians,FIGO)分期:其中Ⅰ期45例,Ⅱ期24例,Ⅲ期8例,Ⅳ期5例,病理分級(jí):G1 20例,G2 35例,G3 27例。病理學(xué)類型:子宮內(nèi)膜樣腺癌51例、其他類型癌31例。肌層浸潤:>1/2 38例、≤1/2 44例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例。2組基礎(chǔ)資料進(jìn)行對(duì)比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究已通過我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),且患者知情同意并已簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 主要儀器與試劑 實(shí)驗(yàn)儀器:電鏡(日立,S-9300)。實(shí)驗(yàn)試劑:4%多聚甲醛、石蠟、3%過氧化氫溶液、蘇木精(鈺博生物);山羊血清(浙江天杭生物科技有限公司);一抗抗體(Rap1b,1∶200)、二抗抗體(1∶1000)(美國phytoab)。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色法檢測子宮內(nèi)膜癌組織及癌旁組織中Rap1b蛋白表達(dá) 獲取上述癌組織及正常組織標(biāo)本,予以4%多聚甲醛溶液固定組織,常規(guī)石蠟包埋,分別進(jìn)行切片處理,厚度4 μm,再予以枸櫞酸緩沖溶液修復(fù)組織抗原,并煮沸,約10 min后,再加入適量3%過氧化氫溶液(H2O2),加山羊血清,室溫環(huán)境下封閉,約30 min后,加入一抗抗體(Rap1b,1∶200),于4 ℃孵育,過夜,次日,加入對(duì)應(yīng)的二抗抗體(1∶1000),室溫環(huán)境下孵育,約30 min后,二氨基聯(lián)苯胺溶液(DAB)顯色,再予以蘇木精溶液復(fù)染,脫水,封片,電鏡觀察。選取2名病理學(xué)專家人員判定。 Rap1b染色后呈現(xiàn)棕黃色顆粒表示為陽性。0分表示陽性細(xì)胞占比<5%;1分表示陽性細(xì)胞占比為6%～25%;2分表示陽性細(xì)胞占比26%～50%;3分表示洋相細(xì)胞占比為51%～75%;4分表示陽性細(xì)胞占比>75%。棕色3分,棕黃色2分,黃色1分,未著色0分。陽性細(xì)胞數(shù)及染色強(qiáng)度綜合評(píng)估,總分?jǐn)?shù)<2分表示陰性,≥2分表示陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)Rap1b蛋白陽性率;(2)Rap1b蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系;(3)子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后與Rap1b蛋白表達(dá)相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 癌組織與正常組織中Rap1b蛋白陽性率比較

癌組織Rap1b蛋白陽性率(70.73%)顯著高于正常組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 癌組織與正常組織中Rap1b蛋白陽性率比較(例,%)

2.2 Rap1b蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

不同病理分級(jí)、不同F(xiàn)IGO分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者Rap1b蛋白表達(dá)陽性率比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不同病理類型、不同肌層浸潤程度比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 Rap1b蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例,%)

2.3 子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后與Rap1b蛋白表達(dá)的關(guān)系

經(jīng)過3年隨訪后,82例子宮內(nèi)膜癌患者中死亡8例,存活率為90.24%(74/82),其中8例死亡患者中Rap1b蛋白陽性有6例。23例復(fù)發(fā),復(fù)發(fā)率為20.73%(17/82)。Rap1b陽性組3年累積存活率[87.93%(51/58)]低于Rap1b陰性組[95.83%(23/24)](χ2=1.204,P=0.273)。見圖1。

圖1 生存曲線

3 討論

不同的病理性途徑激活,可導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌腺體細(xì)胞生長異常,進(jìn)一步促進(jìn)疾病進(jìn)展。比如體質(zhì)量指數(shù)的增加或雌激素活性異常上升后,均可以促進(jìn)子宮內(nèi)膜腺體的異常分化,從而進(jìn)一步增加疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[7]。臨床上主要通過評(píng)估子宮內(nèi)膜癌患者病理特征指標(biāo),從而為患者制定符合疾病病情的診療方案,也可評(píng)估患者的預(yù)后恢復(fù)情況。糖鏈蛋白125(CA125)、糖鏈蛋白199(CA199)等均可以作為疾病病情的評(píng)估指標(biāo),但是參考價(jià)值較低,尤其對(duì)于不同臨床病理分期或不同分化程度的患者預(yù)測價(jià)值均較低[8]。影像學(xué)檢查在腫瘤疾病病理特征中具有重要作用,但是也具有一定不足,如存在滯后性,導(dǎo)致疾病診斷的假陰性率高[9]。本研究分析Rap1b蛋白在子宮內(nèi)膜癌患者中的表達(dá)水平,可為臨床提供定量化參考。Rap1b屬于Ras家族關(guān)鍵成員之一,其活性被異常激活之后,可參與多種腫瘤疾病的發(fā)生和發(fā)展[10]。如劉云昊的研究中[11],研究表示Rap1b在胃癌組織內(nèi)表達(dá)明顯較正常組織高,且與患者預(yù)后不良呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。又如高雅茹等研究報(bào)道[12],下調(diào)Rap1b蛋白表達(dá),可以抑制卵巢癌細(xì)胞遷移及侵襲,進(jìn)而抑制卵巢癌疾病進(jìn)展。又如張靈敏等研究發(fā)現(xiàn)[13],調(diào)節(jié)Rap1b蛋白表達(dá)可以促進(jìn)是食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的遷移等。上述研究均表明Rap1b蛋白表達(dá)參與多種癌癥疾病的發(fā)生和發(fā)展。而本次研究也顯示,Rap1b蛋白在癌組織中表達(dá)較正常組織高,研究結(jié)果與以往Rap1b蛋白在其他腫瘤疾病中的結(jié)果具有一致性,基于此實(shí)驗(yàn)結(jié)果,進(jìn)一步推測Rap1b蛋白參與了子宮內(nèi)膜癌疾病進(jìn)展。

Rap1b蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)不同病理分級(jí)、不同F(xiàn)IGO分期、是否出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者Rap1b蛋白表達(dá)陽性率比較,均存在差異性,說明FIGO分期越晚、組織分化程度越差或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,Rap1b蛋白表達(dá)陽性率越高。分析其原因可能由于Rap1b蛋白通過調(diào)節(jié)PI3K/AKT/mTOR通路或β-catenin通路等抑制子宮內(nèi)膜癌自噬、凋亡或促進(jìn)其生長轉(zhuǎn)移,促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生物學(xué)行為,最終加劇疾病進(jìn)展[14-15]。但是在不同病理類型、不同肌層浸潤程度比較,不存在統(tǒng)計(jì)差異,表明子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞穿過基底膜組織過程中,Rap1b蛋白對(duì)其無任何影響[16-17]。經(jīng)過3年的隨訪發(fā)現(xiàn),Rap1b陽性組2年累積存活率87.93%(51/58)低于Rap1b陰性組95.83%(23/24)(χ2=1.204,P=0.273)。通過檢測Rap1b蛋白陽性與患者預(yù)后可能有關(guān),無顯著性差異可能與納入樣本量數(shù)少有關(guān)。

綜上所述,Rap1b蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌疾病進(jìn)展密切相關(guān),可以成為子宮內(nèi)膜癌疾病早期診斷、治療及預(yù)測預(yù)后的指標(biāo)。但是本次研究也存在局限性,實(shí)驗(yàn)次數(shù)數(shù)較少,研究結(jié)果準(zhǔn)確性待進(jìn)一步提高。