王艷娟，李龍英，朱倩穎，李海燕，王 錦，周三云

（浙江圣兆藥物科技股份有限公司，浙江 杭州 310051）

注射用前列地爾干乳劑處方中含油酸鈉，其作為常用的藥用輔料，屬于一種陰離子表面活性劑，具有很強的乳化能力。注射劑中，表面活性劑的用量需進行嚴格控制。2020年版《中國藥典》[1]中采用氣相色譜法（面積歸一化法）檢測油酸鈉含量，也有文獻報道采用氣相色譜法測定藥用輔料[2]、食品[3-4]中油酸和亞油酸含量，但氣相色譜法均應經(jīng)甲酯化前處理，操作步驟繁瑣，且面積歸一化法定量也較粗略。且干乳劑中油酸鈉輔料含量較少，其他輔料成分較多，干擾較大，檢測分離要求高，因此不宜采用氣相色譜法。

采用文獻[5-9]或專利[10]報道的液相相色譜法來測定干乳劑中油酸鈉含量，難以達到分離檢測的要求。本文采用高效液相色譜（HPLC）法分離油酸與其他組分，按外標法測定油酸含量，依據(jù)油酸和油酸鈉分子量的關系，換算出干乳劑中油酸鈉的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

e2695高效液相色譜儀（美國Waters）；XP205分析天平（瑞士Mettler Toledo）；ML204/02分析天平（瑞士Mettler Toledo）；SEVEN EXCELLER多參數(shù)測試儀（瑞士Mettler Toledo）；SHB-B95A真空泵（鄭州長城）。

1.2 試藥

注射用干乳劑（自制，批號：A170202）；注射用空白干乳劑（自制）；磷酸二氫鉀（AR，國藥集團）；磷酸（AR，國藥集團）；乙腈（HPLC，美國TEDIA）；無水乙醇（HPLC，美國TEDIA）；超純水（美國Millipore）；油酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111621-201205，0.2 ml/支，含量：99.6 %）；參比制劑（批號：17010330，重慶藥友）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB C8（4.6 mm×150 mm，5 μm）；柱溫：40 ℃；流速：1.0 ml/min；紫外檢測器，檢測波長：210 nm；進樣量：60 μl；流動相A：0.02 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（pH 2.0），流動相B：乙腈，按表1進行梯度洗脫。

表1 梯度洗脫程序

2.2 溶液制備

2.2.1 稀釋劑（60 %乙醇） 量取乙醇600 ml，用純化水稀釋至1000 ml，混勻，超聲，即得。

2.2.2 對照品溶液 取油酸對照品13 mg，精密稱定，置于20 ml量瓶中，用稀釋劑溶解并定容，搖勻，即得儲備液；精密移取儲備液2.0 ml于20 ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得油酸濃度為0.06 mg/ml的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液 精密稱取注射用干乳劑250 mg于5.0 ml量瓶中，加2.0 ml水，使其完全復乳，再加乙醇定容，振搖2.0 min，超聲2.0 min，使其完全破乳，室溫靜置30 min，搖勻，取適量溶液，離心（15 000 r/min，15 min），取上清，即得供試品溶液。

2.2.4 基質溶液（空白輔料樣品溶液） 精密稱取不含油酸鈉的干乳劑（不含油酸鈉，其他組分均按制劑處方比例投料）250 mg于5 ml量瓶中，加水2.0 ml，使其完全復乳，再加乙醇定容，振搖2.0 min，超聲2.0 min，使其完全破乳，室溫靜置30 min，搖勻，取適量溶液離心（15 000 r/min，15 min），取上清，即得空白輔料樣品溶液。

2.3 專屬性試驗

取稀釋劑、空白輔料樣品溶液、供試品溶液、對照品溶液分別進樣，記錄色譜圖，結果，稀釋劑與空白輔料樣品溶液對供試品測定均無干擾，方法專屬性好，色譜圖見圖1。

圖1 專屬性考察色譜圖

2.4 檢測限和定量限

取2.2.2項下對照品儲備液，逐步稀釋后得到檢測限和定量限溶液，油酸濃度為0.0049 mg/ml，信噪比（S/N）≥3.0；油酸濃度為0.0131 mg/ml，信噪比（S/N）≥10，經(jīng)換算后，方法油酸鈉檢測限、定量限分別為0.005，0.014 mg/ml。

2.5 線性試驗

按2.2.2項下對照品溶液配制方法，精密稱取油酸對照品13.13 mg于20 ml量瓶中，加稀釋劑溶解并定容，搖勻，即得對照品儲備液，分別精密移取對照品儲備液1.0，1.0，2.0，3.0，4.0 ml于50，20，20，20，20 ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得系列線性溶液，濃度分別為0.0131，0.0327，0.0653，0.0981，0.1308 mg/ml。

取系列線性溶液，進樣分析，記錄色譜圖。以峰面積Y為縱坐標，濃度X（mg/ml）為橫坐標，進行線性回歸，線性方程：Y=2 192 733.11X+30 096.31，R2=1.0000，表明濃度在0.01～0.13 mg/ml范圍內(nèi)，峰面積和濃度線性關系良好。

2.6 精密度（重復性和中間精密度）試驗

按2.2.3項下方法配制供試品溶液，平行配制6份，分別進樣測定，油酸鈉含量結果的RSD為2.2 %（n=6）；由不同人員在不同日期，取相同批次的樣品，按2.2.3項下方法配制供試品溶液，平行配制6份，用另一臺高效液相色譜儀進樣測定，油酸鈉含量的RSD為2.6 %（n=6），12份供試品溶液的油酸鈉含量的RSD為2.3 %（n=12），表明該方法精密度良好。

2.7 準確度（回收率）試驗

按2.2.4項下方法配制空白輔料溶液，加入對照品溶液，考察濃度等級50 %，100 %，150 %的回收率，各濃度等級平行3份，計算回收率、平均回收率及RSD（n=9），結果見表1。油酸的回收率在99.53 %～103.60 %范圍內(nèi)，平均回收率為101.08 %，RSD為1.4 %（n=9），表明該方法準確度良好。

表2 回收率試驗（n=9）

2.8 穩(wěn)定性試驗

取2.2.2、2.2.3項下溶液，冷藏放置（2～8 ℃），分別在0，1，2，3 d進行分析，考察對照品和供試品溶液的穩(wěn)定性。結果3 d內(nèi)樣品中油酸鈉含量與0 d相比，均在95 %～105 %范圍內(nèi)，表明冷藏條件下放置3 d，溶液穩(wěn)定性良好。

2.9 耐用性考察

在其他條件不變的情況下，考察了流速±0.1 ml/min、柱溫±5 ℃、波長±2 nm、流動相pH±0.5、不同品牌的色譜柱，分別檢測供試品溶液，油酸鈉的含量變化在95 %～105 %范圍內(nèi)，表明方法耐用性良好。

2.10 樣品的測定

取自研品（批號：A170202）、參比制劑（批號：17010330），按2.2.3項下方法配制供試品溶液，分別平行配制3份，進樣測定，記錄色譜圖，采用外標法計算供試品中油酸鈉的含量，結果見表3。

表3 樣品檢測結果（n=3）

3 結論

本文建立了一種通用性更強的HPLC方法來測定前列地爾干乳劑中油酸鈉的含量，樣品處理簡單，操作便捷，改進了國家藥典標準中樣品處理方法，也提高了定量的準確性。

結果分析表明，此方法專屬性強、準確度高、精密度良好，適用于前列地爾干乳劑中油酸鈉含量的準確測定，也適用于油酸鈉輔料中油酸含量的測定，對其他藥物或輔料中油酸、其他脂肪酸含量的測定具有重要參考價值。