吳亞寧,周輝輝,田雅晴,袁佳楠,程堃銘,鄭詠秋,2

(皖南醫(yī)學(xué)院 1.中藥學(xué)教研室;2.安徽省皖南地區(qū)植物藥活性篩選與再評(píng)價(jià)工程實(shí)驗(yàn)室,安徽 蕪湖 241002)

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome,IBS)是臨床常見的一種以慢性腹痛或不適及排便習(xí)慣改變?yōu)橹饕卣鞯墓δ苄阅c病[1]。流行病學(xué)調(diào)查顯示,全球人口IBS患病率高達(dá)10%～15%[2]。目前,臨床治療IBS藥物常用的解痙劑、腸道動(dòng)力感覺調(diào)節(jié)劑、益生菌或抗抑郁藥物僅能針對(duì)性改善癥狀,存在治療上的局限性[3]。而中醫(yī)藥因其具有整體調(diào)節(jié)、多靶點(diǎn)的作用和臨床實(shí)踐特點(diǎn),在IBS的治療中具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和療效[4]。

腸安Ⅱ號(hào)方是由白芍、白術(shù)等多味藥組成的痛瀉要方加減方,該加減方具有溫中散寒、疏肝補(bǔ)脾的療效,是臨床止痛止瀉的傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)性復(fù)方藥物[5],具有改善胃腸動(dòng)力,修復(fù)腸黏膜屏障作用及消炎鎮(zhèn)痛的功效[6]。

白芍是毛茛科植物芍藥的干燥根,為臨床治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎與肝病的常用中藥[7]。白術(shù)常用于腹脹泄瀉,具有調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)、抗炎、保肝、抗腫瘤等效用,在經(jīng)典名方痛瀉要方中作為君藥,是治療IBS重要中藥之一[8]。處方成分藥效分析表明白芍-白術(shù)(paeoniae radix alba-atractylodis macrocephalae rhizoma,PRA-AMR)藥對(duì)是腸安Ⅱ號(hào)方發(fā)揮促進(jìn)胃腸動(dòng)力,止痛止瀉,改善大便性狀藥效的關(guān)鍵中藥藥對(duì)[5-6]。

本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法預(yù)測(cè)腸安Ⅱ號(hào)方中PRA-AMR治療IBS的活性成分、核心靶標(biāo)和信號(hào)通路,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行分子對(duì)接,以脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的人結(jié)腸上皮HCoEpiC細(xì)胞炎癥損傷模型進(jìn)行活性成分的體外細(xì)胞驗(yàn)證,探討PRA-AMR治療IBS的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制,為臨床研究提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫(kù)與分析軟件 TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)(http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)、GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org)、PharmGKB數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.pharmgkb.org)、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)(https://db.idrblab.net/ttd/)、DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)(https://go.drugbank.com)、OMIM(https://www.omim.org)、UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.uniprot.org)、Bioconductor數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.bioconductor.org)、STRING數(shù)據(jù)庫(kù)(http://string-db.org/cgi/input.pl)、Cytoscape Version 3.8.0軟件。

1.2 藥物活性成分的篩選 在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中輸入關(guān)鍵詞“白術(shù)”“白芍”檢索其化學(xué)成分,所得成分須滿足類藥性(drug-likeness,DL)≥0.18、口服生物利用度(oral bioavaliability,OB)≥30%。同時(shí),在該數(shù)據(jù)庫(kù)獲取PRA-AMR所對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn),使用Strawberry-perl軟件,對(duì)有效成分及藥對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行匹配讀取,并篩除重復(fù)靶點(diǎn)形成數(shù)據(jù)文件。并利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)將基因靶點(diǎn)轉(zhuǎn)換為基因簡(jiǎn)稱。

1.3 IBS相關(guān)靶點(diǎn)的篩選 通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)GeneCards、DrugBank、OMIM、PharmGKB、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)檢索“irritable bowel syndrome”以獲得IBS相關(guān)靶基因,并對(duì)基因進(jìn)行并集及去重,利用R×64 4.1.2合并IBS疾病相關(guān)基因并制作venn圖。

1.4 活性成分-IBS靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)模型構(gòu)建與分析 利用篩選的藥對(duì)活性成分及靶點(diǎn)和治療IBS靶點(diǎn)等相關(guān)信息導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件進(jìn)行可視化處理分析,進(jìn)而構(gòu)建PRA-AMR活性成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)模型。

1.5 PRA-AMR-IBS靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析 通過(guò)在線進(jìn)入STRING網(wǎng)站平臺(tái),將PRA-AMR活性成分靶點(diǎn)與IBS相關(guān)靶點(diǎn)的交集輸出PPI核心靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)圖,獲取蛋白相互作用關(guān)系,根據(jù)節(jié)點(diǎn)連接數(shù)目繪制柱狀圖,獲得核心靶標(biāo)基因。

1.6 生物過(guò)程注釋及代謝通路分析 通過(guò)R Studio軟件進(jìn)行京都基因與基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)和基因本體(gene ontology,GO)富集分析。將靶點(diǎn)基因做出GO功能注釋,并對(duì)KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)富集靶點(diǎn)基因參與的主要代謝途徑進(jìn)行注釋篩選,通路富集分析設(shè)定Pvalue為0.05。

1.7 分子對(duì)接驗(yàn)證 PRA-AMR核心活性成分結(jié)構(gòu)從pubchem中獲取并以sdf格式下載,通過(guò)OpenBabel 3.1.1軟件更改選擇mol 2格式。利用PDB數(shù)據(jù)庫(kù)下載文件建立靶點(diǎn)蛋白的3D結(jié)構(gòu),于AutoDock 4.2.6軟件中將活性成分與靶點(diǎn)蛋白結(jié)構(gòu)均轉(zhuǎn)為格式PD-BQT,進(jìn)行分子對(duì)接并分析結(jié)合能力。

1.8 體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

1.8.1 實(shí)驗(yàn)材料 HCoEpiC細(xì)胞(中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù));DMEM培養(yǎng)基(gibco公司);LPS(Sigma公司);IL-6 ELISA試劑盒(杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司);芍藥苷(peaoniflorin,純度≥98%,批號(hào):wkq22032903,四川省維克奇生物科技有限公司);3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮(3β-acetoxyatractylone,純度≥98%,批號(hào):MUST-21030920,成都曼斯特生物科技有限公司),噻唑藍(lán)(MTT,批號(hào):EZ7890C117,德國(guó)Biofroxx)。

1.8.2 HCoEpiC細(xì)胞培養(yǎng) 選取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HCoEpiC細(xì)胞,置于主要由DMEM與10%胎牛血清配置的完全培養(yǎng)基中,37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.8.3 MTT檢測(cè)細(xì)胞活力 將HCoEpiC接種對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞到96孔板中24 h,待細(xì)胞貼壁后,除對(duì)照組外,其余組均加入5 μg/mL LPS。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組(無(wú)LPS、無(wú)芍藥苷、無(wú)3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮);模型組(5 μg/mL LPS);芍藥苷(5、10 μmol/L)組;3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮(5、10 μmol/L)組;芍藥苷+3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮(均為5 μmol/L)組。各組分別孵育培養(yǎng)12、24、48 h,每孔加入20 μL 0.5% MTT溶液,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育4 h,棄去上清液,每孔再次加入二甲基亞砜DMSO 150 μL。低速振蕩10 min,在490 nm處測(cè)量各孔的吸光值。細(xì)胞活力=(A實(shí)驗(yàn)組-A調(diào)零組)/(A空白組-A調(diào)零組)×100%。分組中LPS、芍藥苷、3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮?jiǎng)┝烤鶇⒖枷嚓P(guān)文獻(xiàn)[10-11]。

1.8.4 ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清IL-6含量 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HCoEpiC細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)分組同1.8.3,加藥孵育12 h后收集各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清,離心除去細(xì)胞雜質(zhì),依據(jù)IL-6 ELISA試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算每組對(duì)應(yīng)的IL-6含量。

2 結(jié)果

2.1 有效成分的獲取與篩選 從TCMSP中檢索篩選得知,白芍、白術(shù)有效成分分別為13和7個(gè)。見表1～2。另將該藥對(duì)在此數(shù)據(jù)庫(kù)中分別查詢共得靶點(diǎn)1 764個(gè);后收集上述有效成分規(guī)定的靶標(biāo)信息,借助Strawberry-perl軟件,刪去重復(fù)靶點(diǎn)數(shù)據(jù)并最終將其名稱轉(zhuǎn)變成72個(gè)基因名從而構(gòu)成藥物基因文件。

表1 白芍潛在活性成分

表2 白術(shù)潛在活性成分

2.2 疾病靶點(diǎn)文件的建立 以“irritable bowel syndrome”為關(guān)鍵詞分別在Genecards、PharmGKB、OMIM、TTD、DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)中搜集IBS的疾病靶點(diǎn),在Genecards獲得基因3 098,DrugBank中獲得249,OMIM中獲得324,PharmGkb中獲得204,TTD中獲得37。在R運(yùn)行幫助下,整理上述數(shù)據(jù)庫(kù)中最終靶點(diǎn)為3 417個(gè),見圖1。

圖1 IBS疾病相關(guān)靶點(diǎn)交集

2.3 PRA-AMR-疾病靶點(diǎn)文件的建立 將PRA-AMR的主要調(diào)控靶點(diǎn)與已取得的3 417個(gè)IBS靶基因相交,venn圖分析顯示出63個(gè)交集靶點(diǎn)。見圖2。

圖2 PRA-AMR-疾病靶點(diǎn)交集

2.4 PRA-AMR“活性成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 以已獲取的63種交集靶基因作為IBS的靶點(diǎn),運(yùn)用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建PRA-AMR“活性成分-靶點(diǎn)-IBS”相互作用網(wǎng)絡(luò),在網(wǎng)絡(luò)圖中顯示的節(jié)點(diǎn)代表該藥對(duì)活性成分、交集靶點(diǎn)基因,分別用不同顏色形狀以示明確,節(jié)點(diǎn)之間連線為邊表示相互作用關(guān)系。其中,山奈酚(kaempferol)、β-谷甾醇(beta-sitosterol)、3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮(3β-acetoxyatractylone)3種活性化合物對(duì)應(yīng)的靶基因數(shù)目最多。山奈酚對(duì)應(yīng)PTGS1,JUN,PPARG等43個(gè)靶基因;β-谷甾醇對(duì)應(yīng)PON1,PRKCAA,CASP8等25個(gè)靶基因;3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮對(duì)應(yīng)AR、GABRA1、ADRB2等11個(gè)靶基因,見圖3。

紫色表示白術(shù)活性成分;紅色表示白芍活性成分;藍(lán)色表示交集靶點(diǎn)。

2.5 PPI的構(gòu)建及其核心靶點(diǎn)的篩選 基于STRING數(shù)據(jù)庫(kù)分析獲得蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò),以進(jìn)一步探究該藥對(duì)治療IBS的作用機(jī)制。該網(wǎng)絡(luò)共有63個(gè)節(jié)點(diǎn),416條邊,見圖4。在PPI網(wǎng)絡(luò)中,代表靶點(diǎn)的節(jié)點(diǎn)之間連線數(shù)目為度(degree),連線越多,度越大,則表示靶點(diǎn)發(fā)揮作用越重要。按照度值由大到小順序篩選前30個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn),其中AKT1、IL-6度較大,分別為32和41條,為PRA-AMR作用于IBS的關(guān)鍵靶點(diǎn),見圖5。

圖4 PRA-AMR治療IBS相關(guān)靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)

圖5 PRA-AMR治療IBS的核心靶點(diǎn)(排名前30)

2.6 GO及KEGG富集分析 將PRA-AMR與IBS交集的63個(gè)靶基因進(jìn)行GO富集分析,得到GO條目1 482個(gè),其中生物過(guò)程(biological process,BP)1 293條,細(xì)胞成分(cellular component,CC)31條,分子功能(molecular function,MF)158條。依據(jù)富集程度取排名前10的GO條目繪制氣泡圖,見圖6。與生物過(guò)程相關(guān)的主要有對(duì)外來(lái)刺激的反應(yīng)、對(duì)細(xì)菌來(lái)源分子的反應(yīng)、LPS反應(yīng)等;與細(xì)胞成分相關(guān)的主要有膜筏、膜微區(qū)、突觸膜等;與分子功能相關(guān)的主要有血紅素結(jié)合、四吡咯結(jié)合等。在P<0.05條件下,KEGG分析共同靶點(diǎn)富集134條通路,主要涉及糖尿病并發(fā)癥中AGE-RAGE信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、化學(xué)致癌信號(hào)通路、肝炎(hepatitis B)信號(hào)通路、白介素-17信號(hào)通路等通路,根據(jù)P值大小評(píng)定KEGG富集程度,取排名前30的結(jié)果構(gòu)建KEGG功能富集氣泡圖(圖6D)。

A.GO-BP;B.GO-CC;C.GO-MF;D.KEGG。

2.7 分子對(duì)接驗(yàn)證 運(yùn)用分子驗(yàn)證方法預(yù)測(cè)成分與靶點(diǎn)的相互作用關(guān)系,如表3表示為7個(gè)核心活性成分化合物(白芍4個(gè)、白術(shù)3個(gè))分別與8個(gè)交集靶點(diǎn)分子對(duì)接信息,文獻(xiàn)表明結(jié)合自由能小于-5 kcal/mol時(shí),分子與靶標(biāo)結(jié)合活性良好[11]。結(jié)合力越強(qiáng),化合物作用穩(wěn)定性越好,結(jié)合能越小。由表3可知,PRA-AMR治療IBS排名首位的關(guān)鍵核心靶點(diǎn)IL-6與白芍活性成分芍藥苷(paeoniflorin)對(duì)接自由能最小,為-8.0 kcal/mol,可與IL-6穩(wěn)定結(jié)合;3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮(3β-acetoxyatractylone)與IL-6結(jié)合自由能為-6.5 kcal/mol,在白術(shù)篩選出候選活性成分中自由能最小,表明具有良好的結(jié)合。提示芍藥苷、3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮可能是PRA-AMR治療IBS的關(guān)鍵成分。對(duì)接分析如圖7。

表3 PRA-AMR活性成分與治療IBS潛在靶點(diǎn)的對(duì)接信息

2.8 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

2.8.1 芍藥苷與3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮對(duì)LPS誘導(dǎo)HCoEpiC細(xì)胞活力的影響 如圖8所示,相比于對(duì)照組,12、24、48 h后模型組(LPS 5 μg/mL)細(xì)胞存活率降低(P<0.01);12、24、48 h培養(yǎng)后5、10 μmol/L芍藥苷組較模型組細(xì)胞活力增加(P<0.05);而與模型組相比,5、10 μmol/L 3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮存活率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);同時(shí)給予5 μmol/L 3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮、5 μmol/L芍藥苷12 h組較僅給予5 μmol/L芍藥苷組HCoEpiC細(xì)胞活力增加(P<0.05),而與10 μmol/L芍藥苷組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而給藥孵育至24、48 h時(shí),5 μmol/L 3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮+5 μmol/L芍藥苷組較給予5、10 μmol/L芍藥苷組存活率有升高趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

A.IL-6與芍藥苷;B.IL-6與3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮。

2.8.2 芍藥苷與3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮對(duì)LPS誘導(dǎo)HCoEpiC細(xì)胞IL-6表達(dá)的影響 與對(duì)照組相比,5 μg/mL LPS誘導(dǎo)增加模型組細(xì)胞上清IL-6的含量(P<0.01);與模型組相比,5、10 μmol/L芍藥苷組IL-6含量減少(P<0.05)。而給予5、10 μmol/L 3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮組較模型組IL-6水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);然而,5 μmol/L 3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮+5 μmol/L芍藥苷聯(lián)用組較僅芍藥苷給藥組IL-6水平下降(P<0.05)(圖9)。

A.12 h;B.24 h;C.48 h。F12 h=69.424,F24 h=111.461,F48 h=63.554,P<0.001。

與對(duì)照組比較,**P<0.01;與模型組比較,#P<0.05,##P<0.01;與LPS+5 μmol/L芍藥苷+5 μmol/L 3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮組比較,&&P<0.01。F12 h=9.843,F24 h=40.905,F48 h=28.415,P<0.001。

3 討論

中醫(yī)理論認(rèn)為肝郁脾虛是IBS的重要誘因,中醫(yī)藥在治療IBS方面表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)[4]。PRA-AMR是腸安Ⅱ號(hào)方治療IBS的重要藥味,但該藥對(duì)發(fā)揮治療作用的機(jī)制尚不明確,限制其臨床的推廣應(yīng)用[12]。

本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接手段并進(jìn)行體外驗(yàn)證對(duì)PRA-AMR治療IBS的主要活性成分和作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。

本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法初步篩選出PRA-AMR中治療IBS的主要藥效成分為芍藥苷、芍藥新苷、苯甲酰芍藥苷、山奈酚、3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮等,已有研究發(fā)現(xiàn)芍藥苷可通過(guò)增加降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、腸血管活性肽(VIP)、5-HT等神經(jīng)肽的合成與分泌,調(diào)節(jié)腦-腸軸,緩解疼痛,逆轉(zhuǎn)腸推進(jìn)障礙,從而緩解IBS癥狀[13]。另外,通過(guò)KEGG通路富集分析我們發(fā)現(xiàn)IL-17信號(hào)通路、AGE-RAGE信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、化學(xué)致癌信號(hào)通路、肝炎(hepatitis B)信號(hào)通路等通路均是PRA-AMR治療IBS的潛在信號(hào)通路。已有研究表明IL-17信號(hào)通路是介導(dǎo)腸道黏膜炎癥的關(guān)鍵通路,黏膜炎癥嚴(yán)重程度與IL-17水平呈正相關(guān)[14]。TNF是一種多效促炎細(xì)胞因子,在臨床實(shí)踐中TNF抗體藥物已廣泛用于腸道疾病炎癥的治療,Park等[15]通過(guò)臨床觀察發(fā)現(xiàn)結(jié)腸炎患者體內(nèi)血清中TNF水平顯著升高,經(jīng)治療后可恢復(fù)正常水平。

根據(jù)PRA-AMR治療IBS靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)篩選得出關(guān)鍵核心靶點(diǎn)IL-6在治療IBS中發(fā)揮重要作用。IL-6是由T細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子,可通過(guò)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)炎癥反應(yīng)并誘發(fā)腸神經(jīng)感覺異常從而加重患者的內(nèi)臟敏感程度。研究認(rèn)為,IBS發(fā)病表現(xiàn)出循環(huán)IL-6水平的上調(diào),因此,通過(guò)抑制靶點(diǎn)IL-6表達(dá)可能降低其致病因素,緩解IBS患者疼痛表現(xiàn)及炎癥狀態(tài),達(dá)到治療目的[16]。依據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果推測(cè)PRA-AMR可能通過(guò)關(guān)鍵主要活性成分芍藥苷、3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮調(diào)節(jié)IL-6水平以改善IBS炎癥作用。因此,進(jìn)一步采用LPS誘導(dǎo)HCoEpiC細(xì)胞炎癥損傷模型,選擇5、10 μmol/L芍藥苷與3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮評(píng)價(jià)預(yù)測(cè)結(jié)果,通過(guò)MTT法檢測(cè)兩種關(guān)鍵成分對(duì)該模型細(xì)胞活性的影響及對(duì)PRA-AMR治療IBS的核心靶點(diǎn)IL-6進(jìn)行驗(yàn)證。LPS誘導(dǎo)細(xì)胞炎癥,模型組IL-6含量較正常組顯著上升;與模型組比較,IL-6含量給予5、10 μmol/L芍藥苷后明顯下降,提示芍藥苷具有減輕腸細(xì)胞炎癥作用,符合預(yù)測(cè)結(jié)果;而5、10 μmol/L 3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮較模型組未顯著抑制IL-6表達(dá);有趣的是,5 μmol/L 3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮與5 μmol/L芍藥苷聯(lián)用較僅給予5、10 μmol/L芍藥苷組明顯下調(diào)IL-6水平,表明白芍活性成分芍藥苷可通過(guò)抑制炎癥因子IL-6表達(dá)有效改善結(jié)腸炎癥,而3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮顯著促進(jìn)其抑炎效果,表明白芍白術(shù)作為中醫(yī)臨床治療IBS經(jīng)典藥對(duì)的廣泛合理性,可能與芍藥苷、3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮調(diào)節(jié)IL-6有關(guān),為腸安Ⅱ號(hào)復(fù)方中白芍與白術(shù)配伍治療IBS機(jī)制的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)提供進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)支持。

本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究了PRA-AMR治療IBS的主要活性成分及作用機(jī)制,并通過(guò)分子對(duì)接和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)了結(jié)果。芍藥苷與3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮是篩選出的此藥對(duì)治療IBS主要活性成分,兩者合用較單一成分抗結(jié)腸炎癥效果增強(qiáng),與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)所得結(jié)果相符,從而為PRA-AMR配伍在腸安Ⅱ號(hào)復(fù)方中發(fā)揮作用及臨床應(yīng)用腸安Ⅱ號(hào)方研究奠定理論基礎(chǔ)。然而,PRA-AMR治療IBS其他相關(guān)作用機(jī)制仍需更多實(shí)驗(yàn)進(jìn)行系統(tǒng)完善的驗(yàn)證研究。