摘要：采用高效液相色譜柱后衍生法，即將谷物樣品粉碎后，經(jīng)乙腈提取、氮吹、甲醇復(fù)溶、固相萃取柱凈化、甲醇-二氯甲烷溶液洗脫、氮吹、甲醇定容后，經(jīng)帶有柱后衍生系統(tǒng)和熒光檢測器的高效液相色譜儀檢測，對谷物中滅多威、涕滅威、克百威3種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量進行測定外標法定量。該方法的滅多威、涕滅威、克百威檢出限均為0.008 mg/kg；相對標準偏差（RSD）均小于7.5%，加標回收率為80.6%～109.0%，3種農(nóng)藥混合標準曲線最佳線性范圍0.01～2.0 μg/mL，線性相關(guān)系數(shù)（R）均大于0.999 5。結(jié)果表明，該方法具有良好的線性關(guān)系，準確性和精密度高，操作簡單，適用于谷物中涕滅威、滅多威、克百威農(nóng)藥殘留量的同時檢測。

關(guān)鍵詞：固相萃取柱；高效液相色譜柱后衍生法；涕滅威；滅多威；克百威；殘留量

中圖分類號：TS210.7 文獻標志碼：A DOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.20230220

Determination of residues of three carbamate pesticides in grain by high performance liquid chromatography with post-column derivatization

Zhao Yuechao， Shi Jiayuan， Yang Huining， Zhang Yue， Xu Zhengbin

（ Jilin Province Grain and Oil Health Inspection and Monitoring Station， Changchun， Jilin 130033 ）

Abstract： In this paper， high performance liquid chromatography （HPLC） post-column derivatization method was adopted. After grain samples were crushed， the samples were purified by acetonitrile extraction， nitrogen blowing， methanol redissolution， solid phase extraction column purification， methanol-dichloromethane elution， nitrogen blowing， methanol constant volume， and detected by HPLC with post-column derivatization system and fluorescence detector. Three carbamate pesticide residues of aldicarb， methomyl， and carbofuran in grain were determined and quantified by external standard method. The detection limits of aldicarb， methomyl， and carbofuran were all 0.008 mg/kg. The relative standard deviations （RSD） were all less than 7.5%， and the recoveries ranged from 80.6% to 109.0%. The optimal linear range of the mixed standard curves of the three pesticides was 0.01 μg/mL to 2.0 μg/mL， and the linear correlation coefficients （R） were all greater than 0.999 5. The results showed that the method had a good linear relationship， high accuracy and precision， and was simple to operate. It was suitable for simultaneous determination of aldicarb， methomyl， and carbofuran residues in grain.

Key words： solid phase extraction column， high performance liquid chromatography post-column derivatization， aldicarb， methomyl， carbofuran， residues

氨基甲酸酯類農(nóng)藥具有廣譜、高效、低毒、選擇性高、易分解和殘毒少等特點，被廣泛應(yīng)用于糧食、蔬菜和水果等農(nóng)產(chǎn)品種植中[1-2]。涕滅威、滅多威、克百威是谷物中常用的氨基甲酸酯類農(nóng)藥。滅多威和克百威具有內(nèi)吸、觸殺、胃毒作用，涕滅威有劇毒，主要用作農(nóng)用殺蟲劑。它們中毒的癥狀表現(xiàn)為昏迷、惡心、嘔吐、腹瀉、流涎、流淚、視力模糊、震顫、驚厥、精神錯亂。國際癌癥研究機構(gòu)在2007年將氨基甲酸酯類列為2A類致癌物。含酒精的農(nóng)作物，往往含有低濃度的氨基甲酸酯類農(nóng)藥。聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織、世界衛(wèi)生組織與聯(lián)合食品添加劑專家委員會（專家委員會）曾在2005年進行有關(guān)氨基甲酸酯類農(nóng)藥評估，認為經(jīng)食物（不包括酒精飲品）攝入的氨基甲酸酯類農(nóng)藥分量，對健康的影響并不大，但經(jīng)食物和酒精飲品攝入的氨基甲酸酯類總量，則可能對健康構(gòu)成潛在風(fēng)險，專家委員會建議采取措施，減少一些農(nóng)作物氨基甲酸酯類的含量[3]。我國《食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）規(guī)定，滅多威、涕滅威和克百威的日攝入量分別為0.02、0.03、0.001 mg/kg，它們在谷物中最大殘留限量范圍分別為0.02～2.0、0.02～0.05、0.05～0.1 mg/kg。

當(dāng)前氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的測定方法主要有液相色譜-質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、紫外檢測器高效液相色譜法和熒光檢測器柱后衍生-高效液相色譜法[4]。前兩種方法儀器設(shè)備價格昂貴，對檢測人員的要求高，并且操作復(fù)雜，第三法對于氨基甲酸酯類農(nóng)藥檢出的范圍小。此外，還有農(nóng)殘快速測定儀-酶聯(lián)法，但只是定性或半定量。固相萃?。⊿PE）具有有機溶劑用量少、高效、快速，可一步完成對液體樣品的萃取、濃縮和凈化等特點，因此在農(nóng)藥殘留分析前處理中的應(yīng)用倍受關(guān)注[5]。本文采用乙腈提取，固相萃取凈化，高效液相色譜柱后衍生法同時測定谷物中涕滅威、滅多威、克百威3種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量，旨在為糧食衛(wèi)生安全監(jiān)管提供有效監(jiān)測方法。

1 材料與方法

1.1 材料

涕滅威（BW）081475：標準物質(zhì)，質(zhì)量濃度100 μg/mL，甲醇基質(zhì)，北京海岸鴻蒙標準物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司；克百威GBW（E）083204：標準物質(zhì)，質(zhì)量濃度1 000 μg/mL，甲醇基質(zhì)，北京北方偉業(yè)計量技術(shù)研究院；滅多威GBW（E）083169：標準物質(zhì)，質(zhì)量濃度1 000 μg/mL，甲醇基質(zhì)，北京北方偉業(yè)計量技術(shù)研究院；OPA試劑：色譜級，美國Pickering公司；巰基乙醇：色譜純，美國Pickering公司；OPA稀釋劑：色譜級，美國Pickering公司；水解試劑（0.05 mol/L NaOH水溶液）：色譜純，美國Pickering公司；乙腈、甲醇：色譜純，德國默克有限公司；陰性玉米樣品：自備。

1.2 設(shè)備

LC-20型高效液相色譜儀：配有柱后衍生反應(yīng)裝置和熒光檢測器，日本島津企業(yè)管理（中國）有限公司；CP512型電子天平：上海奧豪斯儀器有限公司；LM3100型錘式實驗粉碎機：瑞典波通儀器公司；固相萃取柱：氨基填料（NH2）500 mg，6 mL，逗點生物技術(shù)有限公司。

1.3 溶液配制

1.3.1 甲醇-二氯甲烷溶液

量取10 mL甲醇加入990 mL二氯甲烷中，混勻。

1.3.2 OPA反應(yīng)液

準確稱取0.100 0 g OPA試劑，置于50 mL的離心管中，加15 mL色譜純甲醇，溶解后，準確稱取2.000 g巰基乙醇，加入離心管中，其溶解后，將離心管中液體全部加入到1整瓶OPA稀釋劑中，有效期2～3 d。

1.3.3 混合標準溶液（10 μg/mL）

準確吸取0.01 mL 3種農(nóng)藥的單個農(nóng)藥標準溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。避光0～4 ℃保存，有效期1個月。

1.3.4 標準工作液

根據(jù)GB 2763—2021農(nóng)藥最大殘留限量，滅多威、涕滅威、克百威在谷物中的最大殘留限量范圍分別為0.02～2.0、0.02～0.05、0.05～0.1 mg/kg，確定3種農(nóng)藥的標準系列濃度范圍。將1.3.3混合標準溶液，用甲醇稀釋，按照試驗需要配制混合標準工作液。避光4 ℃保存，有效期7 d。

1.4 液相條件

色譜柱：C8柱250 nm×4.6 mm×5 μm；激發(fā)波長330 nm和發(fā)射波長465 nm；柱溫45 ℃；進樣體積10 μL；流動相及梯度洗脫條件：見表1，流動相流量為1.00 mL/min；柱后衍生條件：C泵，水解試劑（0.05 mol/L NaOH水溶液），流量為0.3 mL/min；D泵，OPA反應(yīng)液，流量為0.3 mL/min；水解溫度100 ℃；衍生溫度為室溫。

1.5 樣品處理

1.5.1 樣品制備

取500 g樣品經(jīng)錘式旋風(fēng)磨（配有0.8 mm的篩網(wǎng)）粉碎，充分混合后置于聚乙烯瓶中，于-18 ℃條件下保存。

1.5.2 樣品提取

準確稱取10.00 g樣品，置于250 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL乙睛，用往復(fù)式振蕩器在200 r/min下振蕩提取30 min，提取液過濾至150 mL錐形瓶中，用旋渦振蕩器劇烈震蕩1 min，在室溫下靜止30 min，準確吸取10 mL上清液于15 mL離心管中，80 ℃水浴中氮吹蒸發(fā)至近干，加入2 mL甲醇溶解殘余物，待凈化。

1.5.3 樣品凈化

將固相萃取柱用4 mL甲醇-二氯甲烷溶液預(yù)淋洗，當(dāng)液面達到柱篩板頂部時，立即加入上述待凈化溶液，用15 mL離心管收集洗脫液，用2 mL甲醇-二氯甲烷溶液淋洗離心管后過柱，并重復(fù)一次，收集的洗脫液置于50 ℃水浴中氮吹蒸發(fā)近干。準確加入2.5 mL甲醇，渦旋混勻，用微孔濾膜過濾，待測。

1.6 測定

1.6.1 標準工作曲線

按照1.4的液相條件，將混合標準工作溶液由低到高濃度（0、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.0 μg/mL）進樣檢測，以農(nóng)藥質(zhì)量濃度為橫坐標、色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線。

1.6.2 試樣溶液的測定

將試樣溶液按照1.4的液相條件進樣測定，以目標農(nóng)藥的保留時間定性，測得目標農(nóng)藥色譜峰面積，用標準工作曲線外標法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 目標物定性確定

將質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL的3種農(nóng)藥單標溶液，按照1.4的液相條件分別進樣，滅多威、涕滅威、克百威的保留時間分別為12.258、24.486、35.302 min，根據(jù)它們各自單標的保留時間，確定它們先后出峰的順序，在混標色譜圖中確定3種農(nóng)藥目標物。如圖1所示，3種農(nóng)藥的先后出峰順序為滅多威、涕滅威、克百威，按照1.4的液相條件分析，滅多威、涕滅威、克百威3種農(nóng)藥獲得了良好的分離。

2.2 標準工作曲線和線性相關(guān)系數(shù)

滅多威、涕滅威、克百威的標準工作曲線見圖2～圖4。結(jié)果表明：滅多威、涕滅威、克百威3種農(nóng)藥標準曲線的相關(guān)系數(shù)R2均大于0.999 5，在0.01～2.0 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.3 檢出限測定

利用液相色譜相關(guān)軟件計算檢出限，以3倍信噪比（S/N=3）對應(yīng)的毒素含量為檢出限。分別配制滅多威、涕滅威、克百威低濃度單標，按照1.4的液相條件測定，其檢出限均為0.008 mg/kg。

2.4 準確性和可靠性

根據(jù)GB/T 27404—2008附錄F的要求，按照0.01、0.05、0.1 mg/kg 3個水平，在陰性玉米樣品中同時添加滅多威、涕滅威、克百威3種農(nóng)藥，每個水平進行6次重復(fù)試驗，檢測結(jié)果及方法相對標準偏差（RSD）見表2。選擇質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL的混標重復(fù)進樣6次，計算RSD值，測定結(jié)果見表3。

結(jié)果表明：本方法三水平添加滅多威、涕滅威、克百威的回收率為80.6%～109.0%，方法和儀器重復(fù)性測定的RSD為2.4%～7.5%。說明該方法檢測的準確性和可靠性良好，符合GB/T 27404—2008要求。

2.5 注意事項

標準溶液應(yīng)選用有效期內(nèi)的；OPA衍生液要現(xiàn)用現(xiàn)配，使用時間最多不能超過3 d；樣品提取液和洗脫液氮吹時，需注意溫度和時間的控制，吹至近干即可。

3 結(jié) 論

本方法以乙腈為提取液、通過水浴氮吹，甲醇復(fù)溶對樣品中的滅多威、涕滅威、克百威3種農(nóng)藥進行提取，以甲醇-二氯甲烷溶液（1+99）為洗脫劑，對提取樣液進行固相萃取凈化，在激發(fā)波長330 nm和發(fā)射波長465 nm，柱溫45℃條件下，以甲醇-水為流動相梯度洗脫，以0.05 mol/L NaOH水溶液和OPA溶液為柱后衍生液，通過高效液相色譜熒光檢測器進行檢測，該方法凈化和分離效果好，具有良好的線性關(guān)系，準確度和精密度高，操作簡單易行，適用谷物中滅多威、涕滅威、克百威3種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的同時檢測。

參 考 文 獻

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[2]胡敏，李二虎，吳兵兵，等.高效液相色譜法測定大米中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留[J].農(nóng)藥，2006，45（2）：123-124.

[3]李志偉，梁丹，張建夫.氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留分析方法的研究進展[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2008，27（5）：691-695.

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