鐘艷，辛麗，吳喆，郭林峰，周云峰

1.萬載縣人民醫(yī)院，江西 萬載 336199；2.宜春市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，江西 宜春 336099

消栓通絡(luò)片源于消栓通絡(luò)方，共由11 味中藥（郁金、丹參、山楂、桂枝、澤瀉、黃芪、冰片、川芎、三七、木香、槐花）配伍組成，功能為活血化瘀、溫經(jīng)通絡(luò)，主要用于中風(fēng)及高脂血癥引起的神情呆癡、手足冰涼、活動(dòng)疼痛等癥候［1-2］，現(xiàn)收錄于《中國(guó)藥典》2020 年版一部?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)該藥異性有機(jī)物和農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢查［3］。有研究發(fā)現(xiàn)少數(shù)制藥企業(yè)為節(jié)約成本會(huì)更改生產(chǎn)工藝，該違規(guī)行為用法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)難以發(fā)覺［4］。另外，由于中藥材種植商業(yè)化，農(nóng)藥的使用越來越普及，這導(dǎo)致中藥材的農(nóng)藥殘留問題對(duì)藥品安全產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)［5-9］，有必要對(duì)中藥制劑的外源性有害物質(zhì)進(jìn)行控制研究。本研究對(duì)消栓通絡(luò)片中異性有機(jī)物和有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量進(jìn)行檢查分析，以期為提升該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供借鑒方法，從而進(jìn)一步保障其臨床用藥的安全性和有效性。

1 主要儀器與試劑

OLYMPUS Bx41 型電光顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；Agilent 7890A 氣相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）消栓通絡(luò)片（20 批，樣品信息見表1）；三七對(duì)照藥材（批號(hào)：120941-201810，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；玉米淀粉（批號(hào)：2018022021YS31，中糧生化能源有限公司）；木薯淀粉（批號(hào)：TTC62276，泰華股份有限公司）；8 種有機(jī)氯農(nóng)藥混合溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（批號(hào)：19001，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，α-六六六濃度為50.0 μg/mL、β-六六六濃度為50.0 μg/mL、γ-六六六濃度為50.1 μg/mL、δ-六六六濃度為50.2 μg/mL、p,p'-DDT 濃度為50.0 μg/mL、o，p'-DDT濃度為50.1 μg/mL、p，p'-DDE 濃度為50.0 μg/mL、p，p'-DDD 濃度為50.2 μg/mL）；五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號(hào)：GSB05-1845-20116，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)中心，濃度為100 μg/mL）。二氯甲烷、石油醚（60～90 ℃）、丙酮均為色譜純，氯化鈉為分析純，水為一級(jí)純化水。

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 異性有機(jī)物

2.1.1 實(shí)驗(yàn)方法 隨機(jī)取樣品1 片，剝?nèi)ヌ且禄虮∧ひ?，置研缽研成?xì)粉，取約0.2 g，加水10 mL 振搖溶解，離心5 min（6 000 r/min），棄去上清液，沉淀物加水2～3 mL混合均勻，取混懸液滴于載玻片上，置顯微鏡100 倍下觀察，除三七原藥材外不應(yīng)檢出其他植物組織顯微特征。檢查點(diǎn)按圖1 進(jìn)行檢視。

圖1 蓋玻片上檢查點(diǎn)示意圖

2.1.2 檢測(cè)結(jié)果 通過20 批次樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)樣品中淀粉粒較多，均檢出三七中淀粉粒的顯微特征（單粒類圓形，臍點(diǎn)點(diǎn)狀、短縫狀或人字形，圓粒大者層紋明顯，復(fù)粒多見）。但在部分樣品中存在多角形，臍點(diǎn)中心性，呈圓點(diǎn)狀或星狀，層紋不明顯的異常淀粉粒特征（見圖2），可推斷部分樣品中存在除三七原藥材外其他植物組織的淀粉粒顯微特征。

圖2 供試品顯微圖：1、4.異常淀粉粒；2、3.三七淀粉粒（×100）

針對(duì)以上異性有機(jī)物篩查結(jié)果，對(duì)三七對(duì)照藥材、玉米淀粉、木薯淀粉中淀粉粒的顯微特征進(jìn)行了檢視。取以上三者適量，用水裝片，置顯微鏡下觀察可知（見圖3），三七對(duì)照藥材中淀粉粒單粒類圓形，臍點(diǎn)點(diǎn)狀、短縫狀或人字形，圓粒大者層紋明顯，復(fù)粒多見；玉米淀粉中淀粉粒均為單粒，多角形顆粒，或呈圓形或橢圓形顆粒，臍點(diǎn)中心性，呈圓點(diǎn)狀或星狀，層紋不明顯；木薯淀粉中淀粉粒多為單粒，圓形或橢圓形，旁邊有一凹處，臍點(diǎn)中心性，呈圓點(diǎn)狀或線狀，層紋不明顯。通過顯微鑒別法可區(qū)分上述三種植物中的淀粉粒，可判定樣品中的異性有機(jī)物為玉米淀粉粒。

圖3 三種植物淀粉粒顯微圖：A.三七淀粉粒；B.玉米淀粉粒；C.木薯淀粉粒（×100）

2.2 有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量測(cè)定［10］

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密量取五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL、8 種有機(jī)氯農(nóng)藥混合溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)2 mL 置200 mL 量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀釋至刻度，搖勻，得混合對(duì)照品母液。精密量取上述混合對(duì)照品母液適量，用石油醚（60～90 ℃）制成每1 mL 含α-六六六為1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 ng；含五氯硝基苯為1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 ng；含γ-六六六為1.0、5.0、10.0、50.1、100.2、250.5 ng；含β-六六六為1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 ng；含δ-六六六為1.0、5.0、10.0、50.2、100.4、251.0 ng；含p,p'-DDE為1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 ng；含o,p'-DDT為 1.0、5.0、10.0、50.1、100.2、250.5 ng；含p,p'-DDD為1.0、5.0、10.0、50.2、100.4、251.0 ng；含p,p'-DDT為1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 ng 的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（相當(dāng)于藥材2 g），按《中國(guó)藥典》2020年版四部通則2341 項(xiàng)下的處理方法制備供試品溶液，同時(shí)制備空白溶液。

2.2.3 色譜條件 Agilent J＆W GC Columns DB-1701毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），63Ni～ECD電子捕獲檢測(cè)器。檢測(cè)器溫度為300 ℃，進(jìn)樣口溫度為230 ℃，進(jìn)樣不設(shè)分流比。初始溫度為100 ℃，第一階段升至220 ℃，速率為10 ℃/min，第二階段升至250 ℃，速率為8 ℃/min，保持10 min。

2.2.4 專屬性試驗(yàn) 精密吸取空白溶液、供試品溶液、對(duì)照品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，得到相應(yīng)的氣相色譜圖。見圖4。

圖4 氣相色譜圖

2.2.5 線性關(guān)系考察與檢出限 分別精密吸取一系列濃度的混合對(duì)照品溶液各l μL，注入氣相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。以S/N=3 時(shí)注入儀器的各對(duì)照品溶液的量確定儀器檢出限。結(jié)果見表2。

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

2.2.6 樣品測(cè)定 分別精密吸取樣品溶液各l μL，注入氣相色譜儀，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算得相應(yīng)的濃度，樣品中總六六六的含量范圍為0～0.05 mg/kg，總滴滴涕的含量范圍為0～0.12 mg/kg，五氯硝基苯的含量范圍為0.01～0.06 mg/kg。根據(jù)《中國(guó)藥典》2020年版四部9302 項(xiàng)下“中藥有害殘留物限量制定指導(dǎo)原則”建立消栓通絡(luò)片農(nóng)藥殘留量限值標(biāo)準(zhǔn)。通過計(jì)算得到消栓通絡(luò)片中總六六六、總滴滴涕、五氯硝基苯殘留限量分別為0.09，0.19，0.19 mg/kg。按此限度評(píng)價(jià)，20 批次樣品9 種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量均低于農(nóng)藥殘留量限值，在可控安全范圍內(nèi)。

3 討論

消栓通絡(luò)片的法定制備工藝為冰片研細(xì)，三七粉碎成細(xì)粉，其余藥味加水煎煮，濾液減壓濃縮成清膏，加入三七細(xì)粉，制粒，加入冰片細(xì)粉，壓制成片，包糖衣或薄膜衣即可。消栓通絡(luò)片剝?nèi)ヌ且禄虮∧ひ潞髴?yīng)只具有三七的植物組織特征，但通過顯微鑒別發(fā)現(xiàn)有2 家企業(yè)的8 批次樣品中存在玉米淀粉粒顯微特征。該制劑的制備工藝并無添加玉米淀粉工序，且藥品使用說明書也無標(biāo)示玉米淀粉成分，提示企業(yè)可能擅自添加了玉米淀粉輔料。玉米淀粉雖對(duì)人體無毒害作用，但擅自更改處方工藝、添加國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)處方中未包含的成分可能會(huì)影響藥效甚至出現(xiàn)安全事故。本研究所建立的顯微鑒別分析法可為異性有機(jī)物的篩查提供借鑒。

有些中藥材商戶為防蟲蛀，會(huì)在中藥材種植栽培生產(chǎn)中加入有機(jī)氯類農(nóng)藥，提高產(chǎn)量與改善外觀［11］。但有機(jī)氯農(nóng)藥為持久性有機(jī)污染物，其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，半衰期長(zhǎng)，毒性大，易殘留在藥用植物中并通過食物鏈累積［12-14］，其化學(xué)性質(zhì)特點(diǎn)易將質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)引入制劑中。在對(duì)中藥制劑中的有效成分進(jìn)行控制時(shí)，也不能忽視外源性污染有害物對(duì)藥品質(zhì)量的影響。因此，對(duì)消栓通絡(luò)片中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量進(jìn)行測(cè)定，考察殘留量水平，評(píng)估其安全風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)保證消栓通絡(luò)片在臨床使用中安全有效具有重要意義。