張延秀，張建全，臧秀瑞，馬良，曲亭和，李德虎

山東禹王制藥有限公司（禹城 251200）

高脂血癥是指體內(nèi)脂類代謝紊亂導致血脂水平增高的一種病癥。其與心肌梗死、中風、脂肪肝、糖尿病等疾病的發(fā)生關系密切，是引發(fā)腦梗死的主要潛在因素，是引起動脈粥樣硬化和冠心病發(fā)生的重要危險因素之一，同時還會引起糖尿病等疾病[1-4]。高脂血癥具體表現(xiàn)為脂肪代謝或轉運異常，血清中總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）含量過高，而高密度脂蛋白（HDL）含量降低[5]。研究表明膳食脂肪酸與高脂血癥的發(fā)生關系密切，多不飽和脂肪酸具有明顯的降血脂作用[6]。二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）是重要的多不飽和脂肪酸，是人體和動物不能合成，由食物提供的一類必需脂肪酸[7]。魚油中富含EPA、DHA等ω-3多不飽和脂肪酸[8]，具有降低血液中TC、TG、LDL-C，升高HDL-C等重要作用[9]，還可以改善血液微循環(huán)，降低血液黏稠度，在一定程度上極大地緩解和治療高脂血癥[10]。

高脂血癥是動脈粥樣硬化和冠心病發(fā)生、發(fā)展的獨立危險因素。血脂的降低被證實可以改善內(nèi)皮功能障礙、減慢粥樣硬化斑塊的進展、降低心肌缺血和急性冠脈綜合征的發(fā)病率及致死率。因此，有效控制血脂已成為醫(yī)學界防治心腦血管疾病的主要方法之一。試驗以山東禹王制藥有限公司生產(chǎn)的魚油軟膠囊為樣品，委托山東大學齊魯醫(yī)院針對該產(chǎn)品對高脂血癥人群降脂功能有效性和安全性進行臨床驗證研究。

1 材料與方法

1.1 材料

魚油（市售）；濃硫酸、無水乙醇等（均為國產(chǎn)分析純）。

魚油軟膠囊（山東禹王制藥有限公司），成分含量為DHA 30~45 g/100 g、EPA 25~40 g/100 g。產(chǎn)品規(guī)格：0.35 g/粒。食用方法：每日3次，每次3粒。

1.2 方法

1.2.1 魚油多不飽和脂肪酸的制備

在反應釜中加入魚油、無水乙醇和濃硫酸，設定溫度和反應時間，開啟攪拌。反應停止后，取上層魚油進行分析。

1.2.2 魚油軟膠囊制備工藝

將反應得到的魚油按下述工藝制備得到軟膠囊。

化膠、配料→壓丸→定型→洗丸→干燥→選丸→包裝

1.3 降脂項目內(nèi)容

1.3.1 療效觀察項目

1.3.1.1 觀察對象

高脂血癥人群。

1.3.1.2 觀察項目

評估指標：年齡、性別、血壓、身高、體重、BMI、肝功系列、腎功三項、血脂四項、載脂蛋白（ApoE）、空腹血糖、血常規(guī)、尿常規(guī)、肝臟B超、脂肪肝纖維化檢測、心電圖。

1.3.2 安全性觀察項目

不良反應指標：觀察項目評估指標及出現(xiàn)的其他不良反應情況，并記錄發(fā)生日期、程度及處理方法、變化過程等，判斷與該產(chǎn)品是否有因果關系。

1.4 試驗方法

選取山東大學齊魯醫(yī)院健康管理中心高脂血癥患者，納入標準：（1）年齡20~80歲；（2）空腹血清總膽固醇＞5.72 mmol/L或甘油三酯＞1.70 mmol/L或高密度脂蛋白＜0.91 mmol/L。排除標準：（1）3個月內(nèi)發(fā)生急性冠脈綜合征、腦血管事件，血壓未控制者（收縮壓≥160 mmHg和或舒張壓≥100 mmHg）；（2）出血性疾病患者及出血傾向者；（3）嚴重肝腎功能損害、嚴重胃腸道疾病者；（4）合并惡性腫瘤，急慢性感染需要治療者；（5）懷孕或準備懷孕者。

研究人群干預方法：（1）魚油軟膠囊使用方法，每日3次，每次3粒；（2）飲食干預，飲食堅持“四低一高”原則，即“低熱量、低膽固醇、低脂肪、低糖，高纖維”；（3）生活方式干預，運動鍛煉、戒煙。研究對象入選前、3個月干預后，詳細檢查年齡、性別、血壓、身高、體重、BMI、肝功系列、腎功3項、血脂4項、載脂蛋白（ApoE）、空腹血糖、血常規(guī)、尿常規(guī)、肝臟B超、脂肪肝纖維化檢測、心電圖等項目，在干預前、干預3個月后分別檢測以上項目。評價魚油軟膠囊對高脂血癥人群降脂功能各項指標的統(tǒng)計學意義。根據(jù)統(tǒng)計學分析結果，判定魚油軟膠囊降脂效果。

1.5 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學處理，設定P＜0.05作為差異有顯著性。

2 結果與分析

2.1 酸催化制備魚油多不飽和脂肪酸

試驗優(yōu)化酸催化魚油與無水乙醇制備多不飽和脂肪酸的工藝過程，包括反應溫度、反應時間、無水乙醇添加量和濃硫酸添加量。

2.1.1 反應溫度對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響

選取反應溫度65，70，75，80，85和90 ℃，反應時間8 h，無水乙醇添加量45%，濃硫酸添加量0.8%，考察反應溫度對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響。

由圖1可以看出，隨著反應溫度升高，魚油多不飽和脂肪酸得率提高，超過80 ℃時，得率提高不明顯，說明該體系中反應已達平衡。

圖1 反應溫度對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響

2.1.2 反應時間對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響

選取反應時間6.5，7.0，7.5，8.0，8.5和9.0 h，反應溫度80 ℃，無水乙醇添加量45%，濃硫酸添加量0.8%，考察反應時間對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響。

由圖2可以看出，隨著反應時間的延長，魚油多不飽和脂肪酸的得率提高，超過8.0 h時，得率未見明顯提高，說明該體系中反應已達平衡。

圖2 反應時間對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響

2.1.3 無水乙醇添加量對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響

選取無水乙醇添加量30%，35%，40%，45%和50%，反應溫度80 ℃，反應時間8 h，濃硫酸添加量0.8%，考察無水乙醇添加量對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響。

由圖3可以看出，無水乙醇添加量為45%和50%時，魚油多不飽和脂肪酸得率基本相同，因此選擇無水乙醇添加量45%。

圖3 無水乙醇添加量對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響

2.1.4 濃硫酸添加量對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響

選取濃硫酸添加量0.2%，0.4%，0.6%，0.8%和1.0%，反應溫度80 ℃，反應時間8 h，無水乙醇添加量45%，考察濃硫酸添加量對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響。

由圖4可以看出，濃硫酸添加量為0.8%和1.0%時，魚油多不飽和脂肪酸得率基本一致，因此選擇濃硫酸添加量0.8%。

圖4 濃硫酸添加量對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響

2.1.5 正交試驗

在單因素試驗基礎上，選定四因素三水平作工藝優(yōu)化的正交試驗，見表1。極差數(shù)據(jù)分析表明：影響多不飽和脂肪酸得率的主次關系依次是反應溫度、無水乙醇添加量、反應時間、濃硫酸添加量。結果表明：反應溫度80 ℃、反應時間8.5 h、無水乙醇添加量50%、濃硫酸添加量0.8%時，多不飽和脂肪酸得率最高。

表1 正交試驗結果

表2 魚油軟膠囊對高脂血癥患者總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的影響單位：mmol/L

2.2 安全性觀察

2.2.1 一般性情況

共納入82位高脂血癥體檢者，1例發(fā)生輕微胃腸道反應、9例失訪、1例懷孕脫組，剩余71例，其中年齡分布在34~73歲，男性49人（69%），女22人（31%）。

2.2.2 BMI、心電圖、肝臟B超、脂肪肝纖維檢測

BMI改善不顯著，心電圖無明顯變化，肝臟超聲檢查提示干預后脂肪肝有輕微改善。

2.2.3 肝腎功能、血糖、血壓

研究數(shù)據(jù)顯示服用魚油軟膠囊及生活方式干預3個月后肝腎功能、血糖、血壓未見明顯異常。

2.3 功效觀察

數(shù)據(jù)顯示服用魚油軟膠囊及生活方式干預3個月后血脂有明顯變化。與干預前對比，干預后總膽固醇極顯著降低、甘油三酯顯著降低，干預前后高密度脂蛋白和低密度脂蛋白未見明顯差異。

3 結論

試驗采用酸催化制備魚油多不飽和脂肟酸，分別探討反應溫度、無水乙醇添加量、反應時間、濃硫酸添加量對魚油多不飽和脂肪酸得率的影響，在單因素試驗基礎上，通過正交試驗得出酸催化制備魚油多不飽和脂肪酸的最佳工藝條件：反應溫度80 ℃、反應時間8.5 h、無水乙醇添加量50%、濃硫酸添加量0.8%。魚油軟膠囊是用于調節(jié)血脂、預防高血脂癥和動脈粥樣硬化的天然海洋營養(yǎng)補品，其功效成分3A（即DHA、EPA、DPA）皆為ω-3型多烯脂肪酸乙酯（PUFA），是日常膳食中難以攝取的營養(yǎng)物質。EPA和DHA的降脂作用機理是：抑制肝內(nèi)脂肪酸和甘油三酯的合成、抑制極低密度脂蛋白（VLDL）的合成、促進脂肪的氧化、加速VLDL膽固醇的清出[11]。經(jīng)過進一步臨床驗證證實該產(chǎn)品對于高脂血癥患者有明顯改善作用，尚未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應。