楊 東，畢建云，劉媛媛

（1. 濰坊市益都中心醫(yī)院，山東 濰坊 262500；2. 山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 2503553）

早在五代的《日華子本草》中就有蛋黃炒取油和粉敷頭瘡的記載。明李時珍在《本草綱目》中也引用了眾多的蛋黃油驗(yàn)方。劉禹錫《傳信方》用亂發(fā)雞子膏治兒童熱瘡?！都?yàn)方》記載用蛋黃油治湯火燒瘡等[1]。現(xiàn)臨床外涂常用于治療濕疹、燒燙傷、皮膚瘙癢、口腔潰瘍等疾病[2]，內(nèi)服可用于治療腹瀉、高血脂、胃潰瘍、慢性胃炎等疾病[3]。蛋黃油的制備方法在傳統(tǒng)干餾法基礎(chǔ)上，逐漸衍生了醇提法、超臨界提取法、烘焙法、減壓蒸餾法等[4-5]。本研究采用傳統(tǒng)干餾法制備蛋黃油，本著干凈實(shí)用、防腐耐用的原則，將蛋黃油制備成軟膏劑[6]。并采用Box-Behnken設(shè)計-響應(yīng)面法（BBD-RSM）分別優(yōu)選出水包油型（O/W型）和油包水型（W/O型）蛋黃油軟膏的最佳成型工藝，并制備3批小試產(chǎn)品，驗(yàn)證兩種軟膏制備工藝的可行性。

1 材料與試劑

1.1 儀器

BS-202型雙目生物顯微鏡（上海長方光學(xué)儀器有限公司）；TDL80-2B型臺式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；HH-2型兩孔水浴鍋（江蘇東鵬儀器制造有限公司）；JY1002電子天平（上海天美天平儀器有限公司）。

1.2 藥物與試劑

雞蛋（濟(jì)南啟動科貿(mào)有限公司）；硬脂酸（批號：20181110，天津市鼎盛鑫化工有限公司）；單硬脂酸甘油酯（批號：20170801，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；月桂氮酮（批號：20181028，鄭州市津北化工有限公司）；尼泊金乙酯（批號：20150110，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；甘油（批號：20090930，上海運(yùn)佳黃浦制藥有限公司）；三乙醇胺（批號：20160722，北京高純科技有限公司）；液狀石蠟（批號：20161110，吉林市吉化江城油脂有限責(zé)任公司）；醫(yī)用凡士林（批號：20180501，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；司盤-40（上海麥克林生化科技有限公司）；羊毛脂（批號：20150630，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；十二烷基硫酸鈉（批號：160701，上海展云化工有限公司）；十八醇（批號：20170710，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；吐溫-80（批號：20120615，天津廣成投資集團(tuán)有限公司）；蓖麻油（批號：20150108，天津富宇精細(xì)化工有限公司）；乳化劑OP（批號：20120805，天津福晨化學(xué)試劑有限公司）；切片石蠟（批號：20180330，上海市標(biāo)本模型廠）；檸檬味香精E-14547（批號：1121547，云南諧和實(shí)業(yè)有限公司）；蜂蠟（河南譽(yù)洋蠟業(yè)有限公司）；硼砂（天津市北辰方正試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 蛋黃油的提取

取5～7個熟雞蛋黃稱重，記為m1；將蛋黃置于柄皿內(nèi)搗碎，文火加熱使蛋黃均勻受熱，除盡水分后武火熬制并不斷攪拌防止蛋黃燒焦；約20 min后產(chǎn)生白煙，蛋黃顏色變深并有香味溢出；約40 min時白煙最濃，蛋黃變?yōu)楹谏砀酄?，有黑褐色蛋黃油流出，同時散發(fā)出腥臭氣味；待蛋黃全部變黑后停止加熱，冷卻至室溫后將蛋黃油濾出[7]，稱重記為m2；放入玻璃瓶中密封，置于干燥陰涼處保存。按下式計算出油率（Y）[8]。

干餾法提取蛋黃油的平均出油率為21.54 %。

2.2 蛋黃油軟膏的制備

2.2.1 基質(zhì)篩選標(biāo)準(zhǔn) 軟膏劑的主要組成部分是藥物和基質(zhì)[9]，其中軟膏劑的成型和藥效的發(fā)揮與基質(zhì)的種類密切相關(guān)。本研究從O/W型和W/O型兩種軟膏劑基質(zhì)入手，分別從顏色、硬度、皮膚涂抹均勻性、顯微鏡觀察、離心、耐寒試驗(yàn)、耐熱試驗(yàn)7個方面對軟膏進(jìn)行綜合評分，選出最優(yōu)方案[10]。

綜合評分標(biāo)準(zhǔn)具體見下表[11-13]（單項(xiàng)滿分10分，總分70分）。

表1 綜合評分標(biāo)準(zhǔn)

2.2.2 O/W型基質(zhì)的篩選 經(jīng)查閱文獻(xiàn)，篩選出7種不同的O/W型基質(zhì)處方[14-15]。取油相試劑，置于潔凈干燥燒杯中，置于80 ℃恒溫水浴鍋中加熱熔融；另取一潔凈干燥燒杯，加入水相試劑，置于80 ℃恒溫水浴鍋中；待兩相均熔融后，先取少量水相迅速倒入油相中，邊加邊攪拌至形成乳白色初乳；再將剩余的水相全部倒入油相中，邊加邊攪拌至形成均勻稠膏狀O/W型基質(zhì)；然后再按總基質(zhì)用量的15 %加入定量蛋黃油，攪拌均勻后靜置，冷卻至室溫，得到棕褐色軟膏[16]。具體處方[17]及綜合分?jǐn)?shù)見表2。

表2 O/W型基質(zhì)處方篩選

由表2可知，處方三脂肪酸硫酸鈉法得分最高，為59分，制備的軟膏各項(xiàng)考察因素均比其他其他處方效果好，故選用該處方做后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2.3 W/O型基質(zhì)的制備 處方見表3。取油相試劑與蛋黃油合并，置于潔凈干燥燒杯中，置于80 ℃恒溫水浴鍋中加熱熔融；另取一潔凈干燥燒杯，加入水相試劑，置于80 ℃恒溫水浴鍋中；待兩相均熔融后，先取少量油相迅速倒入水相中，邊加邊攪拌至形成乳白色初乳；再將剩余的油相全部倒入水相中，邊加邊攪拌至形成均勻稠膏狀W/O型基質(zhì)[18]。

表3 W/O型基質(zhì)處方初選

2.3 BBD-RSM法優(yōu)選O/W型軟膏最佳工藝

2.3.1 因素水平表的建立 根據(jù)2.2.2項(xiàng)下所得最優(yōu)處方，以十八醇用量（A）、白凡士林用量（B）、十二烷基硫酸鈉用量（C）、甘油用量（D）為考察因素[19]，以綜合評分（R）為評價指標(biāo)，進(jìn)行四因素三水平星點(diǎn)設(shè)計，建立因素水平表[20]，見表4。

表4 O/W型軟膏星點(diǎn)設(shè)計-響應(yīng)面法因素及水平

2.3.2 星點(diǎn)設(shè)計-響應(yīng)面法試驗(yàn) 采用Design-Expert 11軟件隨機(jī)安排試驗(yàn)，方案及結(jié)果見表5。

表5 星點(diǎn)設(shè)計-響應(yīng)面法試驗(yàn)設(shè)計和結(jié)果

2.3.3 模型擬合 應(yīng)用Design-Expert 11軟件，根據(jù)表4進(jìn)行擬合[21]，得到綜合評分（R）的二次多項(xiàng)式回歸模型。

2.3.4 方差分析 結(jié)果見6。

表6 O/W型二次多項(xiàng)式模型的方差分析

由表6可見，P＜0.05表示總模型方差是顯著的，模型擬合程度較高，較好地反映了綜合評分與十八醇、白凡士林、十二烷基硫酸鈉、甘油用量之間的關(guān)系[22]，各考察因素對綜合評分的影響程度A＞C＞B＞D，十八醇用量對該制劑的成型性影響顯著；失擬項(xiàng)不顯著（P=0.0686＞0.05），說明實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)良好，綜合評分誤差較小，該模型可用于對O/W型蛋黃油軟膏制備基質(zhì)優(yōu)選進(jìn)行分析和預(yù)測。

2.3.5 工藝優(yōu)化與預(yù)測 根據(jù)二次多項(xiàng)式回歸方程，應(yīng)用Design-Expert 11軟件繪制響應(yīng)值與4個因素的三維響應(yīng)面圖（見圖1），通過響應(yīng)面圖可直觀看出4個因素對綜合評分的影響及變化趨勢[23]。此次試驗(yàn)結(jié)果的最佳落點(diǎn)，在試驗(yàn)考察區(qū)域內(nèi)，結(jié)合軟件給出的最佳預(yù)測點(diǎn)，確定最佳制備處方為：十八醇2.94 g，白凡士林2.59 g，十二烷基硫酸鈉0.20 g，甘油1.24 g，蒸餾水10 g，蛋黃油2.55 g。取十八醇、白凡士林、蛋黃油，置于潔凈干燥燒杯中，置于80 ℃恒溫水浴鍋中加熱熔融為油相；另取一潔凈干燥燒杯，加入十二烷基硫酸鈉、甘油、蒸餾水，放于80 ℃恒溫水浴鍋中；待兩相均熔融后，先取少量水相迅速倒入油相中，邊加邊攪拌至形成乳白色初乳；再將剩余的水相全部倒入油相中，邊加邊攪拌至形成均勻稠膏狀O/W型蛋黃油軟膏，此時的理論綜合分?jǐn)?shù)為60.23。

圖1 綜合評分與O/W型基質(zhì)配比的三維響應(yīng)面圖

2.4 BBD-RSM法優(yōu)選W/O型軟膏最佳工藝

2.4.1 因素水平表的建立 根據(jù)2.2.3項(xiàng)下W/O型處方，以液狀石蠟用量（A）、硬脂酸用量（B）、蜂蠟用量（C）、硼砂用量（D）為考察因素，以綜合評分（R）為評價指標(biāo)，進(jìn)行四因素三水平星點(diǎn)設(shè)計，建立因素水平表，見表7。

表7 W/O型軟膏星點(diǎn)設(shè)計-響應(yīng)面法因素及水平

2.4.2 星點(diǎn)設(shè)計-響應(yīng)面法試驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果 采用Design-Expert 11軟件隨機(jī)安排試驗(yàn)，方案及結(jié)果見表8。

表8 星點(diǎn)設(shè)計-響應(yīng)面法試驗(yàn)設(shè)計和結(jié)果

2.4.3 模型擬合 應(yīng)用Design-Expert 11軟件，根據(jù)表7進(jìn)行擬合，得到綜合評分（R）的二次多項(xiàng)式回歸模型。

2.4.4 方差分析 結(jié)果見表9。

表9 W/O型二次多項(xiàng)式模型的方差分析

由表9可見，P＜0.05表示總模型方差是顯著的，模型擬合程度較高，較好地反映了綜合評分與液狀石蠟、硬脂酸、蜂蠟、硼砂用量之間的關(guān)系，各考察因素對綜合評分的影響程度C＞D＞A＞B，蜂蠟用量對該制劑的成型性影響為顯著；失擬項(xiàng)不顯著（P=0.0676＞0.05），說明實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)良好，綜合評分誤差較小，所以該模型可用于對W/O型蛋黃油軟膏制備基質(zhì)優(yōu)選的分析和預(yù)測。

2.4.5 工藝優(yōu)化與預(yù)測 根據(jù)二次多項(xiàng)式，應(yīng)用Design-Expert 11回歸方程繪制各響應(yīng)值與4個因素的三維響應(yīng)面圖（見圖2），通過響應(yīng)面圖可直觀看出4個因素對綜合評分的影響及變化趨勢。此次試驗(yàn)結(jié)果的最佳落點(diǎn)，在試驗(yàn)考察區(qū)域內(nèi)，結(jié)合軟件給出的最佳預(yù)測點(diǎn)，從而確定最佳工藝為：液狀石蠟3.87 g，硬脂酸0.25 g，蜂蠟1.62 g，硼砂0.09 g，水是1.65 g，石蠟1.3 g，蛋黃油1.32 g，按2.2.3項(xiàng)下制備工藝制得W/O型蛋黃油軟膏，此時的理論綜合分?jǐn)?shù)為59.71。

圖2 綜合評分與W/O型基質(zhì)配比的三維響應(yīng)面圖

2.5 蛋黃油軟膏成型工藝處方的驗(yàn)證

根據(jù)2.3.5和2.4.5項(xiàng)下兩種最佳工藝分別制備3批蛋黃油軟膏（O/W型軟膏批號為：20223281，20223282，20223283；W/O型軟膏批號為：20223291，20223292，20223293），對其進(jìn)行初步質(zhì)量檢查，結(jié)果見表10、表11。按下式計算驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中預(yù)測值與實(shí)際得分的偏差，如小于10 %，表明該回歸模型真實(shí)可信，建立的數(shù)學(xué)模型具有良好的預(yù)測性，優(yōu)選的最佳成型工藝合理可行、穩(wěn)定可靠，篩選出的軟膏符合《中華人民共和國藥典》制劑通則項(xiàng)下軟膏劑的各項(xiàng)規(guī)定[24]。

表10 O/W型軟膏最佳成型工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表11 W/O型軟膏最佳成型工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

偏差（%）=|預(yù)測值-實(shí)測值|/預(yù)測值×100

由表10、表11可見，W/O與O/W型軟膏最佳成型工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)與預(yù)測值偏差均小于10 %。與W/O型軟膏相比，O/W型軟膏顏色較淺且沒有油膩感。顯微鏡下觀察，O/W型軟膏油滴較小，分布較均勻且密集；W/O型軟膏油滴較大，分布較為不均勻且比較稀疏，見圖3、圖4。

圖3 O/W型成品顯微觀察

圖4 W/O型成品顯微觀察

3 討論與結(jié)論

蛋黃油外用具有多種功效，制成O/W型軟膏可用于成人、嬰幼兒濕疹，制成W/O型軟膏可用于哺乳期乳頭皴裂、表皮增厚及角化等的軟化、抗菌等，因此本文考察了兩種蛋黃油類型軟膏的制備工藝。

干餾法為傳統(tǒng)的蛋黃油提取工藝。綜合評估不同工藝的操作效果、難度及實(shí)驗(yàn)室條件等因素，最終采用干餾法提取蛋黃油。基質(zhì)的制備過程受溫度的影響較大，制備過程中要嚴(yán)格控制溫度，防止基質(zhì)混合不均，同時混合過程中的攪拌方向、時間、力度均有影響。關(guān)于蛋黃油的用量，預(yù)實(shí)驗(yàn)時只加入了1 ml蛋黃油，雖能較充分地混合均勻，但顯微鏡下觀察油滴少且稀疏，主藥用量不足；后改為按基質(zhì)用量的30 %添加，此時蛋黃油與基質(zhì)無法混合均勻，出現(xiàn)明顯的油水分層，主藥用量嚴(yán)重超載；最后按基質(zhì)用量15 %左右添加蛋黃油，此時油水混合均勻，顯微鏡下油滴圓整、分布均勻，主藥用量適宜。所以最終選擇按基質(zhì)用量約15 %添加蛋黃油?？稍谥苽浠|(zhì)過程中向水相中加入適量檸檬香精進(jìn)行矯味。后續(xù)研究中還可采用動物實(shí)驗(yàn)對其處方及藥理作用進(jìn)行進(jìn)一步考察，為蛋黃油軟膏的深入研究及大規(guī)模生產(chǎn)提供參考。