張 璇，閆 征

(山西省檢驗(yàn)檢測(cè)中心，食品藥品安全防控山西省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山西 太原 030025)

甲奈威、滅多威、異丙威、抗蚜威、克百威(3-羥基克百威)、涕滅威(涕滅威砜、涕滅威亞砜)是廣譜類殺蟲(chóng)劑，在蘋(píng)果的栽培種植過(guò)程中也普遍使用，已有的液相色譜檢測(cè)方法因其干擾強(qiáng)、前處理過(guò)程復(fù)雜，假陽(yáng)性結(jié)果時(shí)有發(fā)生，所以本文采取提取液中加入無(wú)水MgSO4，NaCl，檸檬酸鈉后振搖離心，上清液中加入無(wú)水MgSO4和PSA，繼續(xù)振搖離心，上清液過(guò)膜后使用液質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)的方法，大大降低了蘋(píng)果基質(zhì)的干擾性，節(jié)約前處理試劑使用量，縮短前處理和檢測(cè)時(shí)間，提高準(zhǔn)確率。

1 材料與方法

1.1 前處理材料

1.1.1 樣品來(lái)源 運(yùn)城市、臨汾市、晉中市的蘋(píng)果生產(chǎn)基地。

1.1.2 試劑與標(biāo)準(zhǔn)品 乙腈、甲醇(迪馬科技，色譜純)，PTFE0.22 μm濾膜(Agela Technologies)，提取鹽包均質(zhì)子(安捷倫科技～5982-5650CH)，凈化鹽包(安捷倫科技～5982-5056)，甲奈威、滅多威、異丙威、抗蚜威、克百威(3-羥基克百威)、涕滅威(涕滅威砜、涕滅威亞砜)，濃度均為1 000 mg/L(天津環(huán)境監(jiān)測(cè)中心)。

1.1.3 主要儀器 Agilent1290-6470液質(zhì)聯(lián)用儀；TP-2101電子天平；TKA MS3旋渦混勻器；低速離心機(jī)SC-3612。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 提取 稱取10.00 g試樣放入50 mL離心管中，加入一顆均質(zhì)子和一個(gè)提取鹽包，再加入10.0 mL乙腈，劇烈振搖1 min，放入離心機(jī)用4 200 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min。

1.2.2 凈化 從50 mL離心管中吸取6.0 mL上清液，加入到10 mL離心管中，離心管中加入凈化鹽包，渦旋1 min后用4 200 r/min離心5 min，離心后移取上清液用0.2 μm濾膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確移取1.00 mL甲奈威、滅多威、異丙威、抗蚜威、克百威(3-羥基克百威)、涕滅威(涕滅威砜、涕滅威亞砜)單個(gè)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，用甲醇做溶劑，配制成100 mg/L的農(nóng)藥單個(gè)儲(chǔ)備液，然后繼續(xù)準(zhǔn)確移取1.00 mL 9種農(nóng)藥儲(chǔ)備液，用甲醇做溶劑，配制成10 mg/L的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(儲(chǔ)存在-16℃冰箱中)，上機(jī)前，用初始流動(dòng)相將10 mg/L的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液依次稀釋為5、10、20、50、100、200 μg/L的混合工作液。

1.3 儀器條件

1.3.1 液相色譜條件 色譜柱：C18柱100×2.1 mm，填料細(xì)度1.8 um；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：1.0 uL；溶劑A：0.1%甲酸-5 mmol/L乙酸銨的水溶液；溶劑B：甲醇。

時(shí)間A(%)B(%)μL(min)0.009010300.01.009010300.06.00298300.08.00298300.08.109010300.013.009010300.0

1.3.2 質(zhì)譜條件 電離方式：電噴霧電離(ESI)；掃描方式：正離子掃描；檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；離子源參數(shù)參考條件：毛細(xì)管電壓：3500 V，離子傳輸毛細(xì)管溫度：350℃，載氣溫度：280℃，載氣流量：8 L/min，氮?dú)饬髁浚?0 psi，鞘氣溫度：330℃，鞘氣流量：11 L/min。

表1 9種農(nóng)藥的母離子、子離子、源內(nèi)碎裂電壓、碰撞能量、碰撞池加速電壓

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將配制好的0.005、0.01等一系列的6個(gè)濃度點(diǎn)的工作使用液依據(jù)1.3章的儀器條件，以質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)做工作標(biāo)準(zhǔn)曲線，每個(gè)濃度5次重復(fù)。

1.5 回收率和精密度的測(cè)定 在空白蘋(píng)果樣品中分別添加5、10、20 μg/kg的3個(gè)水平的9種農(nóng)藥的混合工作溶液，每個(gè)水平重復(fù)7次，按1.3的儀器條件測(cè)定回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，(表2)。

表2 9種農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)、定量限、回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=7)

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇 依據(jù)極性的大小和相似相溶的原則，選擇丙酮、甲醇、乙酸乙酯、乙腈對(duì)樣品進(jìn)行提取。丙酮、甲醇和乙酸乙酯可以提取更多的色素。使用乙腈提取，成本低，回收率滿意。

2.2 凈化條件的選擇 現(xiàn)行的凈化方法是吸附劑(PSA/C18/GCB)，查閱相關(guān)資料和進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，900 mg硫酸鎂和150 mg PSA組合的凈化效果優(yōu)而且吸附農(nóng)藥少，回收率滿意。

2.3 質(zhì)譜條件優(yōu)化 根據(jù)9種農(nóng)藥的化學(xué)性質(zhì)和分子量等在SRM模式下對(duì)電噴霧電壓、離子源溫度、鞘氣壓力、輔助氣流速等質(zhì)譜條件進(jìn)行優(yōu)化。得到特征子離子信息，選擇相對(duì)豐度較高的兩個(gè)子離子，對(duì)碰撞能量、電子管透鏡電壓進(jìn)行優(yōu)化。

2.4 液相色譜條件優(yōu)化 流動(dòng)相加入0.1%甲酸和中性的乙酸銨緩沖鹽，加入甲酸能提高離子化效率，當(dāng)乙酸銨濃度為5 mmol/L，甲酸濃度為0.1%時(shí)七種農(nóng)藥的的峰形和保留時(shí)間均較好，響應(yīng)也較高。且甲醇-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸銨)配制簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、對(duì)環(huán)境污染小，綜合考慮選擇甲醇-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸銨)作為流動(dòng)相。

2.5 線性方程、檢出限和定量限 用初始流動(dòng)相作為9種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，依次稀釋為5、10、20、50、100、200 μg/L一系列6個(gè)濃度點(diǎn)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量。9種農(nóng)藥的6個(gè)濃度與峰面積有良好的線性關(guān)系。在最低添加濃度5 μg/kg下，回收率滿意，所以這9種農(nóng)藥的線性方程、定量限(表2)。

2.6 方法的回收率和精密度 結(jié)果表明，在5～20 μg/kg 3個(gè)添加水平下，平均回收率為88.9%～94.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.4%～9.3%，定量限為0.005 mg/kg，說(shuō)明本方法靈敏度高，穩(wěn)定性好，可作為蘋(píng)果中9種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢測(cè)方法。圖1為標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖，圖2為樣品添加譜圖，圖3為空白樣品譜圖。

2.7 計(jì)算公式

式中：w：試樣中農(nóng)藥殘留量，mg/kg；

C：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mg/L；

A1：試樣溶液的峰面積；

A：標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積；

V：加入溶劑體積，mL；

m：樣本質(zhì)量，g。

3 實(shí)驗(yàn)譜圖

圖1 標(biāo)樣譜圖

圖2 蘋(píng)果添加譜圖

圖3 蘋(píng)果空白譜圖