云忠祥　譚亮　冀恬　李玉林　皮立

己酸乙酯是濃香型白酒的主體香，其含量影響著濃香型白酒的品質(zhì)。GB/T10345-2022《白酒分析方法》建議采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行己酸乙酯含量的測(cè)定，而氣相色譜外標(biāo)法具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，比較適合于大批量白酒中己酸乙酯的測(cè)定。為此，本研究利用氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定濃香型白酒中己酸乙酯含量，并通過外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法對(duì)己酸乙酯作出分析比較，結(jié)果表明內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法無顯著性差異，而且使用外標(biāo)法檢測(cè)己酸乙酯可以簡(jiǎn)化操作步驟，提升檢測(cè)效率，符合現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)的要求，值得推廣，并建議在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中增加外標(biāo)法測(cè)定白酒中己酸乙酯的方法。

一、試劑與儀器

1.試劑。己酸乙酯（色譜純，純度≥99.9%；CSA號(hào)：123-66-0；批號(hào)：E808752-100mL），上海麥克林生化科技有限公司；乙酸正戊酯（色譜純，純度≥99.7%；CSA號(hào)：628-63-7；批號(hào)：R109075-100mL），上海麥克林生化科技有限公司；乙醇（色譜純，純度≥99.9%；CSA號(hào)：64-17-5；批號(hào)：20221013306），山東禹王新材料科技有限公司。

2.儀器。AgilentGC-7890B氣相色譜，配有7683自動(dòng)進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測(cè)器FID，美國(guó)安捷倫公司；梅特勒-托利多MS205DU精密電子天平，瑞士MettlerToledo公司；QL-861渦旋振蕩器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；高純氮?dú)猓兌取?9.999%）、高純氫氣（純度≥99.999%）、GA-2000A低噪音空氣泵，北京中興匯利科技發(fā)展有限公司。

二、試驗(yàn)與方法

1.溶液配制。（1）己酸乙酯儲(chǔ)備液25000mg/L，準(zhǔn)確稱取2.50g己酸乙酯至100mL容量瓶中，用乙醇溶液（50%）定容至刻度，混勻備用。（2）乙酸正戊酯儲(chǔ)備液20000mg/L，準(zhǔn)確稱取2.00g乙酸正戊酯至100mL容量瓶中，用乙醇溶液（50%）定容至刻度，混勻備用。（3）分別吸取己酸乙酯0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.6mL、3.2mL于5個(gè)10mL容量瓶中，用乙醇溶液（50%）定容，充分混勻，配制成250mg/L、500mg/L、1000mg/L、2000mg/L、4000mg/L、8000mg/L的系列工作液，混勻備用。內(nèi)標(biāo)法己酸乙酯系列標(biāo)準(zhǔn)工作液需要在定容后加入0.1mL乙酸正戊酯內(nèi)標(biāo)溶液，混勻備用。

2.氣相色譜條件。進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：250℃；進(jìn)樣量：1μL；分流比：1：37；載氣：氮?dú)?；柱流速?mL/min；色譜柱程序升溫：35℃（保持4min），以5℃/min升溫至60℃（保持4min），以10℃/min升溫至150℃（保持2min），再以15℃/min升溫至210℃（保持6min）；色譜柱：LZP-930白酒分析專用柱（柱長(zhǎng)60m×內(nèi)徑0.53mm×膜厚0.25mm）。

3.樣品測(cè)定。吸取酒樣于10mL容量瓶中，內(nèi)標(biāo)法需要在樣品中加入0.1mL乙酸正戊酯內(nèi)標(biāo)溶液，混勻測(cè)定。外標(biāo)法按上述色譜條件將標(biāo)液測(cè)定，以保留時(shí)間定性己酸乙酯，以濃度為縱坐標(biāo)、己酸乙酯的峰面積為橫坐標(biāo)作一曲線。內(nèi)標(biāo)法己酸乙酯系列標(biāo)準(zhǔn)工作液需要在定容后加入0.1mL乙酸正戊酯內(nèi)標(biāo)溶液，以濃度為縱坐標(biāo)、己酸乙酯的峰面積與乙酸正戊酯的峰面積之比為橫坐標(biāo)作一曲線。白酒樣品直接進(jìn)行6次樣品平行分析。

三、結(jié)果與分析

1.己酸乙酯的色譜分析圖。外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法測(cè)定白酒中己酸乙酯的色譜圖詳見圖1。在采用內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法時(shí)，己酸乙酯的保留時(shí)間均為16.401min，乙酸正戊酯的出峰時(shí)間為13.656min，其特征峰明顯，兩者互不干擾，分離度好。

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果做線性回歸分析，并得出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，以信噪比為3（S/N=3）計(jì)算檢出限，線性范圍、相關(guān)系數(shù)及檢出限詳見表1。結(jié)果表明，己酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)曲線具有很好的線性關(guān)系，其檢出限遠(yuǎn)低于該目標(biāo)物在所檢測(cè)白酒中的含量，能夠滿足濃香型白酒中己酸乙酯的檢測(cè)要求。

2.內(nèi)標(biāo)法分析結(jié)果。選取六種不同濃度的濃香型白酒，每個(gè)樣品平行取6次平行樣進(jìn)行測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法分析結(jié)果詳見表2。

3.外標(biāo)法分析結(jié)果。選取6種不同濃度的濃香型白酒，每個(gè)樣品平行取6次平行樣進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法分析結(jié)果詳見表3。從兩種測(cè)定方法對(duì)6種不同濃度的白酒的檢測(cè)結(jié)果來看，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）范圍均小于1%，符合日常檢測(cè)要求，說明兩種檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度差別不大。

4.精密度和回收率試驗(yàn)。方法的精密度以測(cè)定待測(cè)組分含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）來評(píng)價(jià)。將6種濃香型白酒進(jìn)行6次樣品平行分析，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果表明，己酸乙酯相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.3%-0.78%，說明外標(biāo)法具有良好的精密度。

方法的準(zhǔn)確度是通過待測(cè)組分在不同濃度下的回收率來評(píng)價(jià)。選取白酒樣品2#和5#，以白酒平行6次樣品分析的結(jié)果平均值作為本底值，添加與樣品含量相當(dāng)?shù)乃綕舛?，?duì)加標(biāo)樣品進(jìn)行平行6次測(cè)定，分析結(jié)果詳見表4。由表4可知，回收率為98%-103%，符合GB/T27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》的要求，說明本方法的測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

5.內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法的結(jié)果比較。選取不同濃香型白酒樣品，分別按外標(biāo)法與內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行比對(duì)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表5。根據(jù)表6的數(shù)據(jù)進(jìn)行兩種方法成對(duì)數(shù)值之間的t分布檢驗(yàn)，看其在95%的置信度水平中是否存在顯著性差異。

兩方法絕對(duì)差值的平均值dˉ=（0.0035+ 0.002+0.001+0.001+（-0.001）+0.002+（-0.002））/6=0.00075；0.0015；t==1.23。查t分布表可知：當(dāng)自由度n=6、置信度為0.95時(shí)，t（6，0.95）=1.94，實(shí)際t值小于t（6，0.95），故兩種方法之間無顯著性的差異。因此，采用外標(biāo)法測(cè)定濃香型白酒中的己酸乙酯也能取得很好的分析結(jié)果。

基金項(xiàng)目：青海省應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目“青海牦牛肉風(fēng)味組學(xué)及其相關(guān)基因挖掘”（2020-ZJ-753）。

作者簡(jiǎn)介：云忠祥（1990-），男，回族，青海大通人，助理工程師，碩士研究生，研究方向?yàn)闄z驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)。

通信作者：皮立（1972-），男，漢族，江西樟樹人，副研究員，博士，研究方向?yàn)槭称贩治黾夹g(shù)。