張 釗，張常慶，侯 影，余德勉，梁觀鳳

(上海悅聯(lián)生物科技有限公司，上海 201215)

啶氧菌酯[1]是由先正達(dá)公司開發(fā)的一種甲氧基丙烯酯類殺菌劑，具有保護(hù)、滲透、內(nèi)吸性和良好的熏蒸活性，對(duì)作物安全，被葉片吸收后會(huì)隨水流在木質(zhì)部運(yùn)輸系統(tǒng)中流動(dòng)，并可從葉片表面的氣相流動(dòng)中吸收進(jìn)葉片，其作用機(jī)理為通過阻斷細(xì)胞色素b和c1之間的電子轉(zhuǎn)移，抑制病菌線粒體呼吸，破壞病菌的能量合成及循環(huán)。主要用于防治麥類的葉面病害如葉枯病、葉銹病、穎枯病、褐斑病、白粉病等。

戊唑醇[1]是由拜耳公司開發(fā)研制的具內(nèi)吸、保護(hù)、治療和鏟除活性的三唑類殺菌農(nóng)藥，能迅速被植物有生長(zhǎng)力的部分吸收并主要向頂部轉(zhuǎn)移，不僅具有殺菌作用，還可促進(jìn)植物生長(zhǎng)，對(duì)病菌的作用機(jī)理為抑制其細(xì)胞膜上麥角甾醇的去甲基化，使得病菌無法形成細(xì)胞膜，從而殺死病菌。可有效地防治禾谷類作物的多種銹病、白粉病、網(wǎng)斑病、根腐病、赤霉病、黑穗病、種傳輪斑病及早稻紋枯病等。

將啶氧菌酯和戊唑醇以適當(dāng)比例混配成制劑，同時(shí)具有保護(hù)和治療作用，殺菌譜廣，活性高，可有效應(yīng)對(duì)多種病菌；且具有滲透、內(nèi)吸和擴(kuò)散分布能力，有效成分在植物中能有效再分配及充分傳遞，使防治和保護(hù)作用更全面；同時(shí)還能促進(jìn)植物生長(zhǎng)，使之根系發(fā)達(dá)，葉色濃綠，植株健壯，有效分蘗增加，從而提高產(chǎn)量。

有關(guān)啶氧菌酯的分析方法[2-3]和戊唑醇的分析方法[4-6]已有相關(guān)報(bào)道，但兩者混配懸浮劑的分析方法還未見報(bào)道，本文采用反相高效液相色譜法，對(duì)30%啶氧菌酯·戊唑醇懸浮劑(10%+20%)中有效成分啶氧菌酯和戊唑醇同柱分析和定量，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，此方法操作快速、簡(jiǎn)便，精密度和準(zhǔn)確度均能滿足定量分析要求，能適用于產(chǎn)品質(zhì)量控制和相關(guān)分析的研究。

1 材料儀器

1.1 樣品和試劑 甲醇：色譜純；水：二次重蒸蒸餾水；啶氧菌酯標(biāo)樣：已知啶氧菌酯含量≥98.0%；戊唑醇標(biāo)樣：已知戊唑醇含量≥98.0%，流動(dòng)相：甲醇∶水=75∶25，經(jīng)0.45 μm孔徑的濾膜，并在超聲波浴槽中脫氣10 min。

1.2 儀器 高效液相色譜儀：具紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器；色譜柱：Φ4.6 mm×150 mm不銹鋼柱，內(nèi)裝Kromasil C18/5 μm為填充料的不銹鋼柱。

1.3 高效液相色譜操作條件 流量：1.0 mL/min，柱溫：室溫(溫差變化≤2℃)，檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，進(jìn)樣體積：20 μL，保留時(shí)間：啶氧菌酯約5.5 min，戊唑醇約7.0 min。

上述操作條件是典型的，可根據(jù)儀器的特點(diǎn)對(duì)操作參數(shù)做適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果，典型的啶氧菌酯(戊唑醇)高效液相色譜圖(圖1)。

圖1 30%啶氧菌酯.戊唑醇懸浮劑高效液相色譜圖

2 試驗(yàn)方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 稱取啶氧菌酯標(biāo)樣0.05 g和戊唑醇標(biāo)樣0.10 g(精確到0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇超聲振蕩5 min使樣品溶解，恢復(fù)至室溫后用甲醇定容，搖勻；再用移液管準(zhǔn)確吸取5 mL至50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋定容，搖勻，備用。

2.2 試樣溶液配制 稱取0.33 g(精確到0.000 2 g)樣品，置于50 mL容量瓶中，加入適量甲醇超聲振蕩5 min使樣品溶解，恢復(fù)至室溫后用甲醇定容，搖勻；再用移液管準(zhǔn)確吸取5 mL至50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋定容，搖勻，用0.45 μm濾膜過濾，濾液備用。

2.3 試樣的測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值的重復(fù)性，待相鄰2針的響應(yīng)值變化<1.5%后，按照標(biāo)樣溶液，試樣溶液，試樣溶液，標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

2.4 試樣中有效含量的計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的峰面積分別進(jìn)行平均，試樣中啶氧菌酯(戊唑醇)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)分別按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：

A1—標(biāo)樣溶液中啶氧菌酯(戊唑醇)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中啶氧菌酯(戊唑醇)峰面積的平均值；

m1—啶氧菌酯(戊唑醇)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2—試樣的質(zhì)量，g；

P—標(biāo)樣中啶氧菌酯(戊唑醇)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 溶劑的選擇 根據(jù)兩種待測(cè)物質(zhì)的溶解度性質(zhì)，選擇甲醇作為溶劑。

3.2 流動(dòng)相和檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 通過二極管陣列檢測(cè)器對(duì)啶氧菌酯標(biāo)樣和戊唑醇標(biāo)樣進(jìn)行200～800 nm范圍內(nèi)的吸收光譜掃描(圖2～3)，由光譜信息(圖2～3)并結(jié)合分析中助劑雜質(zhì)干擾因素(圖4)，選定檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。在甲醇、水中調(diào)節(jié)比例，將啶氧菌酯和戊唑醇進(jìn)行有效分離，同時(shí)避免助劑和雜質(zhì)干擾，最后確定為甲醇∶水=75∶25作為流動(dòng)相，在此條件下對(duì)30%啶氧菌酯·戊唑醇懸浮劑中啶氧菌酯、戊唑醇峰純度掃描，30%啶氧菌酯·戊唑醇懸浮劑中啶氧菌酯、戊唑醇的峰純度均>99.9%，30%啶氧菌酯·戊唑醇懸浮劑中啶氧菌酯、戊唑醇有效成分出峰位置無明顯物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。

圖2 30%啶氧菌酯·戊唑醇懸浮劑中啶氧菌酯HPLC-DAD特異性掃描圖

圖3 30%啶氧菌酯·戊唑醇懸浮劑中戊唑醇HPLC-DAD特異性掃描圖

圖4 30%啶氧菌酯·戊唑醇懸浮劑制劑空白圖

3.3 分析方法的線性相關(guān)試驗(yàn) 準(zhǔn)確配制一系列不同濃度的啶氧菌酯和戊唑醇標(biāo)樣溶液，然后分別按本標(biāo)準(zhǔn)中2.3測(cè)定步驟進(jìn)行分析檢測(cè)，分別以啶氧菌酯和戊唑醇的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，啶氧菌酯和戊唑醇的峰面積為縱坐標(biāo)，計(jì)算一元線性回歸方程。線性相關(guān)性測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)(表1)。

表1 分析方法的線性線性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

啶氧菌酯一元線性回歸方程：y=74.880 38x+0.022 76，相關(guān)系數(shù)：R=0.999 97。

戊唑醇一元線性回歸方程：y=39.835 31x+0.083 70，相關(guān)系數(shù)：R=0.999 92。

3.4 分析方法的精密度相關(guān)試 任取一批30%啶氧菌酯·戊唑醇懸浮劑，按本標(biāo)準(zhǔn)中2.3測(cè)定步驟連續(xù)測(cè)定啶氧菌酯、戊唑醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)10次，分別計(jì)算其平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、變異系數(shù)。精密度測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)(表2)。

表2 分析方法的精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

從啶氧菌酯、戊唑醇精密度測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果中可以看出，啶氧菌酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01%，< Horwitz公式修正值1.904 6，變異系數(shù)為0.14%，戊唑醇的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.02%，

3.5 分析方法的準(zhǔn)確度相關(guān)試 選取已知含量的30%啶氧菌酯.戊唑醇懸浮劑樣品，準(zhǔn)確稱取5份，并分別加入定量的啶氧菌酯、戊唑醇標(biāo)樣，然后按2.3測(cè)定步驟測(cè)定啶氧菌酯、戊唑醇標(biāo)樣的加入量，同理論值進(jìn)行比較，計(jì)算回收率。準(zhǔn)確度測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù)(表3)。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

按照本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)，啶氧菌酯回收率在99.42%～100.35%之間，平均回收率為99.96%，戊唑醇回收率在99.75%～100.17%之間，平均回收率為100.01%。

4 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本文建立高效液相色譜分析方法能對(duì)30%啶氧菌酯·戊唑醇懸浮劑中有效成分進(jìn)行分離測(cè)定，且具有良好的線性、精密度和準(zhǔn)確度，操作簡(jiǎn)便，符合農(nóng)藥產(chǎn)品的質(zhì)量分析要求，適用于產(chǎn)品的質(zhì)量檢測(cè)和控制，可以作為啶氧菌酯和戊唑醇混配制劑的分析方法。