馬玉輝　珠瑪別克·卡尼提別克　奴爾蘭·阿克亞孜　李海

摘要［目的］研究鞣花酸對冷應激條件下小鼠力竭運動能力、血漿抗氧化及炎癥因子水平的影響。［方法］將30只體重接近（14.72±0.81）g的雄性小鼠隨機分為3組，分別為對照組、試驗 Ⅰ 組和試驗 Ⅱ 組。在相同的飼養(yǎng)管理和日糧營養(yǎng)水平條件下，對照組不做任何處理，試驗 Ⅰ 組每天每只灌胃1 mL生理鹽水，試驗 Ⅱ 組每天每只灌胃25 mg/mL鞣花酸1 mL。試驗 Ⅰ 組和試驗 Ⅱ 組進行為期21 d的游泳力竭運動，所有小鼠力竭運動后無害化處理，并獲取相應樣品，測定相關(guān)指標。［結(jié)果］整個試驗期間，試驗 Ⅱ 組小鼠游泳時間比試驗 Ⅰ 組長，第21天時，試驗 Ⅱ 組小鼠游泳力竭時間比試驗 Ⅰ 組和對照組長，分別延長了9.99%（P>0.05）和22.08%（P>0.05）。試驗 Ⅱ 組血漿中總蛋白、白蛋白和球蛋白分別比對照組提高了6.73%（P>0.05）、7.39%（P>0.05）、6.08%（P>0.05）；尿素氮含量比對照組降低了32.58%（P<0.05）。血漿中SOD、CAT、T-AOC、HFRSA和ASAFR試驗 Ⅱ 組分別比對照組提高了67.90%（P<0.05）、89.36%（P<0.05）、46.15%（P<0.05）、45.45%（P<0.05）和33.40%（P<0.05）。試驗 Ⅱ 組血漿中TNF-α和IL-17A分別比對照組降低了20.99％（P<0.05）和53.58％（P<0.05）。［結(jié)論］在該試驗冷應激條件下，給小鼠灌胃鞣花酸后，能夠延長小鼠力竭運動的時間，提高血漿中抗氧化能力，降低炎癥因子水平，對小鼠的健康和疾病防控具有一定的改善作用。

關(guān)鍵詞鞣花酸；冷應激；力竭運動；抗氧化指標；炎癥因子

中圖分類號R285文獻標識碼A

文章編號0517-6611（2023）08-0187-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.08.043開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Effects of Ellagic Acid on Exhaustive Exercise Ability， Plasma Antioxidant and Inflammatory Factor Levels

MA Yuhui1，2，Zhumabieke Kanitibieke2， Nverlan Akeyazi2 et al（1. Zhaosu County Westland Horse Industry Co.， Ltd.，Zhaosu，Xinjiang 835600;2. Zhaosu County Animal Husbandry and Veterinary Development Center， Zhaosu， Xinjiang 835600）

Abstract［Objective］To study the effect of ellagic acid on exhaustive exercise ability， plasma antioxidant and inflammatory factor levels in mice under cold stress. ［Method］Thirty male mice with similar body weight （14.72±0.81）g were randomly divided into three groups， namely control group， test group Ⅰ and test group Ⅱ. Under the same feeding management and dietary nutrient levels， the control group did not do anything. The test group I was given 1 mL of saline per day， and the test group Ⅱ was given 25 mg/mL ellagic acid per day. The test group Ⅰ and the test group Ⅱ performed a 21day exhaustive swimming exercise， all mice were harmlessly treated after exhaustive exercise， and corresponding samples were obtained to determine relevant indicators. ［Result］During the entire test period， the swimming time of mice in Test Group Ⅱ was longer than that in Test Group Ⅰ. On the 21st day， the swimming exhaustion time of mice in Test Group Ⅱ was 9.99% （P>0.05） and 22.08% （P>0.05） longer than that of mice in Test Group I and the control group， respectively.Compared with the control group， the total plasma protein， albumin and globulin in Test Group Ⅱ increased by 6.73% （P>0.05）， 7.39% （P>0.05）， and 6.08% （P>0.05）， respectively;the urea nitrogen content decreased by 32.58% （P<0.05）.The plasma levels of SOD， CAT， TAOC， HFRSA， and ASAFR in test group Ⅱ were 67.90% （P<0.05）， 89.36% （P<0.05）， 46.15% （P<0.05）， 45.45% （P<0.05）， and 33.40% （P<0.05） higher than those in the control group， respectively.TNFα And IL17A in plasma in test group Ⅱ decreased by 20.99% （P<0.05） and 53.58% （P<0.05） compared with the control group， respectively.［Conclusion］ Under the condition of cold stress in this experiment， gavage of ellagic acid to mice can prolong the time of exhaustive exercise， improve the antioxidant capacity in plasma， reduce the level of inflammatory factors， and have a certain improvement effect on the health and disease prevention and control of mice.

Key wordsEllagic acid;Cold stress;Exhaustive exercise;Antioxidant index;Inflammatory factors

鞣花酸（ellagic acid，EA）也叫胡頹子酸、沒食子酸，是植物組織中普遍存在的一種天然膳食多酚，是沒食子酸的二聚衍生物，自然界中大多以鞣花單寧、苷等縮合結(jié)構(gòu)存在。鞣花酸的天然結(jié)構(gòu)為反式?jīng)]食子酸單寧，其分子式為C14H6O8。鞣花酸目前已被探知的生物學功能有抗氧化、抗炎癥和抗衰老等［1-5］。如蔡晨晨等［1］研究表明，鞣花酸具有對抗缺氧缺血性損傷的神經(jīng)保護作用，初步證明鞣花酸可能通過降低神經(jīng)元內(nèi)過分自噬的表達起到神經(jīng)保護作用。段婧［2］研究表明，EA能以顯著的抗腫瘤活性對癌細胞產(chǎn)生明顯的增殖抑制作用，還能通過下調(diào)癌性抑制因子（CIP2A）蛋白表達，誘導非小細胞癌自噬，從而抑制肺癌細胞增殖。冷應激是機體在受到極寒條件刺激時產(chǎn)生的一種為保護自身機體的應激反應，對機體自身免疫調(diào)控等方面產(chǎn)生不利的影響，嚴重影響機體的健康和動物的生產(chǎn)性能［6-8］；在寒冷地區(qū)，特別是在我國西北和東北寒地，嚴重影響畜牧業(yè)的發(fā)展以及動物的健康，對畜牧業(yè)造成嚴重經(jīng)濟損失［9］。因此，研究冷應激環(huán)境下機體機能健康和抗冷應激的能力對抑制冷應激產(chǎn)生的危害意義重大。該試驗以小鼠為研究對象，在冷應激力竭游泳條件下，通過灌胃EA探究小鼠對冷應激的適應能力及抗氧化能力，為鞣花酸在動物生產(chǎn)中的應用提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1試劑EA（上海源葉生物科技有限公司，批號YY13933），生理鹽水（濃度0.9%）。

1.2試驗動物SPF級昆明種雄性小鼠30只，采購于新疆醫(yī)科大學。

1.3試驗設計試驗選用體重相近的［（14.72 ± 0.81）g］30只雄性斷奶小鼠，隨機分成3組，即對照組、試驗 Ⅰ 組和試驗 Ⅱ 組，每組各10只。試驗期間所有小鼠日糧營養(yǎng)水平一致、飼養(yǎng)管理方式一致，日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。對照組置于室溫中給予同等水平日糧及飼養(yǎng)管理，每次灌胃試驗組小鼠時需用空管刺激對照組小鼠胃部。試驗 Ⅰ 組小鼠灌胃生理鹽水1 mL/d，試驗 Ⅱ 組每只灌胃EA 25 mg/d（將25 mg EA溶解于1 mL的生理鹽水中），進行為期21 d的灌胃及力竭游泳試驗，試驗最后一天（即第21天），眼眶采集小鼠血液樣品，并測定相關(guān)指標。

1.4游泳方案試驗 Ⅰ 組和試驗 Ⅱ 組小鼠（對照組小鼠均用灌胃針刺激胃部）早晨灌胃過后，放回籠中，8 h后取出進行游泳力竭運動，游泳前稱量兩組小鼠的重量（記為初始重）后分別將試驗 Ⅰ 組和試驗 Ⅱ 組放在2個不同的0 ℃恒溫測定箱中，使其完全力竭（即沉入水中10 s，取出后放在實驗臺上不能完成翻身反射為達到力竭標準）并記錄每只小鼠力竭時間，用吹風機熱風吹干小鼠后放回籠中。試驗第1天開始，每隔1 d進行，直至第21天采血完后進行無害化處理。

1.5樣品采集及處理所有小鼠無害化處理之前，在小鼠眶下采血至5 mL肝素鈉抗凝管，室溫靜置10 min后，3 500 r/min離心15 min，吸取上清血漿至2 mL Eppendorf管保存。

1.6檢測指標

1.6.1血漿抗氧化指標。過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、羥自由基清除能力（HFRSA）、抗超氧陰離子自由基（ASAFR）、總抗氧化能力（T-AOC）、一氧化氮（NO）及丙二醛（MDA），委托南京建成生物工程研究所采用試劑盒測定。

1.6.2血漿炎癥因子指標。腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白介素17A（IL-17A）、白介素10（IL-10），委托南京建成生物工程研究所采用試劑盒測定。

1.6.3血漿常規(guī)指標?？偟鞍住⑶虻鞍?、白蛋白、尿素氮，采用生物法測定。

1.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理通過Excel對小鼠所測各項數(shù)據(jù)進行初步整理，采用SPSS 19.0軟件one-way ANOVA進行方差分析，采用Duncan法進行多重比較，試驗數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標準差（Mean±SD）表示。

2結(jié)果與分析

2.1灌胃EA對小鼠力竭運動時間的影響由表2可知，整個試驗期間，試驗 Ⅱ 組小鼠游泳力竭時間比試驗 Ⅰ 組長，但差異不顯著（P>0.05）。第21天時，試驗 Ⅱ 組小鼠游泳力竭時間比試驗 Ⅰ 組和對照組長，分別延長了9.99%（P>0.05）和22.08%（P>0.05）。隨著力竭游泳運動訓練的持續(xù)，小鼠游泳力竭的運動時間在逐漸延長，且給小鼠補喂EA后力竭運動時間更長。

2.2灌胃EA對血漿常規(guī)指標的影響由表3可知，試驗Ⅱ組小鼠血漿中總蛋白比對照組和試驗 Ⅰ 組分別提高了6.73%和8.62%，差異不顯著（P>0.05）;試驗 Ⅱ 組白蛋白比對照組和試驗 Ⅰ 組分別提高了7.39%和6.28%，差異不顯著（P>0.05）;試驗 Ⅱ 組球蛋白比對照組和試驗 Ⅰ 組分別提高了6.08%和11.07%，差異不顯著（P>0.05）；試驗 Ⅱ 組小鼠血漿中尿素氮含量與對照組相比降低了32.58%，呈顯著差異（P<0.05），試驗 Ⅰ 組小鼠血漿中尿素氮與試驗 Ⅱ 組相比提高了2.01%，差異不顯著（P>0.05）。

2.3灌胃EA對血漿抗氧化水平的影響由表4可知，試驗Ⅱ 組血漿中SOD含量比對照組和試驗 Ⅰ 組分別顯著提高了67.90%和19.57%，CAT含量分別顯著提高了89.36%和25.94%，T-AOC含量分別顯著提高了46.15%和18.75%。試驗 Ⅱ 組血漿中MDA與試驗 Ⅰ 組和對照組相比分別顯著降低了23.43%和43.20%。試驗Ⅱ組HFRSA和ASAFR比對照組分別顯著提高了45.45%和33.40%；3組血漿中NO含量和GSH-Px含量均無顯著差異（P>0.05）。

2.4灌胃EA對血漿炎癥因子水平的影響由表5可知，試驗 Ⅱ 組小鼠血漿中TNF-α和IL-17A水平與對照組相比均顯著降低，分別降低了20.99%和53.58%；試驗 Ⅰ 組小鼠血漿中IL-17A水平比對照組顯著降低了39.88%；試驗 Ⅱ 組血漿中TNF-α和IL-17A水平與試驗 Ⅰ 組相比差異不明顯（P>0.05）；3組血漿中IL-10水平無顯著差異（P>0.05）。

3討論

冷應激是指寒冷天氣條件下，尤其是在冬季，由于外界空氣及寒風的影響下，產(chǎn)生的一種應激反應，分急性和慢性2種，會對機體代謝能力和生產(chǎn)性能造成嚴重威脅，產(chǎn)生不可逆的損傷［10］。

EA最早發(fā)現(xiàn)于1831年，是一種天然酚類，廣泛存在于各種軟果、堅果等植物組織中，例如核桃、草莓、葡萄、桃子和石榴等水果和堅果中［11］。目前研究已發(fā)現(xiàn)，EA具有抗氧化、抗菌性、抗癌性、抗炎癥、抗毒、抗衰老等作用［3-5，12-18］。邢曉平等［12］研究表明，EA具有清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基能力，且清除自由基能力大于維生素C，具有很好的抗氧化性。呂廣［13］研究表明，EA對炎性細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌具有抑制作用，對抗炎細胞因子IL-10的分泌有促進作用。阿米娜·阿不拉等［19］研究表明，高劑量EA對小鼠白色念珠菌群的治療作用比低劑量組更好。于婭等［15］研究表明，EA具有抗腫瘤和抗腫瘤血管生成的作用。該試驗結(jié)果顯示，給小鼠灌喂EA后能延長游泳力竭時間；魏三同［16］研究結(jié)果顯示，鐵皮石斛多酚能延長小鼠力竭運動時間，降低小鼠疲勞，增強其運動性能。柏延洋等［17］試驗結(jié)果顯示，茶多酚所含的酚羥基可以提供一種叫活潑氫的成分，其主要作用是在運動過程中與自由基產(chǎn)生反應，從而達到減少體內(nèi)自由基的目的，也能夠促進機體運動性疲勞的恢復。這與該研究結(jié)果相似，給小鼠灌喂EA后延長了小鼠力竭運動時間可能與EA屬于多酚類物質(zhì)有關(guān)。

小鼠在力竭運動時，體內(nèi)的自由基會增加，而自由基增加抗氧化能力就下降，其運動時間也會相應下降。熊延連等［19］研究表明，小鼠力竭運動過程中，紅細胞（RBC）將啟動抗氧化應急機制，主要的酶類抗氧化物SOD和CAT活力顯著升高，與此同時，RBC消耗大量GSH-Px清除胞內(nèi)和外源性活性氧（ROS）。李小萍等［20］研究表明，樹莓中鞣花酸提取物對·OH有一定的清除作用，清除率隨著樹莓鞣花酸提取物濃度的增加而升高，當濃度為3 mg/mL時，對·OH的清除作用高達74.8%，具有很強的清除自由基作用。這與該研究結(jié)果相同，在該試驗中，給小鼠灌喂EA后，小鼠血漿中的SOD、CAT、GSH-Px、HFRSA、ASAFR、T-AOC水平均升高，MDA顯著下降，表明小鼠灌胃EA后體內(nèi)·OH減少，從而終止了自由基的鏈式反應，達到了抗氧化的目的。

此外，體內(nèi)TNF-α、IL-17A等炎癥因子是人體某些疾病發(fā)病的關(guān)鍵因子，當其分泌過量時，會引發(fā)嚴重的炎癥反應，更會對機體造成不可逆的損傷，所以抑制炎癥因子是治療細菌性疾病的關(guān)鍵，而灌喂EA后小鼠體內(nèi)的TNF-α和IL-17A明顯下降，表明EA能很好地抑制炎癥因子的產(chǎn)生，對炎癥的發(fā)生具有很好的防控作用。

4結(jié)論

該試驗研究鞣花酸對冷應激條件下小鼠力竭運動能力、血漿抗氧化及炎癥因子水平的影響，結(jié)果表明，整個試驗期間，試驗 Ⅱ 組小鼠游泳時間比試驗 Ⅰ 組長，第21天時，試驗? Ⅱ? 組小鼠游泳力竭時間比試驗Ⅰ組和對照組長，分別延長了9.99%（P>0.05）和22.08%（P>0.05）。試驗 Ⅱ 組血漿中總蛋白、白蛋白和球蛋白分別比對照組提高了6.73%（P>0.05）、7.39%（P>0.05）、6.08%（P>0.05）；尿素氮含量比對照組降低了32.58%（P<0.05）。血漿中SOD、CAT、T-AOC、HFRSA和ASAFR試驗Ⅱ組分別比對照組提高了67.90%（P<0.05）、89.36%（P<0.05）、46.15%（P<0.05）、45.45%（P<0.05）和33.40%（P<0.05）。試驗 Ⅱ 組血漿中TNF-α和IL-17A分別比對照組降低了20.99％（P<0.05）和53.58％（P<0.05）。因此，在該試驗冷應激條件下，給小鼠灌胃鞣花酸后，能夠延長小鼠力竭運動的時間，提高血漿中抗氧化能力，降低炎癥因子水平，對小鼠的健康和疾病防控具有一定的改善作用。

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