董玉科 李玉杰 黃 煒 李 韜 黨燕偉 許連方 申 曉 李蓓瑩 李鴻燕 黃麗潔

喉癌屬于臨床上常見(jiàn)的惡性腫瘤疾病之一,發(fā)病率范圍為5.7%～7.6%[1]。研究報(bào)道[2],2015年在我國(guó)范圍內(nèi)新發(fā)喉癌達(dá)到2.64萬(wàn),其中死亡人數(shù)達(dá)到了1.45萬(wàn),且此類疾病的發(fā)病率依舊呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)屬于喉癌中較為常見(jiàn)的類型,占據(jù)95%以上。近幾年,臨床常通過(guò)手術(shù)、放化療及生物治療等方式用于喉癌患者,近期預(yù)后有效得到改善,但是患者遠(yuǎn)期生存效果并不理想。研究報(bào)道[3],晚期喉癌患者5年生存率僅僅51%左右,此類患者常見(jiàn)死因?yàn)榫植繌?fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移。近年來(lái),人們生活質(zhì)量明顯得到改善,使得患者對(duì)生存質(zhì)量提出更高的要求,以往治療理念是提高生存幾率,現(xiàn)如今轉(zhuǎn)變?yōu)楸M可能保留患者喉功能。由此,積極探討喉癌細(xì)胞生物學(xué)行為特征,在診斷、治療喉癌方面具有重要意義。因此,積極尋找敏感性、特異性高的生物標(biāo)志物屬于目前研究重點(diǎn)。MicroRNA屬于一類非編碼小RNA,其與微泡包裹,或者結(jié)合于蛋白質(zhì)復(fù)合物中,從而分泌至細(xì)胞外,再輸送至兩個(gè)鄰近的遠(yuǎn)處的細(xì)胞,最終發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。miRNA主要通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞通路,用于治療癌癥等。let-7a屬于MicroRNA分子中的成員之一,能與癌基因的3＇非編碼翻譯區(qū)相互作用,進(jìn)而下調(diào)靶基因表達(dá),最終抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)等[4]。關(guān)于喉癌let-7a水平與喉癌的關(guān)系尚且需要進(jìn)一步探討,為尋找新型生物標(biāo)志物提供參考,內(nèi)容如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

將2019年12月至2022年12月在本院就診的80例經(jīng)病理檢查確診為喉癌的患者作為研究對(duì)象。其中男性48例,女性32例,年齡≤60歲43例,>60歲37例,腫瘤類型:聲門(mén)上型9例,聲門(mén)型65例,聲門(mén)下型6例,分化程度:高分化52例,中低分化28例,TNM分期:Ⅰ～Ⅱ期59例,Ⅲ～Ⅳ期21例,49例吸煙,44例飲酒,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:無(wú)54例,有26例。

1.2 研究方法

采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測(cè)let-7a表達(dá)。依據(jù)Trizol試劑盒(生產(chǎn)廠家:上海名勁生物科技有限公司)說(shuō)明書(shū)步驟操作提取血清總RNA,采用Super Script Ⅲ試劑盒(北京智杰方遠(yuǎn)科技有限公司)將上述獲取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄操作,合成cDNA。采用qRT-PCR MasterMix試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司)進(jìn)行qRT-PCR,用于檢測(cè)let-7a水平。具體反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性30 s,95 ℃變性5 s,50 ℃復(fù)性15 s,75 ℃延伸30 s,包括40個(gè)cycles。內(nèi)參基因?yàn)閁6,let-7a引物來(lái)源于生工生物工程(上海)股份有限公司。采用2-△△Ct計(jì)算let-7a相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 let-7a表達(dá)與喉癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

let-7a表達(dá)量在分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較,P<0.05,在性別、年齡、腫瘤類型、吸煙史及飲酒史方面比較,P>0.05。見(jiàn)表1。

表1 let-7a表達(dá)與喉癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.2 ROC曲線分析let-7a水平診斷喉癌的價(jià)值

ROC曲線分析顯示,曲線下面積(Area Un-der Curve,AUC)為0.851,95%置信區(qū)間為0.775～0.933,靈敏度為73.9%,特異度為78.2%,let-7a相對(duì)表達(dá)量的最佳臨界值為0.77。見(jiàn)圖1。

圖1 ROC曲線分析let-7a水平診斷喉癌的價(jià)值

3 討論

let-7屬于一類序列、表達(dá)模式、調(diào)控功能均高度保守的miRNA,let-7a是let-7家族成員之一。研究報(bào)道[5],let-7a屬于腫瘤抑制因子。let-7a在肺癌[6]、乳腺癌[7]、淋巴瘤[8]等疾病中表達(dá)較低,說(shuō)明低水平的let-7a在多種腫瘤疾病的發(fā)生和發(fā)展中具有重要作用。研究顯示[9],let-7a可負(fù)性調(diào)控基因表達(dá)水平,抑制頭頸癌疾病進(jìn)展。又如周斌等的研究稱[10],甲狀腺乳頭狀癌患者let-7a表達(dá)水平明顯下調(diào)。let-7a在不同惡性腫瘤疾病的作用及可能存在的機(jī)制越來(lái)越深入,let-7a可指望成為評(píng)估腫瘤患者病情、預(yù)后的分子標(biāo)志物。目前關(guān)于miRNA與腫瘤疾病的關(guān)系研究報(bào)道較多,但是關(guān)于let-7a與喉癌的關(guān)系值得深入探討。

本次研究結(jié)果顯示,喉癌患者let-7a表達(dá)量在分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面比較,P<0.05,此項(xiàng)研究結(jié)果說(shuō)明let-7a水平的下降與喉癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移存在關(guān)系。研究稱[11],上調(diào)喉癌細(xì)胞中l(wèi)et-7a表達(dá),可通過(guò)靶向抑制高遷移率族蛋白A2(high Mobility Group A2,HMGA2)表達(dá),進(jìn)一步控制細(xì)胞增殖、遷移等,而通過(guò)下調(diào)let-7a,并促進(jìn)HMGA2表達(dá)上升后,腫瘤細(xì)胞惡性程度增強(qiáng)。ROC曲線分析顯示,let-7a水平診斷喉癌AUC為0.851,靈敏度為73.9%,特異度為78.2%,說(shuō)明let-7a對(duì)喉癌患者病情監(jiān)測(cè)具有一定參考價(jià)值。

綜上所述,let-7a水平在喉癌呈低表達(dá),其水平變化與分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),且且可作為預(yù)測(cè)喉癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)敏感指標(biāo)。但是let-7a輔助診斷喉癌的價(jià)值依舊存在限制,腫瘤疾病的發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜,無(wú)法以miRNA發(fā)生變化來(lái)解釋,或許可能存在更多血清miRNA變化及機(jī)制的探討有利于挖掘喉癌疾病發(fā)生機(jī)制。