張 赟，郭艷平，張向東

(安陽市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科,河南 安陽 455000)

癲癇是一種由腦部神經(jīng)元異常放電引起的反復(fù)發(fā)作、短暫的慢性腦部疾病[1]。癲癇持續(xù)狀態(tài)是指癲癇長時間持續(xù)發(fā)作不能自行恢復(fù),是一種嚴(yán)重的癲癇發(fā)作形式,具有較高的致殘率和病死率[2]。因癲癇持續(xù)狀態(tài)患者長時間處于全面強(qiáng)直-陣攣性發(fā)作,可造成腦部神經(jīng)元受損,使得患者出現(xiàn)神經(jīng)功能障礙,嚴(yán)重者甚至可出現(xiàn)永久性的神經(jīng)功能缺失[3]。有研究顯示,癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者易發(fā)生認(rèn)知功能障礙,約有30%～40%的癲癇持續(xù)狀態(tài)患者伴有不同程度的認(rèn)知功能障礙[4]。癲癇持續(xù)狀態(tài)患者發(fā)生認(rèn)知功能障礙后常影響患者日常生活和工作,導(dǎo)致患者生活質(zhì)量下降[5]。因此,明確癲癇持續(xù)狀態(tài)患者發(fā)生認(rèn)知功能障礙的危險因素具有重要意義。血小板內(nèi)皮聚集受體1(platelet endothelial aggregation receptor 1,PEAR1)基因是一種跨膜受體,主要位于人染色體1q23.1,其單核苷酸多態(tài)性與腦梗死患者認(rèn)知功能障礙的發(fā)生密切相關(guān)[6],但其基因多態(tài)性與癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者認(rèn)知功能障礙的關(guān)系鮮有報道,故本研究以癲癇持續(xù)狀態(tài)患者為研究對象,探討癲癇持續(xù)狀態(tài)患者發(fā)生認(rèn)知功能障礙的危險因素,并重點分析PEAR1基因多態(tài)性與該類患者認(rèn)知功能的關(guān)系,為癲癇持續(xù)狀態(tài)后認(rèn)知功能障礙的高風(fēng)險人群篩查提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2020年1月至2022年1月安陽市人民醫(yī)院收治的60例癲癇持續(xù)狀態(tài)患者為研究對象(觀察組)。病例納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合癲癇持續(xù)狀態(tài)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],經(jīng)臨床癥狀、腦電圖等證實;(2)年齡≥18歲;(3)經(jīng)影像學(xué)檢查證實無腦部病變,如顱內(nèi)占位、腦外傷、腦卒中等;(4)知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)長期服用可影響認(rèn)知功能的藥物者;(2)伴有可影響細(xì)胞凋亡的慢性疾病,如自身免疫障礙性疾病;(3)長期酗酒者;(4)其他疾病導(dǎo)致的認(rèn)知功能障礙者,如阿爾茨海默病。另選擇60例同期來院進(jìn)行體檢的健康志愿者為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)經(jīng)影像學(xué)檢查證實無腦血管疾病、顱內(nèi)感染、海馬硬化等;(2)年齡≥18歲;(3)無癲癇史,無不明原因抽搐、暈厥等病史。觀察組:男38例,女22例;年齡20～72(35.56±13.46)歲。對照組:男39例,女21例;年齡20～69(36.75±14.53)歲。2組受試者性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。根據(jù)簡易智力狀態(tài)檢查量表(mini-mental state examination,MMSE)評分結(jié)果將觀察組患者分為認(rèn)知功能正常組(MMSE評分≥27分,n=40)和認(rèn)知功能障礙組(MMSE評分<27分,n=20)。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)。

1.2 認(rèn)知功能評估觀察組患者在癲癇持續(xù)狀態(tài)發(fā)作緩解后,意識水平恢復(fù)到清醒水平后1～7 d內(nèi)進(jìn)行認(rèn)知功能評估;對照組受試者于來院體檢時進(jìn)行認(rèn)知功能評估。具體方法為:在安靜環(huán)境下由同一醫(yī)護(hù)人員采用MMSE[8]進(jìn)行評估,MMSE評分≥27分為認(rèn)知功能正常,MMSE評分<27分為存在認(rèn)知功能障礙。

1.3 PEAR1基因rs12041331位點單核苷酸多態(tài)性檢測取所有受試者清晨空腹靜脈血4 mL,置于乙二胺四乙酸二鈉抗凝管,然后進(jìn)行DNA提取,提取步驟根據(jù)DNA提取試劑盒說明書進(jìn)行操作,獲得的DNA置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。然后采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms,PCR-RFLP)檢測PEAR1基因rs12041331位點單核苷酸多態(tài)性。rs12041331位點正向引物序列為 5′-GCTTCATCATTACTCTGTAAGCTCTGC-3′,rs12041331位點反向引物序列為5′-CGATCCACTGCTCATCATAGACGCTTG-3′。PCR反應(yīng)體系(25.0 μL):基因組DNA 2.0 μL,正向和反向引物各 5.0 μL,2×Taq Mix 12.5 μL,0.5 μL超純凈化水。PCR反應(yīng)條件:94 ℃預(yù)變性 5 min,94 ℃變性30 s,58.5 ℃、59.5 ℃、72 ℃各變性30 s,72 ℃擴(kuò)增 5 min,共循環(huán)30次。獲取PCR產(chǎn)物,采用酶切檢測PEAR1基因rs12041331位點基因型。

1.4 資料收集收集可能影響癲癇持續(xù)狀態(tài)患者認(rèn)知功能的相關(guān)因素,包括性別、年齡、PEAR1基因rs12041331位點基因分型(AA、GG、GA)、發(fā)作類型(部分性發(fā)作、全面性發(fā)作)、文化程度(高中及以下、大專、本科及以上)、每個月發(fā)作頻率(<1次、1～4次、>4次)、病程、服用抗癲癇藥物種類(未服用藥物、服用1種藥物、服用2種藥物、服用2種以上藥物)、起病年齡、MMSE評分、家族史。

2 結(jié)果

2.1 對照組與觀察組PEAR1基因單核苷酸多態(tài)性、MMSE評分比較結(jié)果見表1。觀察組患者PEAR1基因rs12041331位點AA、GG、GA基因型分布頻率與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。觀察組患者M(jìn)MSE評分顯著低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表1 對照組與觀察組患者PEAR1基因單核苷酸多態(tài)性、MMSE評分比較Tab.1 Comparison of PEAR1 gene single nucleotide polymorphism and MMSE score of patients between the control group and the observation group

2.2 影響癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者認(rèn)知功能的危險因素單因素分析結(jié)果見表2。認(rèn)知功能障礙組患者的性別、年齡、發(fā)作類型、文化程度、服用抗癲癇藥物種類、家族史與認(rèn)知功能正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。認(rèn)知功能障礙組與認(rèn)知功能正常組患者的PEAR1基因rs12041331位點基因分型、每個月發(fā)作頻率、病程、起病年齡和MMSE評分比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

表2 影響癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者認(rèn)知功能的危險因素單因素分析結(jié)果Tab.2 Results of univariate analysis of risk factors affecting cognitive function in patients after status epilepticus

2.3 影響癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者認(rèn)知功能的危險因素多因素logistic回歸分析結(jié)果見表3。以癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者認(rèn)知功能障礙為因變量,以單因素分析中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的指標(biāo)為自變量進(jìn)行l(wèi)ogistic 回歸分析,結(jié)果顯示,PEAR1基因rs12041331位點AA基因型、每個月發(fā)作頻率>4次、病程時間長、起病年齡小、低MMSE評分是影響癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者認(rèn)知功能障礙的危險因素(P<0.05)。

表3 影響癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者認(rèn)知功能的危險因素多因素logistic回歸分析Tab.3 Results of multivariate analysis of risk factors affecting cognitive function in patients after status epilepticus

3 討論

癲癇持續(xù)狀態(tài)是指癲癇發(fā)作時間超過5 min不自動停止的現(xiàn)象,若治療不及時可因循環(huán)衰竭、高熱、電解質(zhì)紊亂等導(dǎo)致永久性腦損傷的發(fā)生[9]。隨著醫(yī)學(xué)模式的轉(zhuǎn)變及對癲癇持續(xù)狀態(tài)認(rèn)識的深入,臨床上對癲癇持續(xù)狀態(tài)的治療不再局限于控制癲癇的發(fā)作和緩解,癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者的認(rèn)知功能障礙也逐漸引起臨床的重視[10]。目前,大量研究顯示,癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者存在不同程度的認(rèn)知功能障礙[11-13],認(rèn)知功能障礙的發(fā)生可導(dǎo)致患者對事物的感知能力和注意力降低,閱讀和學(xué)習(xí)能力減退,計劃判斷能力和抽象概括能力減弱,不利于患者日常生活和工作的正常進(jìn)行。早發(fā)現(xiàn)、早治療對改善癲癇持續(xù)狀態(tài)患者認(rèn)知功能具有重要意義。鑒于此,尋找有效的早期篩查手段是發(fā)現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)后認(rèn)知功能障礙高風(fēng)險人群的關(guān)鍵。

多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,認(rèn)知功能障礙的發(fā)生與神經(jīng)功能受損、血管狹窄、炎癥反應(yīng)、腦缺血及其他多種因素有關(guān)[14-15]。PEAR1是一種跨膜受體,因其與巨核細(xì)胞生成、血小板活化、內(nèi)皮細(xì)胞功能關(guān)系密切,受到臨床的廣泛關(guān)注,其包含22個內(nèi)含子和23個外顯子,長度約30 kb。IZZI等[16]研究顯示,PEAR1表達(dá)受DNA甲基化驅(qū)動,且PEAR1甲基化與白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比水平呈負(fù)相關(guān),與淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞百分比呈正相關(guān),推測其可能參與機(jī)體的炎癥狀態(tài)。炎癥反應(yīng)與癲癇發(fā)作及認(rèn)知功能障礙的發(fā)生相關(guān)[17]。郭宏偉等[6]研究發(fā)現(xiàn),PEAR1基因rs12041331位點AA基因型與腦卒中后認(rèn)知功能障礙的發(fā)生密切相關(guān)。另有研究顯示,PEAR1在衛(wèi)星神經(jīng)膠質(zhì)前體細(xì)胞中表達(dá),參與神經(jīng)元的凋亡,從而影響患者的認(rèn)知功能[18]。鑒于此,推測PEAR1基因rs12041331位點基因型可能與癲癇持續(xù)狀態(tài)后認(rèn)知功能障礙的發(fā)生存在一定的關(guān)系,對此,本研究首先比較了癲癇持續(xù)狀態(tài)患者(觀察組)與健康志愿者(對照組)的PEAR1基因型和認(rèn)知功能,結(jié)果顯示,觀察組患者的PEAR1基因rs12041331位點AA、GG、GA基因型分布頻率與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義,且觀察組患者的MMSE評分顯著低于對照組,說明癲癇持續(xù)狀態(tài)患者存在不同程度的認(rèn)知功能障礙,且認(rèn)知障礙的發(fā)生可能與rs12041331位點AA基因型相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示,認(rèn)知功能障礙組患者的PEAR1基因rs12041331位點AA基因型、每個月發(fā)作頻率>4次比例、病程顯著高于認(rèn)知功能正常組,起病年齡、MMSE評分顯著低于認(rèn)知功能正常組,說明癲癇持續(xù)狀態(tài)后認(rèn)知功能障礙的發(fā)生受多種因素影響。為了明確影響癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者認(rèn)知功能障礙的危險因素,本研究將單因素分析中差異有統(tǒng)計意義的因素進(jìn)一步行l(wèi)ogistic回歸分析,結(jié)果顯示,PEAR1基因rs12041331位點AA基因型、每個月發(fā)作頻率>4次、病程時間長、起病年齡小、低MMSE評分均是影響癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者認(rèn)知功能障礙的危險因素。說明攜帶AA基因型的癲癇持續(xù)狀態(tài)患者更易發(fā)生認(rèn)知功能障礙,故臨床上可通過檢測PEAR1基因rs12041331位點基因多態(tài)性,篩查癲癇持續(xù)狀態(tài)后認(rèn)知功能障礙高風(fēng)險人群。此外,每個月發(fā)作頻率>4次、病程時間長、起病年齡小會增加患者的認(rèn)知功能障礙的發(fā)生風(fēng)險,應(yīng)引起臨床重視。分析其原因,患者每月發(fā)作頻率越高、病程時間越長、起病年齡越小,患者腦部組織損傷次數(shù)越多,認(rèn)知功能障礙的發(fā)生風(fēng)險也就越高。

綜上所述,PEAR1基因rs12041331位點AA基因型是影響癲癇持續(xù)狀態(tài)后患者認(rèn)知功能障礙的危險因素,攜帶AA基因型的癲癇持續(xù)狀態(tài)患者更易發(fā)生認(rèn)知功能障礙。