張 芳 王建忠 劉 金

(秦皇島市婦幼保健院兒科,河北省秦皇島市 066000)

良性癲癇伴中央顳區(qū)棘波(benign epilepsy with centrotemporal spike,BECT)是臨床兒科較為常見的良性局灶性癲癇[1]。流行病學(xué)調(diào)查顯示,70%～80%的BECT患兒在睡眠中出現(xiàn)癲癇發(fā)作[2]。BECT患兒入睡后腦電圖異常放電情況明顯增多,少數(shù)患兒表現(xiàn)為非快速眼動睡眠期棘慢波指數(shù)在50%～80%之間[3]。當(dāng)患兒的棘慢波指數(shù)在85%以上時,發(fā)生睡眠中癲癇性電持續(xù)狀態(tài)(electrical status epilepticus during sleep,ESES)風(fēng)險顯著升高[4-5]。有研究發(fā)現(xiàn)蛋白延長因子4基因中的兩個單核苷酸的多態(tài)性位點rs964112和rs986527與中央顳區(qū)棘波的腦電圖改變相關(guān)[6]。本研究探討B(tài)ECT患兒蛋白延長因子4基因的多態(tài)性及其并發(fā)ESES的影響因素,為臨床診斷提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2018年1月至2020年1月在我院確診的96例BECT患兒作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合BECT診斷標(biāo)準(zhǔn)[7];(2)單胎;(3)入院前未進(jìn)行治療。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)獲得性癲癇失語綜合征;(2)癲癇伴非持續(xù)棘慢波;(3)圍產(chǎn)期存在缺氧癥狀。其中男童52例、女童44例,患兒年齡5～12(9.49±2.56)歲,癲癇首發(fā)年齡為4～8(6.36±2.66)歲,早產(chǎn)36例、足月60例。另選取同期進(jìn)行體檢的96例健康兒童作為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)單胎;(2)同期進(jìn)行健康體檢。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)既往合并神經(jīng)性疾病;(2)合并家族遺傳性癲癇疾病。兩組研究對象基線資料比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05),見表1。根據(jù)腦電圖結(jié)果將觀察組患兒進(jìn)一步分組,將出現(xiàn)彌漫性慢波或局限性慢波合并異常放電[7]的患兒作為ESES組(n=21),其他患兒作為非ESES組(n=75)。所有研究對象的家屬均簽署知情同意書,本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會論證通過。

表1 兩組研究對象基線資料的比較

1.2 研究方法 抽取觀察組患兒入院時、對照組兒童體檢時的外周靜脈血3 mL,采用TRIzol試劑提取細(xì)胞總RNA,采用分光光度計檢測RNA濃度及純度,用PrimeScript逆轉(zhuǎn)錄試劑將RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA后進(jìn)行實時熒光定量PCR檢測。反應(yīng)體系包括cDNA模板1 μL,SYBR Green PCR Master Mix 10 μL,QN ROX Reference Dye 2 μL,上下游引物各1 μL,RNase-free水5 μL,總體積20 μL。反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃變性10 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,共40個循環(huán)。根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫發(fā)布的基因序列,采用Primer 5.0軟件分別設(shè)計相關(guān)位點的引物。rs964112的上游引物為5′CTCCCTACTTGTAAACTTGT-3′,下游引物為5′ATAGGGTTCATTCCCATACG-3′;rs986527的上游引物為5′ATCTGGAGGAAGCGGTAGTG-3′,下游引物為5′AATAGGTTTTGAGGGCCATG-3′。引物均由羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司提供。采用半巢式PCR連接的限制性片段長度多態(tài)性分析方法對研究對象樣本的基因進(jìn)行多態(tài)性分型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用Hard-Weinberg遺傳平衡檢驗分析基因位點是否符合Hard-Weinberg遺傳平衡定律。采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示,比較采用χ2檢驗;符合正態(tài)分布的計量資料以(x±s)表示,組間比較采用兩獨立樣本t檢驗。采用Logistic回歸模型分析BECT患兒出現(xiàn)ESES的危險因素。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗結(jié)果 Hardy-Weinberg平衡檢驗分析結(jié)果顯示,觀察組和對照組的蛋白延長因子4基因rs9652490及rs11856808位點基因多態(tài)性分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(χ2=0.052,P=0.776;χ2=0.526,P=0.110),說明兩組研究對象來自同一個樣本群體。

2.2 觀察組和對照組蛋白延長因子4基因rs964112和rs986527位點的基因型及等位基因頻率的比較 觀察組與對照組蛋白延長因子4基因的rs964112和rs986527位點的基因型及等位基因頻率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05),見表2。

表2 觀察組和對照組蛋白延長因子4基因rs964112和rs986527位點的基因型及等位基因頻率的比較[n(%)]

2.3 BECT患兒發(fā)生ESES的單因素分析 與非ESES組相比,ESES組患兒的年齡和癲癇首發(fā)年齡更小,存在高熱驚厥史、癲癇家族史、廣泛性3～4 Hz棘慢波、異常放電比例更高(均P<0.05),見表3。

表3 單因素分析結(jié)果

2.4 BECT患兒發(fā)生ESES的多因素分析 將是否發(fā)生ESES作為因變量,將單因素分析中差異具有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)作為自變量,納入多因素Logistic回歸模型進(jìn)行分析,賦值情況見表4。結(jié)果顯示,年齡和癲癇首發(fā)年齡較小,存在高熱驚厥史、癲癇家族史、廣泛性3～4 Hz棘慢波、異常放電均為BECT患兒發(fā)生ESES的危險因素(均P<0.05)。見表5。

表4 變量賦值表

表5 多因素分析結(jié)果

3 討 論

BECT是臨床較為常見的癲癇綜合征之一,其主要病變部位為口咽部及面部,臨床主要表現(xiàn)為吞咽困難、唾液分泌物增多、喉音,口角抽動及流口水等[8]。BECT患兒的腦電圖常表現(xiàn)為局限性放電,多發(fā)生在夜間,若未得到及時救治,可增加患兒的死亡風(fēng)險[9-10]。既往的研究已經(jīng)證實,BECT癥狀與患兒的年齡相關(guān)[11-12]。隨著年齡的增長,BECT患兒的單側(cè)舌頭和牙齦麻木及感覺異常發(fā)生率呈升高趨勢,同時可能伴隨有半側(cè)顏面抽動等[13]。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,10%的BECT患兒僅發(fā)作1次,20%的患兒多次發(fā)作,絕大多數(shù)患兒的臨床癥狀在青春期以后自行消失[14]。

目前BECT疾病的病因尚未明確,研究認(rèn)為,BECT的異常放電與蛋白延長因子4基因多態(tài)性顯著相關(guān)[15]。蛋白延長因子4可通過乙?；廖⒐艿鞍渍{(diào)節(jié)多種蛋白質(zhì)的表達(dá),對于神經(jīng)細(xì)胞的增殖及神經(jīng)元的新陳代謝具有積極的意義。當(dāng)?shù)鞍籽娱L因子4基因發(fā)生突變時,患兒神經(jīng)元細(xì)胞的新陳代謝顯著減慢[16],患兒的語言功能等相關(guān)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)中斷,神經(jīng)系統(tǒng)興奮造成環(huán)路失能[17]。所以機(jī)體的蛋白延長因子4的基因突變與神經(jīng)元細(xì)胞的異常興奮相關(guān)。本研究結(jié)果顯示,觀察組與對照組蛋白延長因子4基因的rs964112和rs986527位點的基因型及等位基因頻率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。這提示蛋白延長因子4基因的rs964112和rs986527位點與BECT的發(fā)生存在一定的關(guān)系,而G等位基因的突變,可能在一定程度上增加了患兒腦部局部病灶的異常放電風(fēng)險。邢夢楠[18]研究發(fā)現(xiàn),蛋白延長因子4等位基因G、T的突變是造成患兒病灶部位異常放電的重要影響因素,這與本研究結(jié)果相似。

BECT可出現(xiàn)在癲癇發(fā)作、ESES和認(rèn)知損傷等疾病中。ESES可出現(xiàn)在癲癇伴慢波睡眠期持續(xù)棘慢波、獲得性癲癇失語綜合征、兒童BECT變異型等疾病中。ESES可導(dǎo)致患兒預(yù)后不佳,是臨床治療的難點。本研究的多因素分析結(jié)果顯示,年齡和癲癇首發(fā)年齡較小,存在高熱驚厥史、癲癇家族史、廣泛性3～4 Hz棘慢波、異常放電均是BECT患兒發(fā)生ESES的危險因素。因此,臨床上應(yīng)對此類患者進(jìn)行針對性的干預(yù),以降低ESES發(fā)生的風(fēng)險。

綜上所述,蛋白延長因子4的rs964112和rs986527位點基因多態(tài)性可能增加了BECT的易感性,而年齡和癲癇首發(fā)年齡較小,存在高熱驚厥史、癲癇家族史、廣泛性3～4 Hz棘慢波、異常放電均是BECT患兒發(fā)生ESES的危險因素。建議對年齡和癲癇首發(fā)年齡較小,存在高熱驚厥史、癲癇家族史、廣泛性3～4 Hz棘慢波、異常放電的BECT患兒進(jìn)行早期干預(yù),以提高患兒的生命質(zhì)量。