安小康 丁釬州 郭明杰 周 冉 陳 濤 黃智超 鄭先杰 張國瑜

食管癌(esophageal cancer,EC)是由食管鱗狀上皮或腺上皮異常增生導(dǎo)致的惡性腫瘤,是全球第六大癌癥死亡原因,全球90%以上的食管癌是鱗狀細胞癌[1]。食管癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,其臨床特點是侵襲性強、致死率高[2]。食管癌在中國的發(fā)病率高,中國的食管癌病例占全球病例總數(shù)的一半以上[3]。在中國,超過 90% 的食管癌是鱗狀細胞癌[4]。目前治療EC首選方式是外科手術(shù)切除[5]。盡管食管切除術(shù)仍然是食管癌的主要治療方法,但食管癌具有很強的侵入性,并且與高發(fā)病率和死亡率相關(guān)[6]。Krüppel-like Factor4(KLF4)是一種進化上保守的含鋅指的轉(zhuǎn)錄因子,可調(diào)節(jié)細胞生長、增殖和分化等多種細胞過程[7]。KLF4在多種腫瘤中異常表達,在不同組織中可與不同的靶基因相互作用,發(fā)揮抑癌或促癌雙重作用[8]。但是,目前關(guān)于KLF4與食管癌的關(guān)系研究較少。本研究采用免疫組化法檢測食管癌組織中KLF4蛋白的表達水平,并分析其與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月至2020年2月本院收治的食管癌患者160例。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《食管癌診療規(guī)范》[9]標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)電子胃鏡檢查以及病理活檢診斷為食管癌;②未接受其他腫瘤治療;③患者簽署自愿受試同意書,患者及其家屬需簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):①精神疾病患者;②合并其他惡性腫瘤患者;③合并其他器官嚴重性病變患者;④不能耐受手術(shù)或麻醉者。

1.2 Krüppel-like Factor4檢測

手術(shù)中獲取患者癌組織,用4%多聚甲醛固定、脫水、包埋成石蠟標(biāo)本,切成約4 μm切片,經(jīng)常規(guī)烤片、脫蠟、水化,微波爐法抗原修復(fù)15 min,山羊血清白蛋白孵育30 min。孵育Krüppel-like Factor4 一抗,4 ℃孵育過夜,次日孵育二抗,DAB顯色,蘇木精復(fù)染,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹脂封片。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):①以切片中細胞著色深淺評分,0分表示細胞無著色;1分為淺黃色;2分為棕黃色;3分為棕褐色;②以陽性細胞數(shù)在同類細胞數(shù)中所占百分比評分:0分為無陽性細胞;1分為陽性細胞占比<10%;2分為占比10%～50%;3分為>50%。以兩項相加得分為染色結(jié)果:>2分為陽性,≤2分為陰性。

1.3 術(shù)后隨訪及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移判斷

隨訪時間自患者確診日期至截訪日期(2021年12月30日),每3個月回訪1次,隨訪方式為電話、門診復(fù)查等。術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移根據(jù)患者病史、體格檢查、影像學(xué)檢查及病理檢查確定。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 Krüppel-like Factor4在食管癌組織中的表達情況

160例患者Krüppel-like Factor4陽性表達68例(42.5%),陰性表達92例。

2.2 Krüppel-like Factor4表達水平與食管癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

Krüppel-like Factor4蛋白表達與分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)顯著相關(guān)(P<0.05),與患者的年齡、性別、腫瘤直徑均無相關(guān)性(P>0.05),見表1。

表1 Krüppel-like Factor 4 表達水平與食管癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性/例

2.3 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組和未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組Krüppel-like Factor4表達水平比較

復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組Krüppel-like Factor4陽性表達率顯著低于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組和未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組術(shù)后Krüppel-like Factor4表達水平比較/例

2.4 多因素 Logistic 回歸分析

多因素分析顯示,Krüppel-like Factor4(OR=2.012,P<0.001)是食管癌術(shù)后發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨立影響因素。見表 3。

表3 食管癌術(shù)后發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的多因素 Logistic 回歸分析

3 討論

食管癌屬于常見的消化道惡性腫瘤,具有高發(fā)病率和死亡率的特點[10]。食管癌是所有胃腸道惡性腫瘤中最具侵襲性的一種,主要包括食管上部三分之一或中部的鱗狀細胞癌(SCC),或下部三分之一或食管與胃相交處的腺癌(AC)[11-12]。手術(shù)切除被認為是食管癌治療的首選,目前常采用食管癌根治術(shù)進行治療,可有效改善患者預(yù)后,但是手術(shù)創(chuàng)傷較大,且手術(shù)切除患者5年生存率僅約25%[13-14]。食管切除術(shù)是一個復(fù)雜的過程,包括胸腔,腹部或頸部[15],其術(shù)后預(yù)后情況受以下幾個因素影響:手術(shù)方式的選擇、標(biāo)準(zhǔn)化圍手術(shù)期臨床護理方案、術(shù)后并發(fā)癥情況等[16-17]。對于浸潤性癌,經(jīng)典的經(jīng)胸食管切除術(shù)被認為是最好的腫瘤手術(shù),因為它允許完全切除腫瘤,但是術(shù)后容易出現(xiàn)食欲減退、早飽、吞咽困難、誤吸和反流等癥狀,影響患者的生活質(zhì)量[18-19]。由此可見,食管癌早期有效治療對提高生存率、促進預(yù)后改善尤為重要。

Krüppel樣因子4(KLF4/GKLF)是一種鋅指轉(zhuǎn)錄因子,KLF4屬于SP/KLF因子家族,其特征在于其羧基末端序列中的3個鋅指基序,在胃腸道上皮細胞中廣泛表達[20]。在其氨基末端,KLF4 擁有一個反式激活域(TAD)和與之相鄰的一個抑制域,它們通過與其他因子相互作用和調(diào)節(jié)DNA結(jié)合效率共同決定了KLF4轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的特異性[21-22]。研究證明了KLF4在調(diào)節(jié)結(jié)腸上皮細胞的生長和分化中的潛在作用[23]。在結(jié)腸癌細胞中,KLF4的組成型過表達誘導(dǎo)細胞周期停滯在G1期并抑制DNA合成和細胞增殖[24]。這些作用似乎是通過激活p21 WAF1/Cip1和/或抑制細胞周期蛋白D1啟動子來介導(dǎo)的[25]。研究表明,KLF4反式激活人腸堿性磷酸酶基因并促進丁酸鈉誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細胞分化和凋亡[26]。KLF4表達在各種人類癌癥類型中經(jīng)常丟失,例如結(jié)直腸癌、胃癌、食道鱗狀細胞癌、腸癌、前列腺癌和膀胱癌[27]。本研究中Krüppel-like Factor4蛋白表達與分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)顯著相關(guān),復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組術(shù)后Krüppel-like Factor4陽性表達率顯著低于未復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組,提示Krüppel-like Factor4與食管癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移存在一定的關(guān)聯(lián)。進一步進行多因素分析,結(jié)果顯示Krüppel-like Factor4(OR=2.012,P<0.001)是食管癌術(shù)后發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的獨立影響因素,提示Krüppel-like Factor4參與了食管癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,監(jiān)測患者術(shù)后組織Krüppel-like Factor4表達情況,對患者的預(yù)后評估有重要臨床意義。

綜上所述,食管癌患者術(shù)后組織中Krüppel-like Factor4表達與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性,其對患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有重要預(yù)測價值。然而本研究的樣本量有限,未來計劃開展多中心大樣本研究以增加研究結(jié)果的可信度,并開展針對性的預(yù)防措施。