摘要目的：探討長鏈非編碼RNA（lncRNA）T-box轉(zhuǎn)錄因子5反義RNA1（TBX5-AS1）調(diào)控微小RNA-363-3p（miR-363-3p）對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲的影響。方法：體外培養(yǎng)A172細(xì)胞，并分為Control組、si-NC組、si-TBX5-AS1組、si-TBX5-AS1＋miR-NC inhibitor組和si-TBX5-AS1＋miR-363-3p inhibitor組。定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）檢測不同細(xì)胞［人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞A172、U251、T98G、U87-MG及正常星形膠質(zhì)細(xì)胞（NHA）］及各組A172細(xì)胞中TBX5-AS1和miR-363-3p的相對表達(dá)水平；雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測TBX5-AS1和miR-363-3p的靶向調(diào)控關(guān)系；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8（CCK-8）和集落形成實(shí)驗(yàn)檢測各組A172細(xì)胞的增殖情況，Transwell實(shí)驗(yàn)檢測各組A172細(xì)胞的侵襲情況；蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測各組A172細(xì)胞中增殖相關(guān)蛋白和抗原（PCNA）、Ki67和侵襲相關(guān)蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表達(dá)水平。結(jié)果：TBX5-AS1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)（P＜0.05），且在A172細(xì)胞中表達(dá)水平最高；miR-363-3p在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中表達(dá)下調(diào)（P＜0.05），且在A172細(xì)胞中表達(dá)水平最低。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示，TBX5-AS1和miR-363-3p存在靶向調(diào)控關(guān)系。與si-NC組比較，si-TBX5-AS1組A172細(xì)胞中TBX5-AS1表達(dá)水平和PCNA、Ki67、N-cadherin、Vimentin蛋白水平下調(diào)，miR-363-3p表達(dá)水平和E-cadherin蛋白水平上調(diào)（P＜0.05）；細(xì)胞增殖和侵襲能力降低（P＜0.05）。與si-TBX5-AS1＋miR-NC inhibitor組比較，si-TBX5-AS1＋miR-363-3p inhibitor組A172細(xì)胞中TBX5-AS1表達(dá)水平無明顯變化（P＞0.05）；細(xì)胞中PCNA、Ki67、N-cadherin、Vimentin蛋白水平上調(diào)，miR-363-3p表達(dá)水平和E-cadherin蛋白水平下調(diào)（P＜0.05）；細(xì)胞增殖和侵襲能力增加（P＜0.05）。結(jié)論：下調(diào)TBX5-AS1靶向負(fù)調(diào)控miR-363-3p可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲。

關(guān)鍵詞膠質(zhì)瘤；長鏈非編碼RNA T-box轉(zhuǎn)錄因子5反義RNA1；微小RNA-363-3p；細(xì)胞增殖；細(xì)胞侵襲

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2023.23.014

膠質(zhì)瘤是常見的侵襲性較強(qiáng)的惡性腦瘤，因其呈浸潤性增長，手術(shù)難以完全切除，因此，膠質(zhì)瘤病人的預(yù)后較差［1-2］。長鏈非編碼RNAs（long non-coding RNAs，lncRNAs）是一類具有多樣性和保守性較差的非編碼RNA，可促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化等［3-4］。研究顯示，T-box轉(zhuǎn)錄因子5反義RNA1（T-box transcription factor 5 antisense RNA 1，TBX5-AS1）是一種在非小細(xì)胞肺癌中顯著低表達(dá)的lncRNA，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和組織學(xué)分級有關(guān)，過表達(dá)的TBX5-AS1可抑制細(xì)胞增殖、侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，而TBX5-AS1沉默則表現(xiàn)出相反的效果［5］。微小RNAs（micrornas，miRNAs）是一類長度為22～24個(gè)核苷酸的非編碼RNA，研究顯示，miRNAs可通過抑制翻譯或降解mRNA來參與多種腫瘤的細(xì)胞增殖、侵襲等生物學(xué)過程［6-7］。此外，lncRNAs與miRNAs之間存在交叉調(diào)節(jié)［8］。已有研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA-363-3p（microrna-363-3p，miR-363-3p）在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中顯著低表達(dá)可參與調(diào)控膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和凋亡過程［9］。本研究探討TBX5-AS1調(diào)控miR-363-3p促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲的機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料

人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞（A172、U251、T98G和U87-MG）和正常星形膠質(zhì)細(xì)胞（normal human astrocytes，NHA）購自深圳市豪地華拓生物科技有限公司，貨號分別為HT-X1719、HT-X1725、HT-X1975、HT-X1726、HT-X2408；DEME培養(yǎng)基購自上海LMAI公司，貨號：LM-P0523；TBX5-AS1沉默質(zhì)粒（si-TBX5-AS1）及其陰性對照（si-NC）、miR-363-3抑制劑（miR-363-3p inhibitor）及其陰性對照（miR-NC inhibitor）、miR-363-3p模擬物（miR-363-3p mimics）及其陰性對照（miR-NC mimics）、TBX5-AS1野生型（TBX5-AS1-WT）及突變型（TBX5-AS1-MUT）質(zhì)粒均由廣州RUIBIO公司設(shè)計(jì)并合成；脂質(zhì)體2000、高效蛋白裂解液（RIPA裂解液）購自上海Solarbio公司，貨號：L7800、R0020；TRIzol試劑購自美國Invitrogen，貨號：15596-026；反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自北京YITA公司，貨號：YT9036；SYBR Green PCR Master Mix購自美國ABI公司，貨號：4367659；雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒、細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒8（cell counting kit-8，CCK-8）細(xì)胞增殖檢測試劑盒、增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光劑（enhanced chemilum inescence，ECL）檢測試劑盒購自南京Vazume公司，貨號：DD1204-01、A311-01、E412-01；Transwell小室購自美國BD公司，貨號：354480；一抗增殖細(xì)胞和抗原（PCNA，29 kDa）、Ki67（395 kDa）、E-cadherin（97 kDa）、N-cadherin（125 kDa）、Vimentin（53 kDa）及甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）（37 kDa）均購自英國Abcam公司，貨號：ab92552、ab92742、ab40772、ab76011、ab92547、ab9485。7500 Real Time PCR儀購自美國Thermofisher公司；Accuris MR9600-E 96微孔板吸光度讀取器購自深圳Accuris公司；Axio Vert.A1顯微鏡購自德國ZEISS；ChemiDoc MP凝膠成像系統(tǒng)購自美國Bio-Rad公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)與分組

人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞（A172、U251、T98G和U87-MG）和NHA在DEME培養(yǎng)基中培養(yǎng)，添加有抗生素和10%胎牛血清，常規(guī)培養(yǎng)，至細(xì)胞融合度＞70%時(shí)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)，選取傳代3次后對數(shù)期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)研究。A172細(xì)胞分為Control組、si-NC組、si-TBX5-AS1組、si-TBX5-AS1＋miR-NC inhibitor組和si-TBX5-AS1＋miR-363-3p inhibitor組。Control組細(xì)胞不做任何處理，其余各組參照脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染試劑盒方法分別轉(zhuǎn)染si-NC、si-TBX5-AS1、si-TBX5-AS1和miR-NC inhibitor、si-TBX5-AS1和miR-363-3p inhibitor，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后進(jìn)行后續(xù)研究。

1.2.2定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR）檢測細(xì)胞中TBX5-AS1和miR-363-3p的相對表達(dá)水平

使用TRIzol試劑提取1.2.1中培養(yǎng)的不同細(xì)胞及各組A172細(xì)胞總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄試劑盒轉(zhuǎn)化為cDNA，使用SYBR Green PCR Master Mix和Real Time PCR儀進(jìn)行qRT-PCR檢測，所有操作均嚴(yán)格按照說明書方法進(jìn)行。經(jīng)2－△△Ct測定TBX5-AS1和miR-363-3p的相對表達(dá)水平。GAPDH對TBX5-AS1水平進(jìn)行歸一化，U6對miR-363-3p水平進(jìn)行歸一化。引物序列：TBX5-AS1正向?yàn)?′-GCAAAACGTACCGCGTAGAC-3′，反向?yàn)?′-GATGCCGGAGAAAGGAACCA-3′；GAPDH正向?yàn)?′-GAGAAGTATGACAACAGCCTC-3′，反向?yàn)?′-ATGGACTGTGGTCATGAGTC-3′；miR-363-3p正向?yàn)?′-GCGGCCAATTGCACGGTAT-3′，反向?yàn)?′-GTGCAGGGTCCGAGGTATTC-3′；U6正向?yàn)?′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，反向?yàn)?′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。

1.2.3生物信息學(xué)預(yù)測和雙熒光素酶報(bào)告基因分析TBX5-AS1和miR-363-3p的靶向關(guān)系

Starbase網(wǎng)站（https：//starbase.sysu.edu.cn/）預(yù)測TBX5-AS1與miR-363-3p之間的結(jié)合位點(diǎn)。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測進(jìn)一步驗(yàn)證：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增片段TBX5-AS1-WT或TBX5-AS1-MUT基因片段，并將其克隆到熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3中；當(dāng)A172細(xì)胞生長融合度＞70%時(shí)，使用脂質(zhì)體2000將重組質(zhì)粒分別與miR-NC mimics（miR-NC mimics組）或miR-363-3p mimics（miR-363-3p mimics組）共同轉(zhuǎn)染細(xì)胞，48 h后使用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測相對熒光素酶活性。

1.2.4CCK-8檢測各組A172細(xì)胞的增殖活力

將按照1.2.1轉(zhuǎn)染的各組A172細(xì)胞，按照每孔5×103個(gè)的密度接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)48 h后，向每孔中加入10 μL CCK-8溶液后，孵育4 h，使用96微孔板吸光度讀取器在480 nm處檢測各孔細(xì)胞的吸光度值（OD值），OD值即表示細(xì)胞增殖活力。

1.2.5集落形成實(shí)驗(yàn)檢測各組A172細(xì)胞的集落形成數(shù)量

將按照1.2.1轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的各組A172細(xì)胞按照每個(gè)培養(yǎng)皿1×102個(gè)接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿，使細(xì)胞均勻分散，正常培養(yǎng)2～3周，其間根據(jù)培養(yǎng)液pH值的變化更換培養(yǎng)基，直至出現(xiàn)肉眼可見的克隆時(shí)，終止培養(yǎng)。固定細(xì)胞后使用Giemsa染色10 min，在顯微鏡下拍照并統(tǒng)計(jì)各皿A172細(xì)胞集落形成數(shù)量。

1.2.6Transwell實(shí)驗(yàn)檢測各組A172細(xì)胞的侵襲情況

將按照1.2.1轉(zhuǎn)染的各組A172細(xì)胞使用無血清的培養(yǎng)基稀釋后，按照每孔1×105個(gè)的密度接種到Matrigel包被的Transwell小室，下室中添加正常培養(yǎng)基作為誘導(dǎo)劑，24 h后固定細(xì)胞，使用0.5%結(jié)晶紫染色后在顯微鏡下拍照并統(tǒng)計(jì)侵襲細(xì)胞數(shù)量。

1.2.7蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測各組A172細(xì)胞中PCNA、Ki67、E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白水平

收集按照1.2.1轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的各組細(xì)胞，使用吐溫-20-三羥甲基氨基甲烷鹽緩沖液（tris-buffered saline withTween-20，TBST）洗滌后在添加蛋白酶抑制劑的RIPA緩沖液中裂解，離心后收集上清液，使用二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。蛋白經(jīng)煮沸變性后，在十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）中電泳分離后轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜（PVDF）上，使用5%牛血清清蛋白溶液（BSA）室溫封閉1 h后，添加一抗PCNA、Ki67、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及GAPDH（稀釋比例1∶1 000）在4 ℃過夜孵育，使用TBST沖洗后，分別與辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（稀釋比例1∶5 000）在室溫下孵育2 h，通過ECL發(fā)光液顯影后拍照，使用Image J軟件檢測各組蛋白條帶的灰度值。目的蛋白的相對表達(dá)量＝目的蛋白的灰度值/內(nèi)參蛋白的灰度值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用GraphPad Prism 7.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1TBX5-AS1和miR-363-3p在不同細(xì)胞系中的相對表達(dá)水平

與NHA細(xì)胞比較，TBX5-AS1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系（A172、U251、T98G和U87-MG）中表達(dá)上調(diào)（P＜0.05），且在A172細(xì)胞中表達(dá)水平最高；miR-363-3p在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系（A172、U251、T98G和U87-MG）中表達(dá)下調(diào)（P＜0.05），且在A172細(xì)胞中表達(dá)水平最低。故而后續(xù)選擇A172細(xì)胞作為研究對象。詳見表1。

2.2TBX5-AS1與miR-363-3p靶向關(guān)系驗(yàn)證

Starbase網(wǎng)站預(yù)測發(fā)現(xiàn)，TBX5-AS1與miR-363-3p存在靶向互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)（見圖1）。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示，與miR-NC mimics組比較，轉(zhuǎn)染TBX5-AS1-WT可明顯降低miR-363-3p mimics組細(xì)胞中相對熒光素酶活性（P＜0.05），而TBX5-AS1-MUT則對miR-363-3p mimics組細(xì)胞中相對熒光素酶活性無明顯影響（P＞0.05）。詳見表2。

2.3各組A172細(xì)胞中TBX5-AS1和miR-363-3p表達(dá)水平及增殖能力變化情況

與si-NC組比較，si-TBX5-AS1組A172細(xì)胞中TBX5-AS1表達(dá)水平下調(diào)，miR-363-3p表達(dá)水平上調(diào)（P＜0.05）；細(xì)胞增殖活力和集落形成能力降低（P＜0.05）。與si-TBX5-AS1＋miR-NC inhibitor組比較，si-TBX5-AS1＋miR-363-3p inhibitor組A172細(xì)胞中TBX5-AS1表達(dá)水平變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），miR-363-3p表達(dá)水平下調(diào)（P＜0.05）；細(xì)胞增殖活力和集落形成能力增加（P＜0.05）。而si-NC組和Control組、si-TBX5-AS1＋miR-NC inhibitor組和si-TBX5-AS1組細(xì)胞中TBX5-AS1和miR-363-3p表達(dá)水平及增殖能力的變化比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見圖2、表3。

2.4各組A172細(xì)胞侵襲能力變化情況

與si-NC組比較，si-TBX5-AS1組A172細(xì)胞侵襲數(shù)量減少（P＜0.05）。與si-TBX5-AS1＋miR-NC inhibitor組比較，si-TBX5-AS1＋miR-363-3p inhibitor組A172細(xì)胞侵襲數(shù)量增加（P＜0.05）。而si-NC組和Control組、si-TBX5-AS1＋miR-NC inhibitor組和si-TBX5-AS1組細(xì)胞侵襲數(shù)量變化比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見圖3、表4。

2.5各組A172細(xì)胞中PCNA、Ki67、E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白水平變化情況

與si-NC組比較，si-TBX5-AS1組A172細(xì)胞中PCNA、Ki67、N-cadherin及Vimentin蛋白水平下調(diào)，E-cadherin蛋白水平上調(diào)（P＜0.05）。與si-TBX5-AS1＋miR-NC inhibitor組比較，si-TBX5-AS1＋miR-363-3p inhibitor組A172細(xì)胞中PCNA、Ki67、N-cadherin及Vimentin蛋白水平上調(diào)，E-cadherin蛋白水平下調(diào)（P＜0.05）。而si-NC組和Control組、si-TBX5-AS1＋miR-NC inhibitor組和si-TBX5-AS1組細(xì)胞中PCNA、Ki67、E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白水平變化差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見圖4、表5。

3討論

近年來，lncRNAs因其在癌癥進(jìn)展中的調(diào)節(jié)作用而受到越來越多的關(guān)注。一些lncRNAs在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中異常表達(dá)，并參與膠質(zhì)瘤的發(fā)展［10］，lncRNA CASC2在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中低表達(dá)，且與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的病理分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為［11］；lncRNA-LINC01116在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中上調(diào)，并在細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、遷移、侵襲和血管生成中發(fā)揮重要作用［12］。本研究對TBX5-AS1的功能進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)TBX5-AS1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，這與之前研究證實(shí)的TBX5-AS1在非小細(xì)胞肺癌中下調(diào)的趨勢不同，表明TBX5-AS1在不同的腫瘤中可能發(fā)揮不同的作用。為了進(jìn)一步探討TBX5-AS1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的作用［5］，本研究選擇在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中表達(dá)水平最高的A172細(xì)胞作為研究對象，結(jié)果表明，TBX5-AS1的沉默可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，同時(shí)，上調(diào)E-cadherin蛋白水平，下調(diào)細(xì)胞中PCNA、Ki67、N-cadherin及Vimentin蛋白水平。研究顯示，PCNA、Ki67是細(xì)胞增殖標(biāo)志物，PCNA是DNA復(fù)制和DNA修復(fù)必需的物質(zhì)，Ki67僅在細(xì)胞增殖期的細(xì)胞核中表達(dá)，二者的表達(dá)水平與細(xì)胞增殖能力密切相關(guān)［13］。E-cadherin、N-cadherin和Vimentin是經(jīng)典的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物，E-cadherin上調(diào)，N-cadherin和Vimentin下調(diào)是抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一［14］。結(jié)合本研究結(jié)果，推測沉默TBX5-AS1可通過影響增殖、侵襲相關(guān)蛋白的表達(dá)，抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲。

越來越多的研究證實(shí)，lncRNAs可作為內(nèi)源性RNA與miRNA競爭性結(jié)合，從而調(diào)控mRNAs的水平［15］。lncRNA BCYRN1可通過與miR-619-5p競爭性結(jié)合，從而調(diào)控CUEDC2表達(dá)和PTEN/蛋白激酶B（AKT）/p21通路來抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為［16］。在本研究中，通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，TBX5-AS1和miR-363-3p可能存在相互作用；經(jīng)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證了二者存在負(fù)靶向關(guān)系；進(jìn)一步證實(shí)，沉默TBX5-AS1可上調(diào)miR-363-3p的表達(dá)水平，而miR-363-3p表達(dá)則對TBX5-AS1的表達(dá)水平無明顯影響，表明在A172細(xì)胞中，TBX5-AS1直接負(fù)靶向調(diào)控miR-363-3p表達(dá)。因此，TBX5-AS1可能作為miR-363-3p的海綿在膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲中發(fā)揮作用。此外，本研究還顯示，抑制miR-363-3p表達(dá)可部分逆轉(zhuǎn)沉默TBX5-AS1對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。研究顯示，在肺腺癌細(xì)胞中，miR-363-3p可直接靶向調(diào)控PCNA抑制腫瘤生長［17］。此外，在結(jié)直腸癌中，miR-363-3p可直接靶向SRY相關(guān)高遷移率族蛋白框4（SOX4）抑制癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移［18］。結(jié)合本研究結(jié)果，推測miR-363-3p可逆轉(zhuǎn)沉默TBX5-AS1對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲的抑制作用，可能是通過直接靶向PCNA、SOX4發(fā)揮作用的。

綜上所述，TBX5-AS1可能作為miR-363-3p的海綿促進(jìn)細(xì)胞增殖和侵襲。但本研究尚存在一定的不足，本研究并未在動(dòng)物模型體內(nèi)驗(yàn)證此結(jié)論，且并未探究miR-363-3p是通過調(diào)控哪些靶基因逆轉(zhuǎn)沉默TBX5-AS1對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)影響的，因此，后續(xù)將重點(diǎn)探討這兩個(gè)研究方向。

參考文獻(xiàn)：

［1］POFF A，KOUTNIK A P，EGAN K M，et al.Targeting the Warburg effect for cancer treatment：ketogenic diets for management of glioma［J］.Seminars in Cancer Biology，2019，56（3）：135-148.

［2］雷霆，王俊文.全外顯子測序技術(shù)在腦膠質(zhì)瘤分子機(jī)制研究與個(gè)體化分子靶向治療中的前景［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2019，36（8）：1355-1357.

［3］SONG L，ZHANG S，DUAN C，et al.Genome-wide identification of lncRNAs as novel prognosis biomarkers of glioma［J］.J Cell Biochem，2019，120（12）：19518-19528.

［4］王藝璇，王可，張舒.微小RNA、長鏈非編碼RNA及二者相互作用調(diào)控成骨細(xì)胞功能的研究進(jìn)展［J］.解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2021，42（1）：118-124.

［5］QU Q H，JIANG S Z，LI X Y.LncRNA TBX5-AS1 regulates the tumor progression through the PI3K/AKT pathway in non-small cell lung cancer［J］.OncoTargets and Therapy，2020，13（3）：7949-7961.

［6］GUO Y W，HONG W M，WANG X M，et al.microRNAs in microglia：how do microRNAs affect activation，inflammation，polarization of microglia and mediate the interaction between microglia and glioma？［J］.Frontiers in Molecular Neuroscience，2019，12（3）：125-131.

［7］WANG G A，LI Y，ZHANG D X，et al.CELSR1 acts as an oncogene regulated by miR-199a-5p in glioma［J］.Cancer Management and Research，2020，12（3）：8857-8865.

［8］WU Y P，QIAN Z L.Long non-coding RNAs（lncRNAs） and microRNAs regulatory pathways in the tumorigenesis and pathogenesis of glioma［J］.Discov Med，2019，28（153）：129-138.

［9］BI Y Y，MAO Y H，SU Z P，et al.Long noncoding RNA HNF1A-AS1 regulates proliferation and apoptosis of glioma through activation of the JNK signaling pathway via miR-363-3p/MAP2K4［J］.Journal of Cellular Physiology，2021，236（2）：1068-1082.

［10］STACKHOUSE C T，GILLESPIE G Y，WILLEY C D.Exploring the roles of lncRNAs in GBM pathophysiology and their therapeutic potential［J］.Cells，2020，9（11）：2369.

［11］劉露，楊福兵，朱明建，等.LncRNA CASC2靶向miR-634表達(dá)抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為［J］.中國免疫學(xué)雜志，2019，35（16）：1976-1980;1986.

［12］YE J L，ZHU J L，CHEN H R，et al.A novel lncRNA-LINC01116 regulates tumorigenesis of glioma by targeting VEGFA［J］.International Journal of Cancer，2020，146（1）：248-261.

［13］YANG F，WANG T C，DU P，et al.M2 bone marrow-derived macrophage-derived exosomes shuffle microRNA-21 to accelerate immune escape of glioma by modulating PEG3［J］.Cancer Cell Int，2020，20（3）：93-95.

［14］ZUCHEGNA C，DI ZAZZO E，MONCHARMONT B，et al.Dual-specificity phosphatase（DUSP6） in human glioblastoma：epithelial-to-mesenchymal transition（EMT） involvement［J］.BMC Res Notes，2020，13（1）：374-382.

［15］解蕭宇，江從慶.競爭內(nèi)源性RNA在結(jié)直腸癌中的研究現(xiàn)狀及展望［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2020，37（2）：205-211.

［16］MU M L，NIU W X，ZHANG X M，et al.LncRNA BCYRN1 inhibits glioma tumorigenesis by competitively binding with miR-619-5p to regulate CUEDC2 expression and the PTEN/AKT/p21 pathway［J］.Oncogene，2020，39（45）：6879-6892.

［17］WANG Y H，CHEN T，HUANG H L，et al.miR-363-3p inhibits tumor growth by targeting PCNA in lung adenocarcinoma［J］.Oncotarget，2017，8（12）：20133-20144.

［18］GENG Q Q，LI Z B，LI X T，et al.LncRNA NORAD，sponging miR-363-3p，promotes invasion and EMT by upregulating PEAK1 and activating the ERK signaling pathway in NSCLC cells［J］.Journal of Bioenergetics and Biomembranes，2021，53（3）：321-332.

（收稿日期：2021-11-04）

（本文編輯鄒麗）