郭冬萌 吳玉卓

肝癌為臨床常見(jiàn)惡性腫瘤,其發(fā)病率與致死率較高,盡早確診,并采取手術(shù)治療,可有效阻止腫瘤持續(xù)增殖或侵襲,延長(zhǎng)患者生存時(shí)間[1-2]。然而肝癌發(fā)病早期缺乏典型癥狀,明確診斷較為困難,待出現(xiàn)肝區(qū)疼痛、乏力、持續(xù)發(fā)熱等癥狀時(shí)病情多已處于中晚期,錯(cuò)失最佳手術(shù)治療時(shí)機(jī),不利于預(yù)后[3-4]。因此,選擇一快速有效的檢測(cè)手段于早期及時(shí)診斷肝癌,指導(dǎo)臨床制定個(gè)體化的治療,對(duì)于改善患者預(yù)后具有重要意義。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(IncRNA)在多種腫瘤組織和體液內(nèi)均呈異常表達(dá),在腫瘤的診斷、預(yù)后評(píng)估中具有一定臨床意義,而HOX轉(zhuǎn)錄反義RNA(HOTAIR)為臨床近些年發(fā)現(xiàn)的具有反式調(diào)控作用的IncRNA[5-6]?；诖?本研究以100例肝癌患者為研究對(duì)象,分析血清IncRNA HOTAIR在肝癌患者中的表達(dá)與臨床診斷意義。信息示下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

將2019年11月至2021年11月本院收治的100例肝癌患者納入肝癌組,同期收治的80例肝硬化患者納入肝硬化組,同期于本院行健康體檢的75例健康體檢者納入對(duì)照組,研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn):①肝癌患者經(jīng)組織病理檢查證實(shí)病情;②肝硬化患者經(jīng)肝臟活檢證實(shí)病情;③對(duì)照組均身體健康,無(wú)重大疾病;④所有研究對(duì)象均對(duì)本次研究知悉,且其納入遵循自愿原則,并簽署知情同意書(shū);⑤均具有較為優(yōu)良的依從性。排除標(biāo)準(zhǔn):①存在精神疾患、認(rèn)知障礙或語(yǔ)言溝通障礙,難以正常配合進(jìn)行研究者;②合并免疫系統(tǒng)病癥者;③存有全身性感染者;④存在凝血功能異常者;⑤合并血液系統(tǒng)疾病者;⑥合并心、肝、腎等重要臟器功能不全者;⑦存在嚴(yán)重的腦器質(zhì)性疾病變者;⑧存有酒精、藥物依賴(lài)史者。對(duì)照組男性45例,女性30例;年齡43～75歲,平均年齡(60.69±6.34)歲;體重指數(shù)(BMI)18.6～27.7 kg/m2,平均BMI(23.25±1.91)kg/m2。肝硬化組男性41例,女性39例;年齡43～78歲,平均年齡(60.75±6.14)歲;BMI 18.7～27.5 kg/m2,平均BMI(23.30±1.93)kg/m2。肝癌組男性59例,女性41例;年齡42～76歲,平均年齡(60.92±6.48)歲;BMI 18.8～27.5 kg/m2,平均BMI(23.36±1.88)kg/m2。比較3組一般資料,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

標(biāo)本采集:在全部研究對(duì)象入選之后的第2天早晨,采集其空腹5 ml外周靜脈血液于無(wú)菌試管內(nèi),嚴(yán)格按照無(wú)菌操作原則行采集,之后以3000 r/min的速率行10 min的離心處理,獲取上層清液后,于-80 ℃環(huán)境下留存待檢。檢測(cè)方法:首先運(yùn)用Trizol法提取血清樣品內(nèi)總RNA,對(duì)每個(gè)樣本的每個(gè)基因開(kāi)展3次重復(fù)試驗(yàn)。以1 μg總RNA為模板合成cDNA,以RNA 18S作為內(nèi)源性參照,以20 μlqRT-PCR反應(yīng)體系;取cDNA放于PCR擴(kuò)增儀內(nèi)行擴(kuò)增,反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性1 min,95 ℃15 s,60 ℃40 s,共進(jìn)行40個(gè)循環(huán),完畢后以2-ΔΔCt法計(jì)算血清IncRNA HOTAIR相對(duì)表達(dá)量。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)3組血清IncRNA HOTAIR相對(duì)表達(dá)量對(duì)比:統(tǒng)計(jì)對(duì)比3組血清IncRNA HOTAIR相對(duì)表達(dá)量。(2)血清IncRNA HOTAIR表達(dá)與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系:收集所有肝癌患者的性別(男、女)、年齡(≥60歲、<60歲)、腫瘤數(shù)目(1個(gè)、≥2個(gè))、TNM分期(Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期)、血管侵犯(有、無(wú))、肝外轉(zhuǎn)移(有、無(wú))等資料,分析血清IncRNA HOTAIR表達(dá)與上述臨床病理特征的關(guān)系。(3)血清IncRNA HOTAIR在肝癌中的診斷效能:繪制受試者工作曲線(ROC),分析血清IncRNA HOTAIR在肝癌中的診斷效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 3組血清IncRNA HOTAIR相對(duì)表達(dá)量對(duì)比

肝癌組IncRNA HOTAIR相對(duì)表達(dá)量高于肝硬化組與對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組血清IncRNA HOTAIR相對(duì)表達(dá)量對(duì)比

2.2 血清IncRNA HOTAIR表達(dá)與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系

IncRNA HOTAIR表達(dá)與肝癌患者的TNM分期、血管侵犯、肝外轉(zhuǎn)移有關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); IncRNA HOTAIR表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤數(shù)目無(wú)關(guān),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 血清IncRNA HOTAIR表達(dá)與肝癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 血清IncRNA HOTAIR在肝癌中的診斷效能

ROC結(jié)果顯示:血清IncRNA HOTAIR診斷肝癌的AUC為0.901,標(biāo)準(zhǔn)誤為0.025,P值為0.000,95%CI:0.852～0.949,診斷價(jià)值較高。見(jiàn)圖1。

圖1 血清IncRNA HOTAIR診斷肝癌的ROC圖

3 討論

肝癌是一種發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤,在臨床具有較高的患病率,近年發(fā)病率呈明顯升高趨勢(shì),發(fā)病年齡趨于年輕化[7-8]。肝癌的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,與飲酒、病毒性肝炎、遺傳等相關(guān),死亡率較高[9-10]。對(duì)于早期肝癌,及時(shí)采取以手術(shù)為主的綜合治療方案,可有效控制患者病情,延長(zhǎng)生存期,部分患者甚至存在治愈可能,而中晚期肝癌治療難度較大,整體預(yù)后較差[11-12]。因此,臨床盡早明確肝癌患者病情,并根據(jù)臨床病理特征制定針對(duì)性的治療方案,對(duì)于改善患者的預(yù)后尤為重要。

超聲造影、增強(qiáng)CT、磁共振成像等影像學(xué)檢查手段為肝癌臨床檢查、診斷的常用手段,但存在費(fèi)用高、患者依從性低等不足,故臨床應(yīng)用較為受限,難以作為常規(guī)檢查手段。因此,臨床還應(yīng)尋找能夠?yàn)楦伟┰缙谠\斷提供可靠參考的腫瘤生物標(biāo)志物。臨床多項(xiàng)研究表明,在腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移等多種細(xì)胞生物學(xué)的過(guò)程中,IncRNA均為重要的表現(xiàn)遺傳學(xué)調(diào)控因子[13-14]。IncRNA具有類(lèi)型多、數(shù)量多、作用機(jī)制多等特點(diǎn),IncRNA廣泛參與細(xì)胞增殖、分化與凋亡等過(guò)程,在多種疾病病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移聯(lián)系密切。而HOTAIR是具有反式轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的IncRNA,主要是通過(guò)5′結(jié)構(gòu)域與3′結(jié)構(gòu)域募集復(fù)雜蛋白復(fù)合體來(lái)調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。HOTAIR是一種在多種腫瘤中起致癌作用的IncRNA,HOTAIR沉默會(huì)促使肝癌細(xì)胞的凋亡,抑制癌細(xì)胞增殖。本研究結(jié)果顯示,肝癌組的IncRNA HOTAIR相對(duì)表達(dá)量(2.53±0.58)高于肝硬化組(0.81±0.25)與對(duì)照組(0.20±0.05),且IncRNA HOTAIR表達(dá)與肝癌患者的TNM分期、血管侵犯、肝外轉(zhuǎn)移有關(guān),表明肝癌惡性程度越高,IncRNA HOTAIR表達(dá)水平越高,IncRNA HOTAIR可能參與肝癌的惡性轉(zhuǎn)化及增殖擴(kuò)散的過(guò)程。TNM分期、血管侵犯、肝外轉(zhuǎn)移均可反映腫瘤惡性程度及負(fù)荷情況,當(dāng)TNM分期越高,且出現(xiàn)血管侵犯、肝外轉(zhuǎn)移,則病灶侵襲范圍越大,所合成、釋放的IncRNA HOTAIR越多。樓衷晗等[15]研究結(jié)果顯示,原發(fā)性肝癌患者的血清IncRNA HOTAIR相對(duì)表達(dá)量高于肝硬化組與健康對(duì)照組,與本研究結(jié)果類(lèi)似。本研究ROC結(jié)果顯示:血清IncRNA HOTAIR診斷肝癌的AUC為0.901(95%CI:0.852～0.949),提示血清IncRNA HOTAIR在肝癌中具有較高的診斷價(jià)值,可為早期肝癌的診斷提供可靠的參考信息。然而需注意的是,本次研究尚存在納入樣本量較少等不足,可能會(huì)對(duì)本次試驗(yàn)結(jié)果的可信度構(gòu)成一定的干擾。因此,后續(xù)臨床還需不斷的完善試驗(yàn)設(shè)計(jì),增加樣本量的不斷納入,以進(jìn)行更深層次的研究,進(jìn)一步了解血清IncRNA HOTAIR在肝癌患者中的臨床意義,從而為臨床制定個(gè)體化治療方案提供更為可靠的指導(dǎo),使患者獲得更為良好的預(yù)后。

綜上所述,血清IncRNA HOTAIR在肝癌患者血清內(nèi)呈高表達(dá),且其表達(dá)水平與患者TNM分期、血管侵犯程度、肝外轉(zhuǎn)移情況等密切相關(guān),可為肝癌早期診斷提供可靠的參考信息,值得大力的推廣。