張 維,龍松權(quán),唐瑞駿

廣西壯族自治區(qū)桂林市中醫(yī)醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科;2.病理科,廣西桂林 541002

乳腺癌是全球最常見(jiàn)的癌癥之一,GLOBOCAN 2020年最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,全球范圍內(nèi)約有230萬(wàn)乳腺癌新發(fā)病例,占新發(fā)癌癥病例的11.7%,乳腺癌已經(jīng)超過(guò)肺癌,成為全球發(fā)病率最高的癌癥[1]。乳腺癌是一種具有高度異質(zhì)性的腫瘤,根據(jù)激素受體表達(dá)情況的不同主要分為L(zhǎng)uminal A型、Luminal B型、Her-2過(guò)表達(dá)型和Basal-like型4種分子亞型。有研究發(fā)現(xiàn),不同分子分型乳腺癌患者的臨床病理特征及預(yù)后存在差異[2]。目前,臨床上乳腺癌治療選擇和預(yù)后評(píng)估主要基于不同的分子亞型,也推薦應(yīng)用腫瘤標(biāo)志物對(duì)乳腺癌的預(yù)后進(jìn)行判斷。然而,不同分子分型的乳腺癌患者血清腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)水平是否存在差異仍不清楚。因此,本研究探討細(xì)胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、同型半胱氨酸(HCY)和糖類抗原15-3(CA15-3)在不同分子亞型乳腺癌患者中的表達(dá)情況以及與術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年3月至2021年10月就診于本院的186例乳腺癌患者為研究對(duì)象,均為女性。186例患者年齡30～68歲,平均(50.98±8.64)歲;浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌149例,導(dǎo)管內(nèi)原位癌31例,浸潤(rùn)性小葉癌6例;TNM分期Ⅰ期31例,Ⅱ期77例,Ⅲ期73例,Ⅳ期5例。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)患者均接受乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù),經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為乳腺癌;(2)術(shù)前未發(fā)生轉(zhuǎn)移,無(wú)其他惡性腫瘤病史;(3)所有患者均定期在本院復(fù)查B超、CT、MRI和乳腺X線片檢查等術(shù)后需查項(xiàng)目,復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移患者均有明確的影像學(xué)診斷與病理診斷依據(jù),且有完整的病歷資料。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)非原發(fā)性乳腺癌;(2)合并其他惡性腫瘤;(3)伴有其他嚴(yán)重內(nèi)科疾病。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。所有患者均知情同意。

1.2儀器與試劑 Roche Cobas E602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀及配套CYFRA21-1檢測(cè)試劑盒(德國(guó)Roche公司);日立7600全自動(dòng)生化分析儀及HCY檢測(cè)試劑盒(北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司);鄭州安圖Autolumo 2000 Plus全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀及配套CA15-3檢測(cè)試劑盒;HE染色液(珠海貝索生物科技有限公司);免疫組化試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司)。

1.3方法

1.3.1血液標(biāo)本采集檢測(cè) 所有研究對(duì)象均清晨空腹抽取靜脈血約5 mL置于無(wú)抗凝劑的離心管中,室溫靜置30 min后,4 000 r/min離心5 min,2 h內(nèi)完成檢測(cè);如不能及時(shí)檢測(cè)則分離血清置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。采用Roche Cobas E602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)CYFRA21-1,采用日立7600全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)HCY水平,采用鄭州安圖Autolumo 2000 Plus全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)CA15-3水平,具體操作嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。正常參考值范圍:CYFRA21-1<3.3 ng/mL;HCY<15.00 μmol/L;CA15-3<25.0 U/mL。

1.3.2免疫組化染色 患者術(shù)中取組織標(biāo)本,標(biāo)本經(jīng)中性甲醛固定,36 h內(nèi)取材,石蠟包埋標(biāo)本并制成2～4 μm厚的切片待用。組織學(xué)分級(jí)采用HE染色法,取組織石蠟切片常規(guī)HE染色。按照免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,中性樹(shù)膠封固,ER、PR陽(yáng)性物質(zhì)位于細(xì)胞核內(nèi),Her-2陽(yáng)性物質(zhì)位于細(xì)胞膜呈棕黃色顆粒,判定標(biāo)準(zhǔn):ER、PR<1%為陰性,≥1%為陽(yáng)性;Her-2-～+為陰性,+++為陽(yáng)性,++則進(jìn)行熒光原位雜交法檢測(cè)驗(yàn)證;Ki-67≥20%為高表達(dá),<20%為低表達(dá)。

1.3.3分子分型及隨訪 參照《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范:2021年版》[3],將確立的研究對(duì)象術(shù)后病理標(biāo)本作免疫組化染色,根據(jù)激素受體表達(dá)情況分型。根據(jù)《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范:2021年版》[3]建議,所有乳腺癌患者均進(jìn)行定期隨訪,術(shù)后或結(jié)束化療后2年內(nèi)每3個(gè)月隨訪一次,隨訪至2022年8月。

2 結(jié) 果

2.1不同分子分型患者檢測(cè)指標(biāo)比較 根據(jù)激素受體表達(dá)情況,186例患者中Luminal A型65例(34.95%),Luminal B型70例(37.63%),Her-2過(guò)表達(dá)型26例(13.98%),Basal-like型25例(13.44%)。不同分子分型乳腺癌患者CYFRA21-1和HCY水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而CA15-3水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中Her-2過(guò)表達(dá)型患者CA15-3水平明顯高于其他3種分型,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同分子分型乳腺癌患者各檢測(cè)指標(biāo)水平比較或M(P25,P75)]

2.2不同分子分型乳腺癌患者的臨床病理參數(shù)及復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移情況 所有患者術(shù)后均進(jìn)行化療,確定無(wú)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移145例,有復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移41例。不同分子分型患者間年齡、腫瘤最大徑、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ki-67表達(dá)分布比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表2。4種分子分型的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中Her-2過(guò)表達(dá)型復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率最高(38.46%),Luminal A型與Her-2過(guò)表達(dá)型的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表3。

表2 不同分子分型乳腺癌患者的臨床病理參數(shù)(n)

表3 各分子分型患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率比較

2.3術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移影響因素分析 隨訪期間,186例乳腺癌患者中無(wú)病生存率為77.96%。按是否復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移分組比較各項(xiàng)指標(biāo),結(jié)果顯示,復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移組更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、CA15-3水平更高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表4。以預(yù)后狀態(tài)(復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移=1,未復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移=0)為因變量,以患者年齡(≥50歲=1,<50歲=0)、腫瘤最大徑(≥2.0 cm=1,<2.0 cm=0)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(是=1,否=0)、Ki-67表達(dá)(≥20%=1,<20%=0)、CYFRA21-1(≥3.3 ng/mL=1,<3.3 ng/mL=0)、CA15-3(≥25.0 U/mL=1,<25.0 U/mL=0)為協(xié)變量,進(jìn)行Cox回歸分析。結(jié)果顯示,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和CA15-3≥25.0 U/mL是乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),見(jiàn)表5。

表4 復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移組和未復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移組各項(xiàng)指標(biāo)比較或n或M(P25,P75)]

表5 乳腺癌患者復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的Cox回歸分析

3 討 論

基于激素受體表達(dá)情況的不同,乳腺癌存在不同的分子亞型,不同亞型之間有不同的臨床表現(xiàn)和病理特征[4-5]。乳腺癌分子分型的提出使乳腺癌的個(gè)體化治療實(shí)現(xiàn)了由宏觀到微觀的轉(zhuǎn)變,使乳腺癌治療進(jìn)入精準(zhǔn)治療時(shí)代[6]。本研究對(duì)納入的186例乳腺癌患者進(jìn)行分子分型,結(jié)果顯示管腔型乳腺癌比例高于其他亞型乳腺癌,其中Luminal A型65例(34.95%)、Luminal B型70例(37.63%)、Her-2過(guò)表達(dá)型26例(13.98%)、Basal-like型25例(13.44%),與劉鐘芬等[7]報(bào)道的結(jié)果相接近。CA15-3是乳腺上皮細(xì)胞分泌的一種糖蛋白抗原,是目前公認(rèn)的對(duì)乳腺癌有較高特異度的腫瘤標(biāo)志物[8]。本研究對(duì)乳腺癌4種分子分型間腫瘤標(biāo)志物的分析結(jié)果顯示,Her-2過(guò)表達(dá)型乳腺癌患者CA15-3水平明顯高于其他分型,提示臨床乳腺癌患者血清高水平CA15-3可能為Her-2過(guò)表達(dá)型的重要標(biāo)志物,術(shù)前檢測(cè)CA15-3有助于預(yù)測(cè)乳腺癌的分子分型和預(yù)后,為后期精準(zhǔn)個(gè)體化治療提供依據(jù)。

本研究中對(duì)乳腺癌患者的臨床病理參數(shù)分析顯示,年齡、腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ki-67表達(dá)在乳腺癌不同分子分型間的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與成祥君等[9]報(bào)道的結(jié)果一致。然而,亦有學(xué)者研究報(bào)道不同分子分型乳腺癌患者絕經(jīng)狀態(tài)、腫瘤最大徑及組織學(xué)分級(jí)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)[10]。分析其原因可能是本次研究為單中心回顧性分析,入組病例數(shù)較少,混雜因素較多,從而造成各研究之間存在差異,需要后期聯(lián)合多中心、大樣本量進(jìn)一步研究。4種分子分型的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率比較中,Her-2過(guò)表達(dá)型復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率最高(38.46%),表明Her-2陽(yáng)性乳腺癌患者侵襲性較高,更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差。因此,臨床上對(duì)于Her-2過(guò)表達(dá)型乳腺癌患者應(yīng)更加重視,加強(qiáng)隨訪、提高復(fù)查頻率。通過(guò)多因素Cox回歸分析發(fā)現(xiàn),乳腺癌患者預(yù)后與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及血清CA15-3水平密切相關(guān)。乳腺癌患者血清CA15-3水平越高,越容易發(fā)生復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,預(yù)后越差[11]。

總之,不同分子分型的乳腺癌具有異質(zhì)性,患者血清腫瘤標(biāo)志物表達(dá)不同;分子分型結(jié)合血清腫瘤標(biāo)志物以及相關(guān)危險(xiǎn)因素分析可為乳腺癌精準(zhǔn)個(gè)體化治療提供臨床依據(jù)。