劉亞方，張治云，郭新艷，王 靜，王 帆，楊 琪

（山東省藥學(xué)科學(xué)院 山東省皮膚與黏膜給藥工程技術(shù)研究中心，山東 濟(jì)南 250101）

甲苯磺酸拉帕替尼是由葛蘭素史克公司開發(fā)的一種小分子的可逆性酪氨酸激酶抑制劑（TKI），于2007年在美國(guó)率先上市，用于聯(lián)合用藥：合用卡培他濱治療過度表達(dá)2型人表皮受體（HER2）的晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌，合用來曲唑治療過度表達(dá)HER2、激素受體陽性的轉(zhuǎn)移性乳腺癌絕經(jīng)期患者[1-3]。藥物顆粒的大小及其粒度分布情況對(duì)藥物的安全性、有效性和穩(wěn)定性具有重要影響[3]。甲苯磺酸拉帕替尼在水中幾乎不溶，其粒度直接影響到制劑的溶出速度，從而影響藥物制劑的質(zhì)量和療效，因此粒度為其質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一。有效的粒度檢測(cè)方法對(duì)于粒度控制分析尤為關(guān)鍵，故對(duì)其粒度進(jìn)行方法篩選及驗(yàn)證。

目前，在國(guó)內(nèi)尚未見有甲苯磺酸拉帕替尼原料藥粒度測(cè)定方法的文獻(xiàn)報(bào)道。根據(jù)中國(guó)藥典2020年版四部通則0982粒度和粒度分布測(cè)定法[4]的規(guī)定，本文采用第三法光散射法，運(yùn)用激光散射原理[5-6]，采用濕法測(cè)定甲苯磺酸拉帕替尼原料藥的粒度，該方法重復(fù)性好，易于操作，數(shù)值真實(shí)性強(qiáng)。原料藥粒度測(cè)定方法的建立，有助于在處方篩選前篩選出合理的原料藥粒徑，可在一定程度上簡(jiǎn)化處方篩選過程，進(jìn)一步完善了原料藥粒徑的研究，為生產(chǎn)出批間差異小、質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品增加了保障。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Malvern Mastersizer 2000型激光粒度分析儀，Hydro 2000MU型濕法進(jìn)樣器（英國(guó)Malvern公司）。

1.2 試藥

甲苯磺酸拉帕替尼（自制，測(cè)定前過60目篩，批號(hào)：20190901，20191008，20191103；含量：99.87 %，99.83 %，99.80 %）；十二烷基硫酸鈉（SDS，分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20181201）；曲拉通X-100（化學(xué)純，國(guó)藥集團(tuán)，批號(hào)：20180119）；六偏磷酸鈉（化學(xué)純，國(guó)藥集團(tuán)，批號(hào)：20180506）；水（純化水）。

2 方法與結(jié)果

2.1 參數(shù)的選擇及優(yōu)化

甲苯磺酸拉帕替尼在水中幾乎不溶，故首選濕法測(cè)定。以水為分散介質(zhì)時(shí)樣品不能很好地分散，故選擇增加合適的分散劑將供試品制成穩(wěn)定的混懸液后，加入含900 ml水的測(cè)量杯中進(jìn)行測(cè)定。儀器參數(shù)初步設(shè)定為：樣品折射率1.5；樣品吸收率1；分散介質(zhì)折射率1.33；遮光比8 %～20 %；超聲50 s；循環(huán)速度2000 r/min；測(cè)量次數(shù)5。在此基礎(chǔ)上，對(duì)各參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化及確定。

2.1.1 分散劑的選擇 粒徑分布測(cè)定過程中分別嘗試將六偏磷酸鈉、SDS、曲拉通配制成一定濃度的溶液作為分散劑，經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2 %六偏磷酸鈉溶液作為分散劑時(shí)，甲苯磺酸拉帕替尼漂浮在上層，無法均勻分散；采用2 %曲拉通和2 % SDS作為分散劑時(shí)，兩者均可將甲苯磺酸拉帕替尼分散，采用2 %曲拉通作為分散劑，樣品在測(cè)定過程中發(fā)生團(tuán)聚現(xiàn)象，遮光度顯著下降，而采用2%SDS時(shí)，樣品分散均勻，體系較穩(wěn)定，故最終選擇2%SDS作為分散劑。

2.1.2 分散劑的制備及用量考察 取SDS 2 g，加水100 ml，超聲溶解，搖勻， 0.45 μm濾膜過濾。稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，共3份，分別加入2 % SDS 1，2，4 ml，充分?jǐn)嚢韬螅尤牒?00 ml水的濕法進(jìn)樣器中，按2.1項(xiàng)下參數(shù)分別測(cè)定，不同用量分散劑的粒度分布測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 不同用量分散劑的考察結(jié)果（n=5）

結(jié)果表明，當(dāng)分散劑用量為1 ml時(shí)仍有部分顆粒團(tuán)聚，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏大；當(dāng)分散劑用量為2 ml時(shí)，分散效果較好，5 次測(cè)試RSD值最??；當(dāng)分散劑用量為4 ml時(shí)，分散效果較好，但可能由于產(chǎn)生的氣泡較多，遮光度不穩(wěn)定，5 次測(cè)試RSD變大，導(dǎo)致測(cè)量誤差增大。綜合比較，選擇分散劑用量為2 ml。

2.1.3 光學(xué)參數(shù)的考察 根據(jù)激光散射粒度分析儀的測(cè)定原理，在測(cè)定方法建立時(shí)，需設(shè)置3個(gè)光學(xué)參數(shù)，分別為分散介質(zhì)折射率、樣品吸收率和樣品折射率[7]。分散介質(zhì)采用2 % SDS水溶液，折射率為1.33；甲苯磺酸拉帕替尼為亮黃色結(jié)晶性粉末，吸收率設(shè)定為1，折射率為1.5。稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，共6份，各加入2 % SDS 2 ml，充分?jǐn)嚢韬笞鳛楣┰嚻啡芤?，加入?00 ml水的濕法進(jìn)樣器中，吸收率分別設(shè)定為0.01，0.1，1，或?qū)⒄凵渎史謩e設(shè)定為1.45，1.5，1.55，其他參數(shù)不變，粒度測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 光學(xué)參數(shù)考察結(jié)果（n=5）

結(jié)果表明，綜合d(0.1)、d(0.5)、d(0.9)值的RSD及平均殘差，當(dāng)折射率為1.5，吸收率為1 時(shí)，d(0.1)、d(0.5)、d(0.9)值的RSD及平均殘差最小，故折射率選定為1.5，吸收率選定為1。

2.1.4 超聲參數(shù)的考察 稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，共3份，各加入2% SDS 2 ml，充分?jǐn)嚢韬蠹尤牒?00 ml水的濕法進(jìn)樣器中，以超聲頻率2000 Hz分別超聲45，50，55 s后進(jìn)行測(cè)定，其他參數(shù)不變，每份樣品連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)定數(shù)據(jù)見表3。

表3 超聲參數(shù)的考察結(jié)果（n=5）

結(jié)果顯示，超聲時(shí)間在45～55 s內(nèi)樣品粒度測(cè)定的結(jié)果及RSD無明顯差異，本文選擇超聲時(shí)間50 s。

2.1.5 攪拌器循環(huán)速度的考察 稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，共3份，各加入2% SDS 2 ml，充分?jǐn)嚢韬蠹尤牒?00 ml水的濕法進(jìn)樣器中，分別以循環(huán)速度1800，2000，2200 r/min平衡3 min，其他參數(shù)不變，分別進(jìn)行測(cè)定，每份樣品連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)定數(shù)據(jù)見表4。

表4 不同循環(huán)速度的考察結(jié)果（n=5）

結(jié)果顯示，不同循環(huán)速度測(cè)定的結(jié)果及RSD基本一致，為保證攪拌速度以使物質(zhì)不產(chǎn)生沉降，同時(shí)又避免攪動(dòng)過大產(chǎn)生氣泡干擾測(cè)定結(jié)果，選擇2000 r/min的循環(huán)速度。

2.2 測(cè)定方法的確定

稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，加分散劑（2% SDS） 2 ml，充分?jǐn)嚢韬笞鳛楣┰嚻啡芤?，加入?00 ml水的濕法進(jìn)樣器中，設(shè)定樣品折射率為1.5，樣品吸收率為1，分散介質(zhì)折射率為1.33，以循環(huán)速度2000 r/min平衡3 min，以超聲頻率2000 Hz超聲50 s后進(jìn)行測(cè)定，要求遮光比8 %～20 %，連續(xù)測(cè)定5次。粒度分布見圖1。

圖1 甲苯磺酸拉帕替尼原料藥的粒度分布

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，加分散劑（2% SDS）2 ml，充分?jǐn)嚢韬笞鳛楣┰嚻啡芤?，平行操?份，每份依法連續(xù)測(cè)定5次，記錄粒度分布曲線和測(cè)定結(jié)果，計(jì)算其平均值及RSD，結(jié)果見表5。

表5 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，6份樣品粒度測(cè)定d(0.1)，d(0.5)和d(0.9)值的RSD均符合要求，說明該方法的重復(fù)性良好。

2.3.2 中間精密度試驗(yàn) 不同日期，不同分析人員參考2.3.1重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下方法對(duì)同批次樣品進(jìn)行測(cè)定，記錄粒度分布曲線和測(cè)定結(jié)果，計(jì)算12份樣品平均值及RSD，結(jié)果見表6。

表6 中間精密度試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，12份樣品d(0.1)，d(0.5)和d(0.9)測(cè)定結(jié)果的RSD均符合要求，說明該方法的中間精密度良好。

2.3.3 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.3 g，加分散劑（2% SDS）2 ml，充分?jǐn)嚢韬笞鳛楣┰嚻啡芤海瑢⒐┰嚻啡芤河谑覝叵路胖?，分別于0，15，30，45，60，120 min依法測(cè)定，記錄粒度分布曲線和測(cè)定結(jié)果，計(jì)算其平均值及RSD。d(0.1)平均值為2.287 μm，RSD為2.89 %；d(0.5)平均值為13.568 μm，RSD為1.18 %；d(0.9)平均值為50.447 μm，RSD為1.36 %。結(jié)果表明，供試品溶液配制后，在室溫下放置120 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.4 耐用性試驗(yàn) 稱取甲苯磺酸拉帕替尼約0.24，0.3，0.36 g，分別加分散劑（2% SDS）2 ml，充分?jǐn)嚢韬笞鳛楣┰嚻啡芤海婪y(cè)定，記錄粒度分布曲線和測(cè)定結(jié)果，計(jì)算其平均值及RSD，結(jié)果見表7。

表7 耐用性試驗(yàn)的考察結(jié)果（n=5）

結(jié)果表明，當(dāng)樣品稱樣量在0.24～0.36 g范圍內(nèi)，改變樣品加入量，粒度分布結(jié)果基本一致，表明本方法具有良好的耐用性。

2.4 甲苯磺酸拉帕替尼粒度測(cè)定

取3批甲苯磺酸拉帕替尼原料藥，依法測(cè)定，記錄粒度分布曲線和測(cè)定結(jié)果，結(jié)果見表8。

表8 粒徑測(cè)定結(jié)果

3 討論

本研究經(jīng)一系列試驗(yàn)，建立了濕法激光散射測(cè)定甲苯磺酸拉帕替尼原料藥粒徑的方法。

3.1 分散劑的篩選

方法的建立過程中，分散劑的種類和用量是關(guān)鍵。研究中篩選了六偏磷酸鈉、SDS、曲拉通3種分散劑，發(fā)現(xiàn)SDS的分散效果最佳。用分散劑輔助樣品分散的過程中，選擇合適濃度的SDS能均勻分散樣品顆粒，但應(yīng)避免測(cè)定過程中產(chǎn)生氣泡影響測(cè)定結(jié)果。

3.2 超聲時(shí)間確定

水中易團(tuán)聚漂浮的粒子，需通過超聲輔助顆粒分散[8]。本品在粒度測(cè)定過程中發(fā)現(xiàn)，合適的超聲時(shí)間可使聚集狀態(tài)的粒子達(dá)到最佳分散狀態(tài)，超聲時(shí)間過長(zhǎng)，粒子會(huì)重新發(fā)生團(tuán)聚，所以最終確定超聲時(shí)間為50 s。

經(jīng)過對(duì)分散劑（SDS）的濃度、攪拌器的循環(huán)速度、超聲時(shí)間、樣品折射率及吸收率等參數(shù)的研究及方法學(xué)驗(yàn)證，最終建立此測(cè)定方法。該方法重復(fù)性好、精密度高、易于操作，可準(zhǔn)確測(cè)定甲苯磺酸拉帕替尼原料藥的粒度。