何 明，蔡 浩，羅 蕓，郭 有

（贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院醫(yī)藥大數(shù)據(jù)與生物信息研究中心，江西 贛州 341000）

結(jié)腸癌是我國發(fā)病率第四、死亡率第五的惡性腫瘤［1］。隨著生活方式和飲食結(jié)構(gòu)變化，結(jié)腸癌發(fā)病率逐年上升并呈年輕化趨勢(shì)，患者早期無明顯癥狀，大多數(shù)確診已處于晚期，該腫瘤病死率高且預(yù)后差。1975 年研究者提出結(jié)腸癌發(fā)展遵循“正常黏膜—腺瘤—腺癌”的順序［2］，結(jié)腸腺瘤是結(jié)腸癌最主要的癌前疾?。?］。超過80%結(jié)腸癌是由結(jié)腸腺瘤癌變而來，76%～90%的結(jié)腸癌可通過腸鏡下腺瘤摘除進(jìn)而降低發(fā)病率［4］。因此精準(zhǔn)識(shí)別癌前疾病可有效抑制結(jié)腸癌發(fā)展，探索結(jié)腸癌的發(fā)病機(jī)制以及結(jié)腸癌變前診斷的分子標(biāo)志迫在眉睫，以便患者盡早診斷、開展治療，降低結(jié)腸癌發(fā)病率和死亡率。

普遍認(rèn)為，結(jié)腸癌癌變是正常結(jié)腸黏膜在基因突變、表觀遺傳和基因表達(dá)變化逐漸積累發(fā)展的過程［5-9］。隨著分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展，微陣列技術(shù)因可同時(shí)對(duì)樣本的數(shù)萬個(gè)基因表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，極大豐富了相關(guān)腫瘤的數(shù)據(jù)，已廣泛應(yīng)用于腫瘤致癌過程、診斷治療、預(yù)后預(yù)測(cè)等研究。FEARON E R 等［5］研究認(rèn)為APC、KRAS、TP53和DCC基因在結(jié)腸癌發(fā)展中承擔(dān)著重要角色。KITA H 等［6］首次通過微陣列技術(shù)確定了在正常結(jié)腸黏膜發(fā)展為結(jié)腸腺瘤過程中顯著差異表達(dá)的180 個(gè)基因，這些基因證實(shí)與結(jié)腸病變有密切關(guān)聯(lián)。FONSECA A S 等［7］利用微陣列技術(shù)研究10 例配對(duì)結(jié)腸腺瘤和結(jié)腸腺癌基因表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)ETV4 在腺癌中顯著高表達(dá)并參與細(xì)胞增殖和遷移過程。研究表明COX-2 從結(jié)腸腺瘤到結(jié)腸癌的發(fā)展中表達(dá)顯著增加［8-9］。KANAOKA S等［10］研究發(fā)現(xiàn)，COX-2 mRNA 表達(dá)水平可有效區(qū)分結(jié)腸癌和無腫瘤患者，揭示可作為結(jié)腸癌檢測(cè)的潛在標(biāo)志物。但臨床實(shí)踐中活檢組織才是結(jié)腸癌診斷治療的重要組織類型，又因活檢組織樣本取材的限制，基于結(jié)腸活檢組織的高通量基因表達(dá)研究極少，至今尚未發(fā)現(xiàn)應(yīng)用于臨床結(jié)腸癌分子診斷的生物標(biāo)志物或特征。因此，基于活檢組織的基因表達(dá)譜研究結(jié)腸癌癌變過程的關(guān)鍵基因及分子機(jī)制將有助于結(jié)腸癌診斷分子標(biāo)志的挖掘。

基于此，本研究采用GEO 數(shù)據(jù)庫的基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)，分析活檢組織中正常結(jié)腸黏膜—結(jié)腸腺瘤—結(jié)腸癌轉(zhuǎn)變中表達(dá)差異基因，篩選從正常組織到腫瘤組織逐漸高表達(dá)或低表達(dá)的基因，通過生物信息學(xué)方法挖掘結(jié)腸癌癌變特征基因（Colorectal Cancer Carcinogenesis Genes，CRCCG）和分子機(jī)制，利用另一組織類型——手術(shù)切除組織和在線數(shù)據(jù)庫驗(yàn)證癌變特征基因表達(dá)水平，GSVA 計(jì)算單個(gè)樣本CRCCG-GSVA評(píng)分，ROC曲線評(píng)價(jià)CRCCG-GSVA評(píng)分的診斷價(jià)值，最后對(duì)CRCCG 進(jìn)行生存分析，為開發(fā)臨床診斷治療結(jié)腸癌生物標(biāo)志物提供新思路。

1 材料與方法

1.1 數(shù)據(jù)集來源 本研究在GEO 數(shù)據(jù)庫中下載兩組基于GPL570 平臺(tái)檢測(cè)的基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)集：（1）GSE37364 為活檢組織的數(shù)據(jù)包含38 例正常結(jié)腸黏膜、29 例結(jié)腸腺瘤和27 例結(jié)腸癌［11］；（2）GSE20916為手術(shù)切除組織的數(shù)據(jù)包含24例正常結(jié)腸黏膜、45例結(jié)腸腺瘤和36例結(jié)腸癌［12］。

1.2 數(shù)據(jù)預(yù)處理 對(duì)于affymetrix 平臺(tái)下載的CEL格式的原始表達(dá)譜數(shù)據(jù)，在R 語言（版本3.6.1）中采用affy 軟件包的RMA 算法對(duì)其背景校正、分位數(shù)校正和以2 為底log 轉(zhuǎn)換，下載GPL570 平臺(tái)的CDF文件，將探針I(yè)D對(duì)應(yīng)至基因ID。去除數(shù)據(jù)中沒有基因ID 對(duì)應(yīng)或同一探針I(yè)D 對(duì)應(yīng)多個(gè)基因ID 的探針I(yè)D，對(duì)于多個(gè)探針I(yè)D 對(duì)應(yīng)同一個(gè)基因ID，則取它們的信號(hào)均值作為此基因的表達(dá)值。

1.3 篩選差異基因 使用R 語言中l(wèi)imma 軟件包設(shè)置篩選條件為FDR＜0.05 且差異變化倍數(shù)（Fold Change， FC）＞1.5，獲得正常結(jié)腸組織與結(jié)腸腺瘤、結(jié)腸腺瘤與結(jié)腸癌的差異表達(dá)基因，差異倍數(shù)≥1.5為上調(diào)基因，差異倍數(shù)＜0.67 為下調(diào)基因。利用VennDiagram 軟件包分別對(duì)上調(diào)基因和下調(diào)基因繪制韋恩圖，上調(diào)基因的交集和下調(diào)基因的交集定義為結(jié)腸癌癌變的差異基因。

1.4 分析差異基因參與的生物功能和通路 利用clusterProfiler、enrichplot 軟件包對(duì)結(jié)腸癌癌變的差異基因進(jìn)行GO 功能注釋［13-14］和KEGG 通路富集分析 并 作 圖［15-16］。GO 功 能 注 釋 包 括 生 物 過 程（Biological process，BP）、細(xì) 胞 成 分（Cellular component，CC）和分子功能（Molecular function，MF）3 部分。顯著富集篩選標(biāo)準(zhǔn)：P＜0.05 且FDR＜0.05。

1.5 構(gòu)建蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)及篩選特征基因 將結(jié)腸癌癌變的差異基因?qū)隨TRING 在線數(shù)據(jù)庫（https：//cn.string-db.org/），選擇multiple proteins，物種選擇homo sapiens，構(gòu)建差異基因的蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)（Protein-protein interaction networks，PPI），置信分?jǐn)?shù)設(shè)置為0.7，下載TSV 文件將其輸入Cytoscape 軟件（版本3.9.0）繪制可視化的網(wǎng)絡(luò)圖，通過cytoHubba插件［17］，采用MCC、DMNC、MNC、Degree、EPC、BottleNeck、EcCentricity、Closeness、Radiality、Betweenness、Stress、ClusteringCoefficient 12 種分析方法篩選前30個(gè)基因，挑選均出現(xiàn)的基因構(gòu)建蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)并定義為CRCCG。

1.6 計(jì)算GSVA 評(píng)分與繪制ROC 曲線 基因集變異分析（Gene set variation analysis， GSVA）可以計(jì)算單個(gè)樣本中特定基因集的富集評(píng)分。為評(píng)估CRCCG 的診斷性能，使用GSVA 軟件包對(duì)每個(gè)樣本計(jì)算CRCCG 的GSVA 評(píng)分?；赗OC 曲線，采用pROC 軟件包根據(jù)GSVA 評(píng)分計(jì)算ROC 曲線下面積（Area Under Curve，AUC）分析CRCCG-GSVA 評(píng)分的診斷價(jià)值，AUC＞0.9 表明CRCCG-GSVA 評(píng)分具有很高的診斷價(jià)值，AUC＞0.8 表明CRCCG-GSVA 評(píng)分具有較高的診斷價(jià)值。

1.7 基因表達(dá)水平的驗(yàn)證 GSE20916 驗(yàn)證CRCCG 在3種結(jié)腸組織類型中的表達(dá)情況。GEPIA數(shù)據(jù)庫（http：//gepia. cancer-pku. cn/）包括TCGA 數(shù)據(jù)庫和GTEx 數(shù)據(jù)庫中349 例癌旁正常結(jié)腸樣本和275 例結(jié)腸癌組織樣本［18］，驗(yàn)證CRCCG 在癌旁正常結(jié)腸樣本和結(jié)腸癌樣本的表達(dá)情況，并對(duì)其進(jìn)行生存分析。生存分析根據(jù)結(jié)腸癌患者基因表達(dá)值的中位數(shù)將樣本分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。Log-rank檢驗(yàn)基因高表達(dá)組與低表達(dá)組的總體生存率是否存在差異。COX 比例風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)比（Hazard Ratio，HR）。P＜0.05 代表基因高表達(dá)組與低表達(dá)組的結(jié)腸癌患者生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 差異表達(dá)基因 本研究利用limma 算法分析了數(shù)據(jù)集GSE37364 的基因表達(dá)譜，結(jié)果顯示正常結(jié)腸黏膜與結(jié)腸腺瘤有1 845 個(gè)差異表達(dá)基因，838個(gè)上調(diào)基因，1 007 個(gè)下調(diào)基因；結(jié)腸腺瘤與結(jié)腸癌有1 061個(gè)差異表達(dá)基因，714個(gè)上調(diào)基因，347個(gè)下調(diào)基因。韋恩圖發(fā)現(xiàn)，正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸腺瘤、結(jié)腸腺瘤和結(jié)腸癌的兩組上調(diào)基因交疊了76 個(gè)基因（圖1A），正常結(jié)腸黏膜和結(jié)腸腺瘤、結(jié)腸腺瘤和結(jié)腸癌的兩組下調(diào)基因交疊了107 個(gè)基因（圖1B），得到183 個(gè)結(jié)腸癌癌變的差異基因。這183 個(gè)基因表達(dá)從正常結(jié)腸黏膜—結(jié)腸腺瘤—結(jié)腸癌發(fā)展過程中，呈逐漸升高或降低趨勢(shì)。熱圖聚類顯示，183個(gè)基因可以將正常結(jié)腸黏膜、結(jié)腸腺瘤、結(jié)腸癌組織進(jìn)行分類（圖1C）。

圖1 GSE37364中差異表達(dá)基因的韋恩圖及熱圖

2.2 差異基因的功能分析 為進(jìn)一步研究183 個(gè)結(jié)腸癌癌變差異基因的分子機(jī)制，基于GO 富集分析，差異基因主要參與白細(xì)胞遷移、類固醇激素反應(yīng)、細(xì)胞趨化、白細(xì)胞趨化、細(xì)胞外基質(zhì)分解、鋅離子反應(yīng)、白細(xì)胞聚集等生物過程；主要富集于受體配體活性、受體調(diào)控活性、G 蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合、細(xì)胞因子活性、趨化因子受體結(jié)合、趨化因子活性等分子功能（圖2A）。通過KEGG 信號(hào)通路富集分析發(fā)現(xiàn)，差異基因主要參與10條信號(hào)通路：細(xì)胞因子受體相互作用、白細(xì)胞介素-17（Interleukin-17，IL-17）信號(hào)通路、病毒蛋白與細(xì)胞因子和細(xì)胞因子受體的相互作用、趨化因子信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路、NF-κB信號(hào)通路等信號(hào)通路（圖2B）。

圖2 差異基因GO注釋和KEGG信號(hào)通路分析

2.3 PPI 網(wǎng)絡(luò)的建立及關(guān)鍵基因的挖掘 基于STRING 在線數(shù)據(jù)庫利用Cytoscape 軟件對(duì)183 個(gè)結(jié)腸癌癌變相關(guān)的差異基因進(jìn)行PPI 網(wǎng)絡(luò)分析，得到差異基因之間有著顯著的交互作用（圖3A）。采用12 種分析方法篩選前30 個(gè)基因，取共有基因作為CRCCG，最 后 得 到11 個(gè) 基 因：ANLN、CXCL11、CXCL3、CXCL8、GZMB、IL1B、MMP3、SHCBP1、TIMP1、TRIP13、UBE2C。這些基因重新構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果11個(gè)CRCCG之間聯(lián)系密切（圖3B）。

2.4 CRCCG 的表達(dá)驗(yàn)證 在活檢組織樣本數(shù)據(jù)集GSE37364數(shù)據(jù)集中，CRCCG 在正常結(jié)腸黏膜、結(jié)腸腺瘤、結(jié)腸癌中的表達(dá)值逐漸增大（圖4A）。在手術(shù)組織樣本數(shù)據(jù)集GSE20916中進(jìn)一步驗(yàn)證CRCCG的表達(dá)情況，結(jié)果顯示CRCCG 在正常結(jié)腸黏膜、結(jié)腸腺瘤、結(jié)腸癌中的表達(dá)值也逐漸增大（圖4B）。另外，應(yīng)用GEPIA 在線數(shù)據(jù)庫研究CRCCG 的表達(dá)情況，結(jié)果相比于正常結(jié)腸，CRCCG 在結(jié)腸癌中均顯著高表達(dá)（圖5）。

圖5 GEPIA數(shù)據(jù)庫驗(yàn)證CRCCG在癌旁正常結(jié)腸（灰色）和結(jié)腸癌（紅色）表達(dá)水平

2.5 CRCCG-GSVA評(píng)分的分類效果 利用GSVA計(jì)算單個(gè)樣本中CRCCG 的GSVA 評(píng)分。結(jié)果顯示GSE37364 數(shù)據(jù)集中CRCCG-GSVA 評(píng)分隨著腫瘤進(jìn)展逐漸增大（圖6A），ROC 曲線得到CRCCG-GSVA評(píng)分對(duì)正常結(jié)腸、結(jié)腸腺瘤和結(jié)腸癌進(jìn)行分類的AUC 值為0.922，其中區(qū)分結(jié)腸癌與正常組織的AUC 為0.984，結(jié)腸腺瘤與正常組織的AUC 為0.929，結(jié)腸腺瘤與結(jié)腸癌的AUC 為0.823（圖6B）。基于ROC 曲線選擇最佳CRCCG-GSVA 評(píng)分分類閾值：＜-0.56判定為正常結(jié)腸，-0.56～0.3之間判定為結(jié)腸腺瘤，＞0.3 判定為結(jié)腸癌。CRCCG-GSVA評(píng)分的分類效果在GSE20916 數(shù)據(jù)集中也得到了驗(yàn)證，CRCCG-GSVA 評(píng)分也隨著結(jié)腸癌發(fā)展逐漸增加（圖6C），基于最佳分類閾值識(shí)別結(jié)腸腺瘤與正常結(jié)腸的準(zhǔn)確率為84.06%，敏感性為79.17%，特異性為86.67%；識(shí)別結(jié)腸癌與正常結(jié)腸的準(zhǔn)確率為93.33%，敏感性為91.67%，特異性為95.83%；識(shí)別結(jié)腸腺瘤與結(jié)腸癌的準(zhǔn)確率為87.65%，敏感性為84.44%，特異性為91.67%。CRCCG-GSVA 評(píng)分可以很好區(qū)分正常結(jié)腸黏膜、結(jié)腸腺瘤、結(jié)腸癌。

圖6 兩組數(shù)據(jù)集的CRCCG-GSVA評(píng)分分布與ROC曲線

2.6 基因生存分析 對(duì)CRCCG進(jìn)行生存分析，發(fā)現(xiàn)3個(gè)基因的表達(dá)與結(jié)腸癌患者的生存率相關(guān)。CXCL3和IL1B高表達(dá)組的總體生存期（Overall Survival，OS）顯著高于低表達(dá)組（CXCL3：HR=0.62，P=0.047；IL1B：HR=0.61，P=0.043），TIMP1高表達(dá)組的OS 顯著低于低表達(dá)組（HR=1.7，P=0.034）（圖7）。

圖7 GEPIA數(shù)據(jù)庫中CXCL3、IL-1β、TIMP1基因的生存分析

3 討論

結(jié)腸癌癌變的過程是個(gè)涉及多種基因變化的復(fù)雜過程。當(dāng)下，臨床上對(duì)結(jié)腸癌仍缺乏有效的治療手段，因而深入探索結(jié)腸癌病變過程的分子機(jī)制尤為重要，對(duì)早期診斷、靶向治療和預(yù)后評(píng)估具有指導(dǎo)作用。典型的結(jié)腸癌癌變過程就是從正常結(jié)腸黏膜—結(jié)腸腺瘤—結(jié)腸癌，根據(jù)這一發(fā)展特點(diǎn)，本研究關(guān)注結(jié)腸癌隨著腫瘤進(jìn)展而逐漸上調(diào)或者下調(diào)的差異基因。這些差異基因在正常結(jié)腸黏膜轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)腸癌過程中表達(dá)水平是逐漸積累變化的，在結(jié)腸癌癌變過程的作用尤為顯著。分析活檢組織數(shù)據(jù)集GSE37364 獲得從正常結(jié)腸組織到結(jié)腸癌進(jìn)展中表達(dá)水平逐漸升高或者降低的183個(gè)差異基因，差異基因與多條腫瘤相關(guān)的生物過程和信號(hào)通路有關(guān)?；赑PI 網(wǎng)絡(luò)利用cytoHubba 插件挖掘CRCCG，為避免單一種算法的計(jì)算偏差，采用了12種分析算法篩選在所有算法中均出現(xiàn)的11 個(gè)基因?yàn)镃RCCG（ANLN、CXCL11、CXCL3、CXCL8、GZMB、IL1B、MMP3、SHCBP1、TIMP1、TRIP13、UBE2C）。手術(shù)切除組織樣本和GEPIA 數(shù)據(jù)庫驗(yàn)證了這11 個(gè)基因的表達(dá)趨勢(shì)與活檢組織樣本的表達(dá)趨勢(shì)一致，隨著腫瘤進(jìn)展表達(dá)水平顯著升高?；赗OC 曲線確定了CRCCG-GSVA 評(píng)分最佳分類閾值：＜-0.56判定為正常結(jié)腸，-0.56～0.3 之間判定為結(jié)腸腺瘤，＞0.3 判定為結(jié)腸癌，獨(dú)立數(shù)據(jù)集也驗(yàn)證CRCCG-GSVA 評(píng)分具有診斷價(jià)值。進(jìn)一步挖掘CRCCG 與結(jié)腸癌預(yù)后關(guān)系發(fā)現(xiàn)IL1B、CXCL3和TIMP1這3個(gè)基因與結(jié)腸癌患者預(yù)后顯著相關(guān)。

已有研究表明，部分結(jié)腸癌癌變基因與結(jié)腸癌發(fā)展密切相關(guān)。白細(xì)胞介素-1β（Interleukin-1 beta，IL1B）是癌癥相關(guān)炎癥的重要介質(zhì)，在包括結(jié)腸癌等多種癌癥中表達(dá)水平升高［19-20］。IL1B 通過Zeb1 激活結(jié)腸癌干細(xì)胞自我更新和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)結(jié)腸癌生長和侵襲［21］。結(jié)腸癌細(xì)胞可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞釋放IL1B，調(diào)控GSK3β磷酸化，穩(wěn)定β-連環(huán)蛋白，增強(qiáng)T 細(xì)胞因子依賴性的基因活化，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中Wnt靶基因表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長［22］。趨化因子3（Chemokines 3，CXCL3）和趨化因子8（Chemokines 8，CXCL8）屬于CXC 趨化因子家族的單鏈蛋白質(zhì)，對(duì)炎癥和抗腫瘤免疫至關(guān)重要。CXCL3 表達(dá)受KRAS-IRF2 調(diào)控，介導(dǎo)結(jié)直腸癌免疫治療和免疫治療耐藥性［23］。在結(jié)腸癌組織中CXCL3 高表達(dá)，與腫瘤大小、腫瘤血栓、DNA 修復(fù)、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和P53 調(diào)控通路密切相關(guān)，致使結(jié)腸癌患者總體生存期較差［24-25］。CXCL8 在早期到晚期結(jié)腸癌以及轉(zhuǎn)移和非轉(zhuǎn)移病例中表達(dá)水平顯著高于正常組織樣本。另外發(fā)現(xiàn)血清樣本中CXCL8 濃度在結(jié)腸癌患者中也顯著高于健康對(duì)照組。與沒有轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌患者相比，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌患者CXCL8 水平也顯著升高［26］。組織金屬蛋白酶抑制劑（Metalloproteinase inhibitor 1，TIMP1）具有抑制MMPs 能力，有效控制細(xì)胞外基質(zhì)成分分解，影響腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。與正常結(jié)腸組織相比，TIMP1 在結(jié)腸腫瘤組織中表達(dá)水平升高，可特異性調(diào)節(jié)FAK-PI3K/AKT 和MAPK 通路，表達(dá)抑制導(dǎo)致結(jié)腸腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移能力減弱，細(xì)胞凋亡能力增強(qiáng)［27］。研究發(fā)現(xiàn)TIMP1 既在結(jié)腸癌組織樣本中高表達(dá)，也在血液樣本中高表達(dá)。在健康人的血小板中TIMP1 mRNA幾乎檢測(cè)不到，但在結(jié)腸癌患者的血小板中顯著增加，檢測(cè)血小板中TIMP1 mRNA 比檢測(cè)CEA 或CA199 在結(jié)腸癌診斷具有更高的敏感性和特異性［28］。還有研究揭示血漿中TIMP1 表達(dá)水平是結(jié)腸癌患者生存的重要預(yù)后因素，術(shù)前血漿中高表達(dá)的TIMP1 預(yù)示結(jié)腸癌患者預(yù)后不良［29］。綜合已有研究和本研究結(jié)果，CRCCG 不僅可以作為結(jié)腸癌組織檢測(cè)的分子標(biāo)志，或許還可以通過血液檢測(cè)其表達(dá)值診斷結(jié)腸癌，早期對(duì)患者進(jìn)行治療，提高生存率。

本研究結(jié)合了公共數(shù)據(jù)庫和多種組織類型分析結(jié)腸癌癌變過程中隨腫瘤進(jìn)展顯著差異表達(dá)的基因，確定了CRCCG。CRCCG 是潛在的結(jié)腸癌診斷分子標(biāo)志，其中IL1B、CXCL3和TIMP13個(gè)基因還與結(jié)腸癌的預(yù)后相關(guān)。這些結(jié)果為結(jié)腸癌的診斷和預(yù)后提供參考。腸鏡活檢組織檢查是結(jié)腸癌診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但具有創(chuàng)傷性、需充分腸道準(zhǔn)備、操作復(fù)雜、操作過程患者痛苦、患者依從性較差等缺點(diǎn)，大多數(shù)患者首診已處于晚期。因此，急需開發(fā)敏感、特異、安全、無創(chuàng)的診斷方法便于診斷，從而降低結(jié)腸癌的死亡率。血液中含有與腫瘤相關(guān)的許多生物分子，同時(shí)血液又具有采樣簡便、風(fēng)險(xiǎn)較小等優(yōu)點(diǎn)，因此基于血液的生物標(biāo)志物可能是結(jié)腸癌診斷的更佳基質(zhì)。本研究篩選得到的CRCCG 與分泌蛋白、免疫反應(yīng)密切相關(guān)，其中CXCL8 和TIMP1已有研究分析其在結(jié)腸癌血液中的表達(dá)，CRCCG 或許可作為結(jié)腸癌診斷的血液分子標(biāo)志。后續(xù)將基于血液樣本進(jìn)一步研究這個(gè)診斷標(biāo)志，以期得到非侵入性的診斷標(biāo)志便于臨床應(yīng)用。