摘要 為了解部分羊場(chǎng)青儲(chǔ)飼料中霉菌毒素污染狀況，本試驗(yàn)通過量子點(diǎn)熒光競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定43份青儲(chǔ)飼料及其原料中的黃曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEN）和嘔吐毒素（DON）3種常見霉菌毒素含量。結(jié)果表明，全株玉米青貯、青貯玉米秸稈中AFB1的檢出率分別為12.5%、16.6%，陽性最高值分別為2.4、1.9 μg/kg，超標(biāo)率為0。蠶豆殼（秧）、大蒜皮（秧）、油菜殼（秧）、花生秧、碗豆秧、全株小麥青貯、全株玉米青貯和青貯玉米秸稈中ZEN的檢出率分別為33.3%、50%、75%、14.3%、100%、100%、50%和66.7%，陽性最高值分別為10、10、20、20、30、50、390和80 μg/kg，超標(biāo)率為0。油菜殼（秧）、小麥秸稈、全株玉米青貯和玉米秸稈青貯中DON的檢出率分別為25%、50%、50%和50%，陽性最高值分別為200、720、500和380 μg/kg，超標(biāo)率為0。被檢樣品中霉菌毒素檢出率為69.8%，其中，ZEN污染最為嚴(yán)重，檢出率為44.2%，DON和AFB1存在輕微污染，3種霉菌毒素的超標(biāo)率均為0。這說明部分羊場(chǎng)青儲(chǔ)飼料霉菌毒素污染超標(biāo)率為0，但檢出率較高，需要重視青儲(chǔ)飼料的制備及儲(chǔ)存，加強(qiáng)霉菌毒素實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，提高羊場(chǎng)青儲(chǔ)飼料的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞 霉菌毒素；青儲(chǔ)飼料；污染狀況

中圖分類號(hào) S816.5+3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 1007-7731（2023）23-24-0151-05

Analysis of mycotoxin contamination of green roughage in some sheep farms

HAN Rui1， 2 " "TANG Tao1 " "ZHANG Meng’en1， 2 " "LI Kangle1 " "ZHAO Guohong1 " "WANG Shiqin 1， 2*

（1College of Animal Science， Anhui Science and Technology University， Chuzhou 239000， China;

2Animal nutrition regulation and health Anhui Provincial Key Laboratory， Chuzhou 239000， China）

Abstract In order to understand the mycotoxin pollution situation in some green storage feed of sheep farms. In this experiment， the content of aflatoxin B1 （AFB1）， zealberelone （ZEN） and vomiting toxin （DON） in 43 samples and their raw materials was determined by quantum dot fluorescence competition method. The results showed that the detection rate of AFB1 in whole corn silage and silage was 12.5% and 16.6%， respectively， and the highest positive value was 2.4 and 1.9 μg/kg， respectively， and the exceeding rate was 0. The detection rate of ZEN in broad bean shell （seedling）， garlic skin （seedling）， rape shell （seedling）， peanut seedlings， bowl seedlings， whole wheat silage， whole corn silage and silage corn straw was 33.3%， 50%， 75%， 14.3%， 100%， 100%， 50% and 66.7%.The highest positive value was 10， 10， 20， 20， 30， 50， 390 and 80 μg/kg respectively. The detection rate of DON in rape shell（seedlings）， wheat straw， whole plant corn silage and corn straw silage was 25%， 50%， 50% and 50%， respectively， and the highest positive value was 200， 720， 500 and 380 μg/kg， with the exceeding rate of 0. The detection rate of mycotoxins in the tested samples reached 69.8%， among which ZEN pollution was the most serious， with the detection rate of 44.2%. DON and AFB1 were slightly contaminated， and the exceeding rate of the three mycotoxins was 0. This indicates that the contamination rate of mycotoxin in some sheep stores was 0，but the detection rate was high， so it was still necessary to pay attention to the preparation and storage of green feed， strengthen the real-time monitoring of mycotoxins， and improve the quality of silage in sheep farms.

Keywords mycotoxin; green roughage; contamination status

霉菌毒素是指霉菌在生長(zhǎng)過程中產(chǎn)生的一種或多種次級(jí)代謝產(chǎn)物[1]，青儲(chǔ)飼料在收獲前和存儲(chǔ)過程中極易被霉菌毒素污染。動(dòng)物攝入霉菌毒素，會(huì)抑制免疫反應(yīng)，導(dǎo)致生理機(jī)能和免疫力下降，還會(huì)誘發(fā)炎癥，增加機(jī)體對(duì)病原體的易感性[2]。霉菌毒素的產(chǎn)生取決于霉菌的基因組成和環(huán)境因素，與霉菌毒素發(fā)生有關(guān)的環(huán)境條件包括濕度、溫度和高水分活度等[3]。黃曲霉菌素是二氫呋喃香豆素的衍生物，不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，如氯仿、甲醇和丙酮等[4]。黃曲霉毒素具有誘變、致癌和致畸的毒性作用[5-6]，是目前公認(rèn)的天然致癌物，可能存在于變質(zhì)玉米、豆類和花生等作物產(chǎn)品中[7]。黃曲霉毒素及其代謝物可以保留在動(dòng)物產(chǎn)品以及一些食品中，污染肉、蛋和奶等動(dòng)物性產(chǎn)品，并通過食物鏈對(duì)人類健康構(gòu)成威脅[8]。嘔吐毒素主體成分為脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（De-oxynivalenol，DON），屬于單端孢霉烯族化合物[9-10]，攝入低劑量或中等劑量的DON會(huì)導(dǎo)致惡心、腹瀉、胃腸道病變、營(yíng)養(yǎng)效率降低和體重減輕等[11]。玉米赤霉烯酮是一種由鐮刀菌產(chǎn)生的生物毒素，食用含有高劑量玉米赤霉烯酮的谷物和飼料會(huì)使懷孕母畜出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎等，最終導(dǎo)致癌變[12-13]。

近年來，肉羊畜牧產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，為了解羊場(chǎng)粗飼料及飼料原料中霉菌毒素污染程度，從部分羊場(chǎng)中收集了43份樣品，采用量子點(diǎn)熒光競(jìng)爭(zhēng)法進(jìn)行玉米赤霉烯酮（ZEN）、嘔吐霉素（DON）和黃曲霉毒素B1（AFB1）的檢測(cè)分析，對(duì)比《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 13078—2017）得出檢測(cè)結(jié)果，分析不同飼料原料中霉菌毒素的污染情況，為霉菌毒素的防控及羊場(chǎng)持續(xù)健康發(fā)展提供參考。

1 材料與方法

1.1 飼料樣本

2022年3—8月，于14個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)代表性羊場(chǎng)共30家，采集羊場(chǎng)青儲(chǔ)飼料43份樣品，包括花生秧、全株玉米青貯、玉米秸稈青貯、小麥秸稈、大蒜皮（秧）、蠶豆殼（秧）、全株小麥青貯、豌豆秧和油菜殼（秧）。用四分法，取1 kg樣品，粉碎后過40目篩，裝瓶并貼上標(biāo)簽備用；對(duì)于含水量高的樣品，置于65 ℃烘箱烘干至恒定重量后，粉碎過篩備用。

1.2 儀器和設(shè)備

1.2.1 試驗(yàn)儀器 "電子天平，飼料粉碎機(jī)，渦輪振蕩器，離心機(jī)，試管，量筒，恒溫孵育器，熒光讀數(shù)儀，黃曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEN）及嘔吐毒素（DON）檢測(cè)試劑盒（天津龍科新域生物技術(shù)有限公司），10～100 μL移液器，50 mL離心管或錐形瓶，50～1 000 μL移液器及吸頭。

1.2.2 試驗(yàn)試劑 "50%乙醇，蒸餾水，樣品稀釋液。

1.3 試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)采用量子點(diǎn)熒光競(jìng)爭(zhēng)法定量檢測(cè)樣本中AFB1、ZEN和DON的濃度。以AFB1測(cè)定為例，具體測(cè)定步驟：應(yīng)用量子點(diǎn)免疫層析技術(shù)，以纖維狀色譜材料條為固相，通過毛細(xì)管作用使樣品溶液在特定位置發(fā)生反應(yīng)。樣品中的AFB1與標(biāo)記有量子點(diǎn)的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體與檢測(cè)線（T線）上的B1-BSA偶聯(lián)體之間的結(jié)合，導(dǎo)致T線的熒光值發(fā)生變化。操作步驟如下。

（1）提前30 min打開多功能孵育器預(yù)熱。

（2）配制50%乙醇（提取液）。1∶1（v/v）乙醇/水。

（3）稱取5 g樣本加入40 mL提取液，放入50 mL離心管中渦旋振蕩3 min，之后靜置1 min以上。

（4）將450 μL樣品稀釋液加入離心管中，再從靜置后的樣本提取液中吸取50 μL上清液加到500 μL離心管中充分振蕩后，4 000 r/min離心5 min。

（5）將微孔條放至孵育器載架微孔上，吸取離心后上清液200 μL加入微孔中。將裝好試劑條的三聯(lián)檢測(cè)卡放到孵育器載架上，計(jì)時(shí)5 min后使用移液器吹打混勻30 s后靜置3 min。

（6）將孵育器載架蓋合準(zhǔn)確計(jì)時(shí)5 min后，將檢測(cè)卡取出插入讀數(shù)儀1 min內(nèi)判讀結(jié)果。

（7）統(tǒng)計(jì)讀數(shù)結(jié)果，采用Excel軟件進(jìn)行整理分析。

1.4 霉菌毒素參考標(biāo)準(zhǔn)

判定標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB13078—2017）進(jìn)行，參考標(biāo)準(zhǔn)見表1。根據(jù)不同毒素檢測(cè)試劑盒檢出限，當(dāng)樣品毒素濃度超過最低檢出限判定為陽性，即檢出。根據(jù)《飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 13078—2017）上不同霉菌毒素對(duì)粗飼料的最高限量為參考，超過最高限量即為超標(biāo)。

2 結(jié)果與分析

2.1 青儲(chǔ)飼料AFB1污染情況

由表2可知，羊場(chǎng)采集的43份樣品中AFB1的陽性樣品有2份，占比4.7%。其中全株玉米青貯8份樣品中有1份樣品檢出AFB1，檢出率為12.5%，陽性最高值為2.4 μg/kg；玉米秸稈青貯的檢出率為16.6%，陽性最高值為1.9 μg/kg。所有被檢測(cè)樣品的AFB1含量均未超標(biāo)，在安全范圍內(nèi)。

2.2 青儲(chǔ)飼料ZEN污染情況

由表3可知，采集的43份樣品中蠶豆殼（秧）、大蒜皮（秧）、油菜殼（秧）、花生秧、碗豆秧、小麥秸稈、全株小麥青貯、全株玉米青貯和青貯玉米秸稈中ZEN的陽性樣品數(shù)為19份，占比44.2%。其中蠶豆殼（秧）的檢出率為33.3%，陽性最高值為10 μg/kg；大蒜皮（秧）的檢出率為50.0%，陽性最高值為10 μg/kg；油菜殼（秧）的檢出率為75.0%，陽性最高值為20 μg/kg；花生秧的檢出率為14.3%，陽性最高值為20 μg/kg；碗豆秧的檢出率為100.0%，陽性最高值為30 μg/kg；小麥秸稈樣品中未檢出ZEN；全株小麥青貯檢出陽性最高值為50 μg/kg；全株玉米青貯的檢出率為50.0%，陽性最高值為390 μg/kg；玉米秸稈青貯的檢出率為66.7%，陽性最高值為80 μg/kg。所有被檢測(cè)的樣品的ZEN含量均未超標(biāo)，在安全范圍內(nèi)。

2.3 羊場(chǎng)青儲(chǔ)飼料DON污染情況

由表4可知，采集的43份樣品中蠶豆殼（秧）、大蒜皮（秧）、油菜殼（秧）、花生秧、碗豆秧、小麥秸稈、全株小麥青貯、全株玉米青貯和青貯玉米秸稈中DON的陽性樣品數(shù)為9份，占比20.9%。其中油菜殼（秧）的檢出率為25.0%，陽性最高值為200 μg/kg；小麥秸稈的檢出率為50.0%，陽性最高值為720 μg/kg；全株玉米青貯的檢出率為50.0%，陽性最高值為500 μg/kg；玉米秸稈青貯的檢出率為50.0%，陽性最高值為380 μg/kg。所有被檢測(cè)的樣品的DON含量均未超標(biāo)，在安全范圍內(nèi)。

2.4 青儲(chǔ)飼料霉菌毒素污染情況

由表5可知，在檢測(cè)的43份樣品中，AFB1的檢出率為4.7%，陽性平均值為2.15 μg/kg，陽性最高值為2.4 μg/kg，ZEN的檢出率為44.2%，陽性平均值為52.70 μg/kg，陽性最高值為390 μg/kg，DON的檢出率為20.9%，陽性平均值為345.10 μg/kg，陽性最高值為720 μg/kg，3種霉菌毒素的超標(biāo)率為0。即ZEN是部分羊場(chǎng)青儲(chǔ)飼料霉菌毒素的首要風(fēng)險(xiǎn)因子，DON次之，同時(shí)要重點(diǎn)關(guān)注全株玉米青貯、玉米秸稈青貯的霉菌毒素殘留。

3 結(jié)論與討論

在對(duì)羊場(chǎng)的43份飼料及飼料原料調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，AFB1、ZEN和DON的霉菌毒素檢測(cè)出陽性的樣品數(shù)分別占比4.7%、44.2%和20.9%。這表明部分羊場(chǎng)青儲(chǔ)飼料受到霉菌毒素污染，且部分樣品同時(shí)被兩種及以上的霉菌毒素污染。賈紀(jì)萍等[14]對(duì)飼料和飼料原料中霉菌毒素監(jiān)測(cè)分析報(bào)告表明，以飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)5 mg/kg為標(biāo)準(zhǔn)，植物性飼料原料的超標(biāo)率為0。王慶偉等[15]對(duì)飼料及飼料原料霉菌毒素的調(diào)查結(jié)果顯示，部分地區(qū)青儲(chǔ)飼料陽性率較高，但陽性均值都低于20 μg/kg。張欣昕等[16]對(duì)浙江省青儲(chǔ)飼料中霉菌毒素殘留檢測(cè)分析，得出飼料中ZEN檢出率最高，本研究結(jié)果中，ZEN的檢出率為44.2%，超標(biāo)率為0。趙巍等[17]的研究表明，AFB1和DON在同一農(nóng)場(chǎng)不同月份之間有明顯的差異，特別是DON，最高和最低月份之間的差異為2.65 mg/kg。本試驗(yàn)中，DON的檢出率為20.9%，超標(biāo)率為0。但本試驗(yàn)沒有對(duì)比不同月份采集的樣品中霉菌毒素污染情況差異，尚需進(jìn)一步研究確認(rèn)。

本研究中，玉米秸稈青貯的AFB1、ZEN和DON的檢出率分別為16.6%、66.7%和50%，說明玉米秸稈青貯較易受霉菌毒素污染，為以青貯玉米秸稈為原料的飼料提供參考。霉菌毒素污染受溫度、濕度等環(huán)境因素影響較大，暖溫帶半濕潤(rùn)季風(fēng)氣候，夏季炎熱且雨水充沛，有利于霉菌毒素的繁殖[18-20]，導(dǎo)致霉菌毒素檢出率高。為了降低霉菌毒素的污染，在青貯前后應(yīng)采取適當(dāng)?shù)囊志胧21]。霉菌毒素主要污染玉米、小麥、大米和大麥等谷物，樣品中全株玉米青貯、全株小麥青貯和玉米秸稈青貯3類粗飼料受污染最嚴(yán)重，原因在于青貯飼料中水分含量高，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，易被霉菌及其毒素侵染[22]。因此在這類飼料利用時(shí)要特別注意，避免出現(xiàn)毒素含量超標(biāo)。部分地區(qū)在玉米收獲后采用自然風(fēng)干方法，糧倉設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單，儲(chǔ)藏條件不受控制，霉菌毒素的積累會(huì)隨著儲(chǔ)藏時(shí)間的延長(zhǎng)而增加[23]。在實(shí)際生產(chǎn)中，為保障飼料安全，應(yīng)注意適時(shí)采收，合理貯藏，合理使用添加劑抑制霉菌毒素的生成。同時(shí)可針對(duì)性地使用霉菌毒素吸附劑，建立霉菌毒素的檢測(cè)和監(jiān)督機(jī)制[24-25]。飼料處理方式、運(yùn)輸和其他相關(guān)過程可能會(huì)導(dǎo)致霉菌毒素的產(chǎn)生，由多種原料加工而成的飼料受污染概率相對(duì)較大[26]。霉菌毒素之間的協(xié)同作用使得霉菌毒素污染的預(yù)防和控制變得更加重要[27]。

對(duì)部分羊場(chǎng)青儲(chǔ)飼料霉菌毒素含量的檢測(cè)表明，霉菌毒素在青儲(chǔ)飼料中存在輕微侵染現(xiàn)象，收集的43份樣品中3種霉菌毒素均未超標(biāo)。部分羊場(chǎng)青儲(chǔ)飼料質(zhì)量安全性總體較好，但仍有潛在的衛(wèi)生安全隱患，需要重視青儲(chǔ)飼料的加工制備及貯藏管理。

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（責(zé)編：李 媛）