麻瓊釩 杜慧慧 鄭國君

[摘要] 目的 研究血清miR-95、血清miR-200a-3p在變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis，AR）患者中的表達及其與病情嚴重程度相關(guān)性分析。方法 選取2019年3月至2021年5月溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院收治的AR患者90例作為研究組，另收集90例同期在溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院體檢的健康受試者作為對照組。采用鼻部癥狀總評分（total nasal symptom score，TNSS）和單個鼻部癥狀評分（individual nasal symptom score，INSS）對AR的嚴重程度進行評估。對比兩組腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IL-17、miR-95、miR-200a-3p水平。結(jié)果 研究組血清miR-95水平高于對照組，血清miR-200a-3p水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。受試者操作特征曲線分析結(jié)果顯示，血清miR-95的曲線下面積（area under curve，AUC）為0.857，95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）：0.821～0.911，血清miR-200a-3p的AUC為0.861， 95%CI：0.809～0.908。血清miR-95的截斷值為1.25，對AR患病風(fēng)險預(yù)測的特異性為69.3%，敏感度為75.4%。血清miR-200a-3p的截斷值為1.02，對AR患病風(fēng)險預(yù)測的特異性為71.2%，敏感度為77.9%。兩組血清miR-95均與miR-200a-3p呈負相關(guān)（P<0.05）。AR患者血清中miR-95m水平與患者鼻塞、鼻癢、TNSS評分均呈正相關(guān)（P<0.05）；AR患者血清中miR-200a-3p水平與患者鼻塞、鼻癢、TNSS評分均呈負相關(guān)（P<0.05）；血清miR-95、miR-200a-3p水平與AR患者的噴嚏和流涕評分不具有明顯的相關(guān)性（P>0.05）。研究組患者血清miR-95水平與TNF-α、IL-4、IL-6、IL-13、IL-17水平呈正相關(guān)（P<0.05），與IL-10水平呈負相關(guān)（P<0.05）。研究組患者血清miR-200a-3p水平與TNF-α、IL-6、IL-8、IL-13、IL-17水平呈負相關(guān)（P<0.05），與IL-10呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 變應(yīng)性鼻炎患者血清中miR-95呈現(xiàn)高表達，miR-200a-3p呈現(xiàn)低表達，miR-95水平與患者病情嚴重程度呈正相關(guān)，miR-200a-3p水平與患者病情嚴重程度呈負相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] miR-95；miR-200a-3p；變應(yīng)性鼻炎；病情嚴重程度；相關(guān)性

[中圖分類號] R737.33? ? ? [文獻標(biāo)識碼] A? ? ? [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2023.02.016

[Abstract] Objective To study the expression of serum miR-95 and miR-200a-3p in patients with allergic rhinitis （AR） and analyze their correlation with the severity of the disease. Methods A total of 90 patients with AR treated in Wenzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine from March 2019 to May 2021 were selected as the research group， and another 90 healthy subjects who were examined in Wenzhou Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine at the same time were selected as the control group. Total nasal symptom score （TNSS） and individual nasal symptom score （INSS） were used to evaluate the severity of AR. The levels of tumor necrosis factor-α （TNF-α）， interleukin （IL）-1β， IL-4， IL-6， IL-8， IL-10， IL-13， IL-17， miR-95， miR-200a-3p were compared between the two groups. Results The level of serum miR-95 in the study group was significantly higher than that in the control group， and the level of miR-200a-3p was significantly lower than that in the control group （P<0.05）. The area under curve （AUC） of serum miR-95 was 0.857， 95% confidence interval （CI）： 0.821-0.911， and the AUC of serum miR-200a-3p was 0.861， 95%CI： 0.809-0.908. The cut-off value of serum miR-95 was 1.25， with a specificity of 69.3% and a sensitivity of 75.4% for predicting the risk of AR. The cut-off value of serum miR-200a-3p was 1.02， with a specificity of 71.2% and a sensitivity of 77.9% for predicting the risk of AR. Serum miR-95 in the two groups was negatively correlated with miR-200a-3p （P<0.05）. The level of miR-95 in serum of patients with AR was positively correlated with nasal congestion， nasal itching and TNSS score （P<0.05）. Serum miR-200a-3p level in patients with AR was negatively correlated with nasal congestion， nasal itching and TNSS score （P<0.05）. Serum miR-95 and miR-200a-3p levels were not significantly correlated with the sneezing and runny nose scores of AR patients （P>0.05）. The level of serum miR-95 in the study group was positively correlated with the levels of inflammatory factors TNF-α， IL-4， IL-6， IL-13 and IL-17 （P<0.05）. There was a negative correlation with the level of IL-10 （P<0.05）. The level of serum miR-200a-3p was negatively correlated with the levels of inflammatory factors TNF-α， IL-6， IL-8， IL-13 and IL-17 （P<0.05）， but positively correlated with IL-10 （P<0.05）. Conclusion The expression of miR-95 in the serum of patients with allergic rhinitis is high， but that of miR-200a-3p is low. The level of miR-95 is positively correlated with the severity of the patient's illness， while the level of miR-200a-3p is negatively correlated with the severity of the patient's illness.

[Key words] MiR-95; MiR-200a-3p; Allergic rhinitis; Severity of illness; Correlation

變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是一種過敏性的炎癥性疾病，發(fā)病部位在鼻黏膜，亞洲發(fā)病率高達30%，會增加患者結(jié)膜炎、哮喘等其他黏膜組織炎癥性和過敏性疾病的風(fēng)險[1]，對患者的生活和工作造成了嚴重的影響。近年來，AR的發(fā)病率逐年增加，但是目前臨床上采用藥物治療并不能完全治愈，因此尋找可靠的早期診斷生物標(biāo)志物對AR的早期發(fā)現(xiàn)具有重要意義[2]。近年來，微小RNA（microRNA，miR）逐漸應(yīng)用于AR的輔助診斷和治療[3]。miR-95是近年來發(fā)現(xiàn)的一種mRNA，與多種腫瘤疾病有密切關(guān)系，文獻報道顯示miR-95與合并過敏性鼻炎的哮喘疾病有密切關(guān)系[4]，隨著患者炎癥反應(yīng)的加重，miR-95的表達水平增加[5-6]，但是其與AR疾病的關(guān)系尚未見報道。miR-200a-3p是miR200a家族的成員之一，與癌癥的發(fā)生、發(fā)展具有密切關(guān)系，且低表達水平的miR-200a-3p具有抑制炎癥反應(yīng)的作用[7]，但是未見其與AR疾病的相關(guān)性。本研究將重點研究分析血清miR-95、血清miR-200a-3p在變應(yīng)性鼻炎患者中的表達及其與病情嚴重程度相關(guān)性分析。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

選取2019年3月至2021年5月溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院門診收治的AR患者90例作為研究組，另收集90例同期在溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院體檢的健康受試者作為對照組，對照組均無哮喘史、AR、呼吸道感染等其他嚴重的感染性疾病及惡性腫瘤病史。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均符合《變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南（2015）》[8]的AR診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者入組前1個月內(nèi)未接受糖皮質(zhì)激素和抗組胺藥物治療；③患者均同意獲取鼻黏膜組織。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并哮喘患者；②哺乳期或孕期婦女患者；③患有惡性腫瘤的患者；④伴有上呼吸道感染或其他比較嚴重的感染患者；⑤患有分泌性中耳炎、支氣管哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病的患者；⑥其他因素引起的包括鼻竇炎、鼻息肉、鼻中隔偏曲等鼻腔堵塞的患者。對照組中，男43例，女47例；平均年齡（25.1±7.5）歲，血清免疫球蛋白（immunoglobulin E，IgE）23.5（15.7，31.9）IU/ml。研究組中，男42例，女48例；平均年齡（24.3±6.8）歲，血清IgE 270.6（164.3，478.4）IU/ml。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)（倫理審批號：2018-123），兩組受試者均在知情的情況下自愿簽訂知情同意書。

1.2? 方法

所有研究對象入組后第2天，采取清晨空腹靜脈血，離心后取上清液備用。①血清炎性因子水平測定：采用酶聯(lián)免疫吸附法測定受試者血清中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IL-17水平。所有操作均嚴格按照試劑盒操作說明進行；②血清miR-95、miR-200a-3p水平測定：入組第2天采取受試者靜脈血，離心，取上清液，然后再次離心，35000轉(zhuǎn)/min，取上清液，采用磁珠法循環(huán)提取核酸，然后進行反轉(zhuǎn)錄，并采用熒光PCR測定血清miR-95、miR-200a-3p的CT值。

1.3? 觀察指標(biāo)

對比兩組TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IL-17、miR-95、miR-200a-3p水平。對兩組研究對象采用鼻部癥狀總評分（total nasal symptom score，TNSS）和單個鼻部癥狀評分（individual nasal symptom score，INSS）對AR的嚴重程度進行評估[9]。INSS為患者針對鼻部癥狀自評，包括鼻塞、鼻癢、噴嚏和流涕4種。每種癥狀的評分如下：0分為無癥狀，1分為輕度癥狀，2分為中度癥狀，3分為重度癥狀，評分越高表明鼻部癥狀情況越嚴重。TNSS為上述4種癥狀的單個鼻部癥狀評分之和。

1.4? 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用例數(shù)（百分比）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson分析；采用ROC曲線評價血清miR-95、miR-200a-3p水平對AR病情嚴重程度的預(yù)測價值。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 血清miR-95、miR-200a-3p表達水平比較

研究組血清miR-95相對表達量顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；研究組血清miR- 200a-3p相對表達量顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2? 血清miR-95mRNA、miR-200a-3p與AR患病風(fēng)險的關(guān)系

根據(jù)ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miR-95的曲線下面積（area under curve，AUC）為0.857，95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）：0.821～0.911，血清miR-200a-3p的AUC為0.861， 95%CI：0.809～0.908。提示血清miR-95、miR-200a-3p水平對AR患病風(fēng)險均具有良好的預(yù)測價值。血清miR-95的截斷值為1.25，對AR患病風(fēng)險預(yù)測的特異性為69.3%，敏感度為75.4%；血清miR-200a-3p的截斷值為1.02，對AR患病風(fēng)險預(yù)測的特異性為71.2%，敏感度為77.9%，見圖1。

2.3? 血清miR-95和miR-200a-3p的相關(guān)性

兩組血清miR-95均與miR-200a-3p呈負相關(guān)（對照組r= 0.764，P<0.001；研究組r= 0.683，P<0.001）。

2.4? AR患者INSS和TNSS評分情況及血清miR-95、miR-200a-3p表達水平與疾病嚴重程度的關(guān)系

單個鼻癥狀評分（individual nasal symptom score，INSS）包括鼻塞、鼻癢、噴嚏和流涕。AR組患者的鼻塞評分（1.9±0.6）分，鼻癢評分（1.8±0.7）分，噴嚏評分（2.2±0.8）分，流涕評分（1.8±0.5）分；鼻部癥狀總評分（total nasalsymptom score，TNSS）評分為（7.8±1.5）分。AR患者血清中miR-95表達水平與患者鼻塞、鼻癢、TNSS評分均呈正相關(guān)（P<0.05）；AR患者血清中miR-200a-3p表達水平與患者鼻塞、鼻癢、TNSS評分均呈負相關(guān)（P<0.05）；血清miR-95、miR-200a-3p表達水平與AR患者的噴嚏和流涕評分不具有明顯的相關(guān)性（P>0.05），見表2。

2.5? 血清miR-95、miR-200a-3p表達水平與炎癥因子及IgE的關(guān)系

對照組患者血清miR-95表達水平與TNF-9、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13水平呈正相關(guān)（P<0.05）；研究組患者血清miR-95表達水平與TNF-9、IL-4、IL-6、IL-13、IL-17、IgE水平呈正相關(guān)（P<0.05）；與IL-10水平呈負相關(guān)（P<0.05）。對照組患者血清miR-200a-3p表達水平與TNF-2、IL-12、IL-4、IL-8、IgE水平呈負相關(guān)（P<0.05）；研究組患者血清miR-200a-3p表達水平與TNF-2、IL-6、IL-8、IL-13、IL-17水平呈負相關(guān)（P<0.05），與IL-10呈正相關(guān)（P<0.05），見表3。

3? 討論

AR是一種炎癥性、過敏性疾病，其癥狀嚴重影響患者的生活質(zhì)量，目前臨床上主要采用藥物治療，但并不能使AR患者痊愈，因此積極尋找早期輔助診斷的生物標(biāo)志物對AR的早期發(fā)現(xiàn)和治療具有重要意義[10-11]。近年來研究顯示，miR在AR輔助診斷中的應(yīng)用逐漸增多，已有文獻報道m(xù)iR146a、miR181a等的表達水平與AR疾病具有密切關(guān)系[12-13]，但是血清miR-95、血清miR-200a-3p與AR疾病的關(guān)系尚未有報道。

miR95是近年來發(fā)現(xiàn)的一類小RNA，研究顯示miR95對炎癥有重要的參與意義，miR95表達水平可隨著炎癥反應(yīng)的加重而增加[14]。miR-200a-3p是miR200家族成員之一，與腫瘤疾病具有密切關(guān)系。研究顯示miR-200a-3p對神經(jīng)分化、增殖有至關(guān)重要的作用[15]。miR-200a-3p還可以調(diào)節(jié)表皮生長因子受體信號通路，預(yù)防缺血性損傷引起的細胞死亡[16]。另有文獻顯示，阿爾茨海默病患者呈現(xiàn)低水平的miR-200a-3p，且miR-200a-3p在β淀粉樣蛋白的產(chǎn)生中具有一定的參與作用[17]，且對炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α等的表達水平具有一定的調(diào)節(jié)作用[18]。

AR可伴有一定的炎癥及免疫失調(diào)，Th1/ Th2在免疫平衡的調(diào)節(jié)中起到關(guān)鍵性作用。Th1可分泌IL-2、IL-12、INF-γ等抑炎因子，進而參與AR炎癥反應(yīng)，同時免疫球蛋白E在AR疾病的發(fā)展過程中也是關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。文獻報道顯示，過敏性鼻炎合并哮喘患者的炎癥加重時，患者血清miR95表達水平顯著增加，且哮喘患者的血清miR95表達水平顯著高于健康個體，提示miR95可以通過增加炎癥反應(yīng)參與過敏性鼻炎合并哮喘疾病的發(fā)生、發(fā)展過程[14]。本研究結(jié)果顯示，研究組血清miR-95表達水平顯著高于對照組，血清miR-200a-3p表達水平顯著低于對照組，提示miR-95在AR患者血清中呈現(xiàn)高表達，miR-200a-3p在AR患者血清中呈現(xiàn)低表達。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，兩組血清miR-95均與miR-200a-3p呈負相關(guān)。ROC曲線結(jié)果顯示，血清miR-95的截斷值為1.25，對AR患病風(fēng)險預(yù)測的特異性為69.3%，敏感度為75.4%；血清miR-200a-3p的截斷值為1.02，對AR患病風(fēng)險預(yù)測的特異性為71.2%，敏感度為77.9%，提示血清miR-95、miR-200a-3p表達水平對AR患病風(fēng)險均具有良好的預(yù)測價值。

本研究進一步對血清miR-95、miR-200a-3p表達水平與AR疾病的嚴重程度進行了相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，血清miR-95、miR-200a-3p表達水平與AR患者的噴嚏和流涕評分不具有明顯的相關(guān)性（P>0.05）；血清中miR-95m表達水平與AR患者鼻塞、鼻癢、TNSS評分均呈正相關(guān)（P<0.05）；血清中miR-200a-3p表達水平與AR患者鼻塞、鼻癢、TNSS評分均呈負相關(guān)（P<0.05），提示AR患者血清miR-95、miR-200a-3p表達水平與AR患者疾病的嚴重程度有密切關(guān)系，可以在一定程度上預(yù)測AR疾病的嚴重程度。

AR在發(fā)生、發(fā)展過程中伴隨著炎癥。IL-8是一種趨化因子，分泌于單核-巨噬細胞，具有調(diào)節(jié)炎癥及免疫的功能[19]。TNF-α作為一種系統(tǒng)性炎癥細胞因子，主要分泌于巨噬細胞，具有調(diào)節(jié)免疫功能及炎癥的作用[20]。炎癥因子的表達水平與AR疾病的發(fā)生、發(fā)展具有密切關(guān)系。本研究分析了AR患者和健康受試者血清miR-95、血清miR-200a-3p表達水平與血清炎癥因子水平的相關(guān)性，結(jié)果顯示，AR患者血清miR-95表達水平與促炎因子水平呈正相關(guān)，與抑炎因子水平呈負相關(guān)；血清miR-200a-3p表達水平與促炎因子水平呈負相關(guān)，與抑炎因子水平呈正相關(guān)。提示AR患者血清miR-95會促進炎癥反應(yīng)，而miR-200a-3p有抑制炎癥反應(yīng)的作用。

綜上，AR患者血清中miR-95呈現(xiàn)高表達，miR-200a-3p呈低表達，高表達水平的miR-95及低表達水平的miR-200a-3p均預(yù)示著表示患者病情較嚴重，需要積極采取干預(yù)措施，及早進行治療。

[參考文獻]

[1]SCHULER IV C F， MONTEJO J M. Allergic rhinitis in children and adolescents[J]. Pediatr Clin North Am， 2019， 66（5）： 981993.

[2]LINTON S， BURROWS A G， HOSSENBACCUS L， et al. Future of allergic rhinitis management[J]. Ann Allergy Asthma Immunol， 2021， 127（2）： 183190.

[3]GAO Y， LI S， DONG R， et al. Long noncoding RNA MIR3142HG accelerates lipopolysaccharide-induced acute lung injury via miR-95-5p/JAK2 axis[J]. Hum Cell，? 2022， 35（3）： 856870.

[4]王曉鈺， 于曦， 王燕， 等. MicroRNAs： 過敏性疾病的潛在新靶點[J]. 中國藥理學(xué)通報， 2016， 32（5）： 616619.

[5]GUO S， QIN H， LIU K， et al. Blood small extracellular vesicles derived miRNAs to differentiate pancreatic ductal adenocarcinoma from chronic pancreatitis[J]. Clin Transl Med， 2021， 11（9）： e520.

[6]Z?VESK? L， JAND?KOV? E， WEINBERGER V， et al. Ascites in ovarian cancer： MicroRNA deregulations and their potential roles in ovarian carcinogenesis[J]. Cancer Biomark， 2022， 33（1）： 116.

[7]LIU Y， WANG Z， HUANG H， et al. miR-200a-3p improves neonatal necrotizing enterocolitis by regulating RIPK1[J]. Am J Transl Res， 2021， 13（11）： 12662 12672.

[8]程雷， 董震， 孔維佳， 等. 變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南（2015年， 天津）[J]. 中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志， 2016， 51（1）： 624.

[9]DAI L， ZHONG L L D， KUN W， et al. An external cam therapy （tian jiu） versus placebo in treatment of allergic rhinitis： a pilot single-blinded， three-arm， randomized controlled study[J]. Evid Based Compl Alt， 2019， 2019（14）： 6369754.

[10]CHANG G H， LIN Y S， HSU K H， et al. Nasal irrigation with Glycyrrhiza glabra extract for treatment of allergic rhinitis-a study of in vitro， in vivo and clinical trial[J]. J Ethnopharmacol， 2021， 275（12）： 114116.

[11]CIPRANDI G， TOSCA M A. Turbinate hypertrophy， allergic rhinitis， and otitis media[J]. Curr Allergy Asthma Rep， 2021， 21（7）： 40.

[12]ZHANG Y， YANG Y， GUO J， et al. miR-146a enhances regulatory T-cell differentiation and function in allergic rhinitis by targeting STAT5b[J]. Allergy， 2022， 77（2）： 550558.

[13]WANG L， SUN J， HAN J， et al. MiR-181a Promotes spermatogenesis by targeting the S6K1 pathway[J]. Int J Stem Cells， 2021， 14（3）： 341350.

[14]周姍. 穴位貼敷對合并過敏性鼻炎的哮喘緩解期患者血清miRNAs影響的研究[D]. 南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)， 2016.

[15]WAN P， CHEN Z， HUANG M， et al. miR-200a-3p facilitates bladder cancer cell proliferation by targeting the A20 gene[J]. Transl Androl Urol， 2021， 10（11）： 42624274.

[16]BAHMANI L， BAGHI M， PEYMANI M， et al. MiR- 141-3p and miR-200a-3p are involved in Th17 cell differentiation by negatively regulating RARB expression[J]. Hum Cell， 2021， 34（5）： 13751387.

[17]YANG H， WANG H， ZHANG X， et al. Upregulated LINC00319 aggravates neuronal injury induced by oxygen-glucose deprivation via modulating miR-200a- 3p[J]. Exp Ther Med， 2021， 22（2）： 844.

[18]WANG Q， LIN H， RAN J， et al. miR-200a-3p represses osteogenesis of human periodontal ligament stem cells by targeting ZEB2 and activating the NF-κB pathway[J]. Acta Odontol Scand， 2022， 80（2）： 140149.

[19]ZHU F， SUN K， YU L， et al. Tissue cytokine adenoid experssion in hypertrophic adenoid gland in children with allergic rhinitis[J]. J Coll Physici， 2021， 31（8）： 903909.

[20]MOHAMAD S A， SAFWAT M A， ELREHANY M， et al. A novel nasal co-loaded loratadine and sulpiride nanoemulsion with improved downregulation of TNF-α， TGF-β and IL-1 in rabbit models of ovalbumin-induced allergic rhinitis[J]. Drug Deliv， 2021 ， 28（1）： 229239.

（收稿日期：2022–07–19）

（修回日期：2022–08–16）