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        泛素E3連接酶膜相關(guān)鋅指蛋白2高表達(dá)與胃癌臨床分期、侵襲性及預(yù)后的相關(guān)性

        2023-07-12 03:50:16武偉龍洪永貴溫艷艷
        實(shí)用癌癥雜志 2023年7期
        關(guān)鍵詞:泛素著色胃癌

        武偉龍 洪永貴 溫艷艷

        我國是胃癌的高發(fā)國,每年新增胃癌病例數(shù)已超過90萬。胃癌具有較高的侵襲性及易轉(zhuǎn)移性,故胃癌患者預(yù)后一般較差[1-2]。泛素-蛋白酶體系(ubiqutin proteasome system,UPS)是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解的主要途徑,關(guān)系到多種疾病的發(fā)生與發(fā)展[3]。泛素連接酶E3是UPS重要的組成成分,UPS關(guān)鍵蛋白E3異??赡芘c癌癥的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)[4]。泛素E3連接酶膜相關(guān)鋅指蛋白2(membrane-associated RING CH2,MARCH2)是一種E3泛素連接酶,參與DNA修復(fù)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等生理活動[5]。為研究胃癌組織內(nèi)MARCH2蛋白表達(dá)水平,及其與患者預(yù)后之間的關(guān)系,我院開展如下研究。

        1 材料與方法

        1.1 一般資料

        胃癌組織及癌旁組織標(biāo)本來自2019年8月至2021年7月間醫(yī)院收治的96例行胃癌根治術(shù)治療的患者。所有患者術(shù)前均未接受過其他抗癌相關(guān)治療,病理標(biāo)本經(jīng)病理科醫(yī)生鑒定為胃癌,其中病理組織類型:Ⅰ~Ⅱ級45例,Ⅲ~Ⅳ級51例;浸潤深度:T1~T2 19例,T3~T4 77例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移59例;AJCC TNM分期:Ⅰ~Ⅱ期40例,Ⅲ~Ⅳ期56例;腫瘤大小:<3 cm 23例,3~7 cm 39例,>7 cm 34例。96例患者術(shù)后生存資料均由隨訪獲得,隨訪時間5~47個月,平均(34.51±6.16)個月。

        1.2 免疫組織化學(xué)檢測

        檢測試劑包括兔抗人MARCH2多克隆抗體(美國Abcam公司),SP免疫組化超敏染色試劑盒。

        采用免疫組化SP法染色,高壓抗原修復(fù),使用1 mmol/L EDTA(PH=9.0)修復(fù)液,一抗為MARCH2(1∶100),嚴(yán)格試劑盒相關(guān)說明進(jìn)行操作,MARCH2陽性片作為陽性對照組,PBS代替一抗作為陰性對照。

        結(jié)果判定:每張切片隨機(jī)觀察5個具有代表意義的高倍鏡,每個高倍鏡視野計數(shù)150~200個細(xì)胞,采用免疫反應(yīng)評分法,結(jié)合著色細(xì)胞占比與著色強(qiáng)度,表示蛋白表達(dá)水平。著色細(xì)胞占比計分規(guī)則:著色細(xì)胞占計數(shù)細(xì)胞百分率≤5%、>5%~25%、>25%~50%、>55%~75%、>75%~100%分別得0分、1分、2分、3分、4分。著色強(qiáng)度計分規(guī)則:未著色、淡黃色、黃色、棕色分別得0分、1分、2分、3分??偟梅?分為陰性,1~4分為弱陽性(+)、5~8分為中等陽性(++)、9~12分為強(qiáng)陽性(+++)。

        1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

        2 結(jié)果

        2.1 胃癌組織與癌旁組織內(nèi)MARCH2陽性表達(dá)情況比較

        胃癌組織內(nèi)MARCH2陽性表達(dá)率為72.92%,高于癌旁組織的8.33%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=83.001,P<0.001),見表1。

        表1 胃癌組織與癌旁組織內(nèi)MARCH2陽性表達(dá)情況比較/例

        2.2 胃癌組織內(nèi)MARCH2表達(dá)情況與患者病理特征的關(guān)系

        胃癌患者癌灶組織內(nèi)MARCH2陽性表達(dá)與胃癌浸潤深度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05),與患者年齡、性別、腫瘤大小、TNM分期以及分化程度無關(guān)(P>0.05),見表2。

        表2 胃癌組織內(nèi)MARCH2表達(dá)情況與患者病理特征的關(guān)系/例

        2.3 高表達(dá)MARCH2與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系分析

        將胃癌組織內(nèi)MARCH2 中、強(qiáng)陽性表達(dá)者納為MARCH2強(qiáng)陽性表達(dá)組,其余患者納為對照組。隨訪5~47個月,平均隨訪(34.51±6.16)個月,繪制生存曲線發(fā)現(xiàn),強(qiáng)陽性組患者生存時間短于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Rank=8.923,P=0.003)。見圖1。

        圖1 不同MARCH2表達(dá)強(qiáng)度胃癌患者生存曲線

        3 討論

        UPS是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解的主要途徑,在維持細(xì)胞功能及穩(wěn)定性中起著重要作用[6-7]。MARCH2是MARCH家族的成員之一,具有E3連接酶活性的RING-CH結(jié)構(gòu)域,MARCH蛋白可識別各種膜蛋白,尤其是免疫相關(guān)的細(xì)胞膜表面受體以及泛素化蛋白。作為包含2個跨膜段的MARCH家族成員,MARCH2主要位于細(xì)胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),能調(diào)節(jié)與其共位的膜蛋白,在控制膜蛋白轉(zhuǎn)換中扮演重要角色[8-9]。Xia D等[10]研究發(fā)現(xiàn),敲除結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞系的HARCH2基因后,癌細(xì)胞體外增殖將被抑制,同時自噬及凋亡增強(qiáng)。提示MARCH2與癌癥的發(fā)生及發(fā)展可能存在密切聯(lián)系。

        我院研究發(fā)現(xiàn),與癌旁組織相比,胃癌組織內(nèi)MARCH2陽性表達(dá)率明顯上升,MARCH2染色主要著色于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)或胞核,呈彌漫性棕色顆粒狀。對比不同病理特征胃癌患者胃癌組織內(nèi)MARCH2陽性表達(dá)情況發(fā)現(xiàn),浸潤深度T3~T4患者胃癌組織內(nèi)MARCH2陽性表達(dá)率高于T1~T2者,且淋巴轉(zhuǎn)移者胃癌組織內(nèi)MARCH2陽性表達(dá)率高于無淋巴轉(zhuǎn)移者。說明MARCH2與胃癌的浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間存在密切聯(lián)系[11]。但受到研究設(shè)計及研究條件的限制,本文并未對MARCH2在胃癌中的具體作用機(jī)制進(jìn)行研究。但門慧[12]利用體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),沉默MARCH2后,胃癌BGC823細(xì)胞系體外增殖及侵襲能力明顯下降。通過裸鼠尾靜脈實(shí)驗(yàn)表明,沉默MARCH2后,癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移率下降,證實(shí)MARCH2是一個促癌基因。

        此外,本研究對96例胃癌患者進(jìn)行4年的隨訪發(fā)現(xiàn),MARCH2高表達(dá)的胃癌患者生存時間明顯短于對照組,說明MARCH2高表達(dá)還關(guān)系到患者預(yù)后。

        綜上所述,胃癌組織內(nèi)MARCH2陽性表達(dá)率明顯上升,且MARCH2陽性表達(dá)與腫瘤浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間存在密切聯(lián)系,MARCH2高表達(dá)者預(yù)后生存時間更短,提示MARCH2可能參與胃癌的發(fā)生及發(fā)展,但其具體作用機(jī)制尚待研究。

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