摘要目的：探討黃芪多糖（APS）對阿爾茨海默病（AD）大鼠海馬神經(jīng)元損傷的影響及其機(jī)制。方法：按隨機(jī)數(shù)字表法將180只健康Wistar大鼠平均分為正常組、模型組、APS低劑量組（APS-L組）、APS中劑量組（APS-M組）、APS高劑量組（APS-H組）和吡拉西坦片組。除正常組外，其他各組采用雙側(cè)海馬定向注射β-淀粉樣蛋白1～42片段（Aβ1～42）的方法制備AD大鼠模型，APS-L組、APS-M組、APS-H組分別給予200、400、800 mg/kg APS灌胃，吡拉西坦片組給予500 mg/kg吡拉西坦片灌胃，正常組和模型組給予0.9%氯化鈉溶液灌胃，每日1次，連續(xù)給予30 d。蘇木精-伊紅染色觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理改變，透射電子顯微鏡觀察神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)，分光光度法檢測海馬組織超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量，酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素（IL）-1β、IL-6水平，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法測核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）、血紅素加氧酶1（HO-1）mRNA表達(dá)，蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測Nrf2、HO-1、胞漿核因子-κB p65（NF-κB p65）、胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)。結(jié)果：與模型組比較，APS-L組、APS-M組、APS-H組和吡拉西坦片組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理性形態(tài)結(jié)構(gòu)改變、超微結(jié)構(gòu)病變呈不同程度改善。APS-M組、APS-H組和吡拉西坦片組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理分級明顯降低（P＜0.05），SOD、GSH-Px活性明顯升高且MDA含量明顯降低（P＜0.05），TNF-α、IL-1β、IL-6水平明顯降低（P＜0.05），Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表達(dá)量均明顯升高（P＜0.05），胞核NF-κB p65表達(dá)量和胞核NF-κB p65/胞漿NF-κB p65明顯降低（P＜0.05）。APS對各檢測指標(biāo)的影響具有一定劑量依賴性，APS-H組對各指標(biāo)的影響均優(yōu)于吡拉西坦片組（P＜0.05）。結(jié)論：APS對AD大鼠海馬神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用，該作用具有一定的劑量依賴性，其機(jī)制可能與激活Nrf2/HO-1通路、抑制NF-κB核轉(zhuǎn)位進(jìn)而抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)有關(guān)。

關(guān)鍵詞阿爾茨海默?。稽S芪多糖；海馬神經(jīng)元；核因子E2相關(guān)因子2/血紅素加氧酶1通路；氧化應(yīng)激

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2023.23.012

Effect of Astragalus Polysaccharide" on Hippocampal Neuron Injury in Alzheimer′s Disease Rats

FAN Hongjuan， LI Shurui， KANG Kaining， GUAN Lianying

Handan Central Hospital， Handan 056000， Hebei， China， E-mail： lfsyry@163.com

AbstractObjective：To investigate the effects of astragalus polysaccharide（APS） on hippocampal neuron injury in rats with Alzheimer′s disease（AD）.Methods：A total of 180 healthy Wistar rats were divided into normal group，model group，low APS（APS-L），medium APS（APS-M），high APS dose（APS-H） group and piracetam（PIR） group by random number table method.Except the normal group，the AD rat model was prepared by bilateral hippocampal injection of β-amyloid 1-42 fragments（Aβ1-42）.APS-L，APS-M and APS-H groups were given 200，400 and 800 mg/kg APS intragastatically，respectively.The PIR group were given 500 mg/kg PIR intragastatically.The normal group and model group were given 0.9% sodium chloride solution intragastatically，once a day，for 30 days.Hematoxylin-eosin（HE） staining was used to observe the pathological changes of neurons in CA1 region of hippocampus.Transmission electron microscopy was uesd to observe the ultrastructure of neurons.Superoxide dismutase（SOD），glutamate glutathione peroxidase（GSH-Px） activity and malondialdehyde（MDA） content in hippocampus were detected by spectrophotometry.The levels of tumor necrosis factor-α（TNF-α），interleukin（IL）-1β and IL-6 were detected by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.The mRNA expression of nuclear factor E2-related factor 2（Nrf2） and heme oxygenase-1（HO-1） were measured by reverse transcription polymerase chain reaction（RT-PCR）.The expressions of Nrf2，HO-1，cytoplasmic nuclear factor-κB p65（NF-κB p65），and nuclear NF-κB p65 were detected by Western Blot.Results：Compared with model group，the pathological morphological and ultrastructural changes of neurons in hippocampal CA1 region of rats in APS-L，APS-M，APS-H group，and PIR group" improved with different degrees.The pathological grade of neurons in hippocampal CA1 region" significantly decreased in APS-M，APS-H and PIR groups（P＜0.05），the activities of SOD and GSH-Px significantly increased and the content of MDA" significantly decreased（P＜0.05），and the levels of TNF-α，IL-1β and IL-6" significantly decreased（P＜0.05），Nrf2 and HO-1 mRNA and protein expressions" significantly increased（P＜0.05），while nuclear NF-κB p65 expression and nuclear NF-κB p65/cytoplasmic NF-κB p65 expression" significantly decreased（P＜0.05）.APS showed a dose-dependent effect on each index，and the effect of APS-H group on each index was better than piracetam group（P＜0.05）.Conclusion：APS shows a dose-dependent protective effect on hippocampal neuron injury in AD rats.The mechanism may be related to activation of Nrf2/HO-1 pathway，inhibition of NF-κB nuclear translocation，and inhibition of oxidative stress.

KeywordsAlzheimer′s disease; astragalus polysaccharide; hippocampal neuron; nuclear factor E2-related factor 2/heme oxygenase-1 pathway; oxidative stress

阿爾茨海默?。ˋD）是老年人群中較為常見的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，是導(dǎo)致老年人癡呆的主要因素，主要表現(xiàn)為認(rèn)知障礙、記憶力減退、人格及行為改變等［1］。在我國，隨著人口老齡化的加劇，AD發(fā)病率呈明顯上升趨勢，已成為我國亟待解決的社會(huì)問題和醫(yī)學(xué)難題。海馬是與認(rèn)知、記憶等密切相關(guān)的腦功能區(qū)，有研究發(fā)現(xiàn)，減輕海馬神經(jīng)元損傷能夠有效改善AD癥狀并延緩其進(jìn)展［2-3］。病理生理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)是AD所致海馬神經(jīng)元損傷的重要機(jī)制［4-5］。黃芪多糖（APS）是中藥黃芪中的一類水溶性多糖，由葡萄糖、葡萄糖醛酸、己糖醛酸、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸等組成，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種藥理學(xué)作用［6-8］。核因子E2相關(guān)因子2/血紅素加氧酶1（Nrf2/HO-1）是氧化應(yīng)激反應(yīng)重要的信號(hào)通路［9］。研究發(fā)現(xiàn)，APS通過調(diào)控Nrf2/HO-1通路抑制氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)，可有效改善結(jié)腸炎小鼠癥狀和減輕糖尿病大鼠肝損傷［10-11］。本研究探討APS對AD大鼠海馬神經(jīng)元損傷的影響及其機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

8周齡清潔級雄性Wistar大鼠180只，體質(zhì)量220～250 g，購自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公共服務(wù)平臺(tái)［SYXK（冀）2020-001］，動(dòng)物合格證號(hào)為20200713008。分籠飼養(yǎng)（室溫23～25 ℃、相對濕度55%～65%、自由飲水進(jìn)食），本研究獲得邯鄲市中心醫(yī)院倫理委員批準(zhǔn)［批件號(hào)：HDZXLL（K）2020-014］。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物與試劑

APS（純度≥97%）購自南京澤朗醫(yī)藥科技集團(tuán)公司（批號(hào)：2003016）；吡拉西坦片（Piracetam，PIR）購自石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司（批號(hào)：1200413）。β-淀粉樣蛋白1～42片段（Aβ1～42）凍干粉購自美國Sigma公司（批號(hào)：119M8714V）；TriQuick Reagent總RNA提取試劑盒購自北京索萊寶生物技術(shù)有限公司（貨號(hào)：R1100）；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）試劑盒購自南京建成生物工程研究所（批號(hào)：200127、200319、200114、200407、191230、200319）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Thermo Fisher Scientific公司（批號(hào)：1841432）；實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）試劑盒購自上海novoprotein公司（批號(hào)：0511171）；胞漿胞核蛋白制備試劑盒購自北京普利萊基因技術(shù)有限公司（批號(hào)：0918A20）；Nrf2、HO-1、核因子-κB p65（NF-κB p65）抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司（批號(hào)：bs-1074R、bs-23397R、bs-3485R）；β-actin抗體購自美國Abclonal公司（批號(hào)：AC026）；IgG二抗購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司（批號(hào)：180511）；增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光（ECL）試劑盒上海碧云天生物技術(shù)有限公司（批號(hào)：P0018AS）。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器

MD-3000型動(dòng)物腦立體定位注射儀（美國BAS公司生產(chǎn)），RM2016型石蠟切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司生產(chǎn)），BMJ-A型包埋機(jī)（常州郊區(qū)中威電子儀器廠生產(chǎn)），EMUC7型超薄切片機(jī)（德國Leica公司生產(chǎn)），DVM6型透射電鏡（德國Leica公司生產(chǎn)），5424R型離心機(jī)（德國Eppendorf公司生產(chǎn)），MK3 型酶標(biāo)儀（美國Thermo公司生產(chǎn)），DU640型蛋白核酸分析儀（美國Beckman公司生產(chǎn)），Rotor-Gene Q型Real-time PCR儀（德國Qiagen公司生產(chǎn)），DYCZ-24DN型電泳儀（北京六一生物科技有限公司生產(chǎn)），JY200C型電泳儀（北京君意東方電泳設(shè)備有限公司生產(chǎn)），S1000TM型逆轉(zhuǎn)錄儀、GelDoc XR型凝膠成像系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司生產(chǎn)）。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1分組、造模與給藥

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、模型組、APS低劑量（APS-L）組、APS中劑量（APS-M）組、APS高劑量（APS-H）組和吡拉西坦片組，每組30只。除正常組外，其余各組均參照文獻(xiàn)［12］中的方法復(fù)制AD大鼠模型：3 mL/kg腹腔注射10%的水合氯醛溶液實(shí)施麻醉后，將大鼠固定于腦立體定位注射儀，于前囟后3.0 mm、正中矢狀縫左旁和右旁3.0 mm、顱骨表面下3.5 mm處分別緩慢注射2.5 μL的Aβ1～42溶液（濃度4 mg/mL），注射時(shí)間10 min；正常組以同樣的方法注射10 μL 0.9%氯化鈉溶液。造模完成后，APS-L、APS-M、APS-H組分別給予200、400、800 mg/kg APS灌胃，每日1次；吡拉西坦片組給予500 mg/kg吡拉西坦灌胃，每日1次；正常組和模型組給予0.9%氯化鈉溶液灌胃，每日1次，灌胃體積均為5 mL/kg，連續(xù)干預(yù)30 d［13］。

1.4.2蘇木精-伊紅（HE）染色法觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理改變及病理分級

末次給藥24 h后，各組分別選取10只大鼠，麻醉、頸椎脫臼處死、取腦組織并去除小腦、腦干、嗅球，置于10%中性甲醛溶液中固定3 d后，石蠟浸潤包埋、5 μm連續(xù)切片，部分切片經(jīng)梯度乙醇脫蠟水化后行常規(guī)HE染色，通過光學(xué)顯微鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理特點(diǎn)。參照文獻(xiàn)［14］中的方法對神經(jīng)元病理改變進(jìn)行分級：神經(jīng)元形態(tài)和結(jié)構(gòu)正常為（－），少量神經(jīng)元形態(tài)改變?yōu)椋ǎ?，部分神?jīng)元胞核固縮或溶解、神經(jīng)元排列疏松為（＋＋），大部分神經(jīng)元胞核固縮或溶解、神經(jīng)元層次紊亂為（＋＋＋）。

1.4.3透射電子顯微鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)

末次給藥24 h后，各組分別選取10只大鼠，麻醉后頸椎脫臼處死，取腦組織并剝?nèi)『ｑR，切取海馬CA1區(qū)域修飾成1 mm3小塊后置于4 ℃、3%戊二醛溶液固定2 h，經(jīng)梯度乙醇脫水、環(huán)氧丙烷置換、環(huán)氧樹脂浸潤包埋、60 nm超薄切片后，行醋酸鈾和檸檬酸鉛染色，之后通過透射電子顯微鏡觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化。

1.4.4海馬組織SOD、GSH-Px活性、MDA含量及TNF-α、IL-1β、IL-6水平檢測

分別取各組剩余的10只大鼠，麻醉后頸椎脫臼處死，冰上取腦組織并剝?nèi)『ｑR體，剪碎后加入6倍量4 ℃裂解液研磨勻漿，4 ℃、2 000 r/min離心5 min取上清液，按照試劑盒說明檢測SOD、GSH-Px活性，MDA含量和TNF-α、IL-1β、IL-6水平。

1.4.5RT-PCR法檢測海馬神經(jīng)元Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)

取海馬神經(jīng)元裂解勻漿液100 mg，采用總RNA提取試劑盒分離純化總RNA，通過核酸分析儀檢測RNA濃度和純度，采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后，進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，程序設(shè)置為94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，然后通過凝膠分析儀成像。目的基因的相對表達(dá)量采用2－ΔΔCt法計(jì)算（以β-actin為內(nèi)參）。Nrf2、HO-1、β-actin的RT-PCR引物序列見表1。

1.4.6蛋白免疫印跡（Western Blot）法檢測海馬神經(jīng)元Nrf2、HO-1、胞漿NF-κB p65、胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)

取海馬神經(jīng)元100 mg，按照胞漿胞核蛋白提取試劑盒操作說明制備胞漿胞核蛋白，二奎啉甲酸（BCA）法測定總蛋白含量和沸水浴變性，經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）電泳分離蛋白、聚偏氟乙烯（PVDF）轉(zhuǎn)膜、5%脫脂奶粉封閉處理后，滴加Nrf2抗體（1∶500）、HO-1抗體（1∶500）、NF-κB p65（1∶800）、β-actin抗體（1∶1 000）4 ℃孵育過夜，滴加IgG二抗（1∶2 000）室溫孵育2 h，滴加ECL顯影后通過Image J軟件計(jì)算蛋白條帶灰度值，以目的蛋白條帶與β-actin條帶灰度值的比值作為目的蛋白相對表達(dá)量。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；病理分級為等級資料，多組間平均秩次比較采用Kruskall-Wallis H檢驗(yàn)，兩兩比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理改變及病理分級比較

HE染色結(jié)果顯示，正常組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)呈圓形或橢圓形，排列整齊，層次清晰；與正常組比較，模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，形態(tài)呈三角形或不規(guī)則多邊形，排列紊亂，層次不清，胞體固縮深染等病理改變；與模型組比較，APS-L組、APS-M組、APS-H組和吡拉西坦片組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病理學(xué)改變呈不同程度減輕，APS-H組改善效果優(yōu)于其他組。與正常組比較，模型組病理分級明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，APS-M、APS-H組和吡拉西坦片組病理分級明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨APS劑量升高病理分級降低，APS-L組、APS-M組、APS-H組間病理分級差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與吡拉西坦片組比較，APS-H組病理分級明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見圖1、表2。

2.2各組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)改變比較

透射電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，正常組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元染色質(zhì)分布均勻，線粒體、高爾基體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器數(shù)量豐富、結(jié)構(gòu)正常；與正常組比較，模型組海馬體CA1區(qū)神經(jīng)元可見染色質(zhì)凝集或溶解，線粒體腫脹、脊斷裂，高爾基體腫脹呈泡狀，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張等超微結(jié)構(gòu)改變；與模型組比較，APS-L組、APS-M組、APS-H組和吡拉西坦片組海馬體CA1區(qū)神經(jīng)元染色質(zhì)及各細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)損傷不同程度減輕，APS-H組效果最為明顯。詳見圖2。

2.3各組大鼠海馬組織SOD、GSH-Px活性和MDA含量比較

與正常組比較，模型組海馬組織SOD、GSH-Px活性明顯降低，MDA含量明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，APS-M組、APS-H組和吡拉西坦片組SOD、GSH-Px活性明顯升高，MDA含量明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨APS劑量升高SOD、GSH-Px活性升高且MDA含量降低，APS-L組、APS-M組、APS-H組SOD、GSH-Px活性及MDA含量差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與吡拉西坦片組比較，APS-H組SOD、GSH-Px活性明顯升高，MDA含量明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表3。

2.4各組大鼠海馬組織TNF-α、IL-1β、IL-6水平比較

與正常組比較，模型組海馬組織TNF-α、IL-1β、IL-6水平明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，APS-M組、APS-H組和吡拉西坦片組TNF-α、IL-1β、IL-6水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨APS劑量升高TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低，APS-L組、APS-M組、APS-H組TNF-α、IL-1β、IL-6水平差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與吡拉西坦片組比較，APS-H組TNF-α、IL-1β、IL-6水平明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表4。

2.5各組大鼠海馬神經(jīng)元Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表達(dá)比較

與正常組比較，模型組海馬神經(jīng)元Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)量明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，APS-M、APS-H組和吡拉西坦片組Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)量明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨APS劑量升高Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)量升高，APS-L組、APS-M組、APS-H組、Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與吡拉西坦片組比較，APS-H組Nrf2、HO-1 mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)量明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見圖3、圖4、表5。

2.6各組大鼠海馬神經(jīng)元胞漿NF-κB p65、胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)比較

與正常組比較，模型組海馬神經(jīng)元胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)量及胞核NF-κB p65/胞漿NF-κB p65明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，APS-M組、APS-H組和吡拉西坦片組胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)量及胞核NF-κB p65/胞漿NF-κB p65降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨APS劑量升高胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)量及胞核NF-κB p65/胞漿NF-κB p65降低，APS-L組、APS-M組、APS-H組NF-κB p65蛋白表達(dá)量和胞核NF-κB p65/胞漿NF-κBp65差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與吡拉西坦片組比較，APS-H組胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)量及胞核NF-κB p65/胞漿NF-κB p65明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見圖5、表6。

3討論

AD是誘發(fā)老年癡呆的主要原因，其全球致死率居疾病譜第4位，僅次于心血管疾病、腫瘤和腦卒中，嚴(yán)重影響老年人的生活質(zhì)量和生命健康［15］。目前，臨床治療AD主要采取膽堿酯酶抑制劑（多奈哌齊、卡巴拉?。?、N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑（美金剛）等藥物治療，預(yù)后不甚理想［16］。近年來，病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，β淀粉樣蛋白（Aβ）病理性沉積是AD主要的病理學(xué)改變，而氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)在其病變過程中發(fā)揮著重要作用［17-18］。因此，探索以抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)為治療靶點(diǎn)的新型藥物，對改善AD療效具有重要意義。

雙側(cè)海馬定向注射Aβ1～42制備AD大鼠模型的方法具有操作簡單、重復(fù)性好、與人類AD病理特點(diǎn)近似等優(yōu)勢，是國內(nèi)外普遍認(rèn)可的造模方法［19］。吡拉西坦片是一種神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)劑，對AD所致認(rèn)知障礙、思維功能減退等具有明顯改善作用，常用做AD新型藥物實(shí)驗(yàn)研究的陽性對照藥物［20］。APS已被國內(nèi)外大量研究證實(shí)具有抗氧化、抗炎等多種藥理學(xué)作用［6-8］。本研究結(jié)果顯示，AD模型大鼠大腦海馬CA1區(qū)呈現(xiàn)神經(jīng)元數(shù)量減少、形態(tài)改變、排列紊亂、層次不清、胞核固縮深染等病理改變，染色質(zhì)及線粒體、高爾基體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)病變，與宋彥等［12］研究報(bào)道一致。經(jīng)APS干預(yù)則能夠明顯改善AD大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病變及染色質(zhì)、細(xì)胞器等超微結(jié)構(gòu)病變，APS上述作用具有劑量依賴性，且APS-H組作用優(yōu)于吡拉西坦片組，提示APS對AD大鼠海馬神經(jīng)元損傷具有劑量依賴性的保護(hù)作用。

海馬CA1區(qū)是學(xué)習(xí)認(rèn)知、記憶形成轉(zhuǎn)存等過程的關(guān)鍵部位，該部位對氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)異常敏感［21］。Aβ沉積誘發(fā)炎性因子大量釋放而引發(fā)炎癥反應(yīng)，其中具有趨化因子屬性的TNF-α、IL-1β、IL-6能夠刺激粒細(xì)胞等進(jìn)一步釋放炎性因子而加重炎癥反應(yīng)［22-23］。Li等［24］研究發(fā)現(xiàn)，Aβ沉積導(dǎo)致活性氧（ROS）大量生成，致使SOD、GSH-Px等抗氧化酶過度消耗，不能及時(shí)清除的ROS將攻擊生物膜和生物大分子引發(fā)氧化應(yīng)激損傷并誘發(fā)細(xì)胞凋亡［25］。Nrf2普遍存在于真核細(xì)胞中，能夠誘導(dǎo)SOD、GSH-Px等抗氧化酶表達(dá)而抑制氧化應(yīng)激，并且Nrf2能夠誘導(dǎo)HO-1轉(zhuǎn)錄與表達(dá)，HO-1則能夠催化血紅素分解成亞鐵、一氧化碳、膽綠素，其中膽綠素對ROS具有較強(qiáng)的還原活性，從而降低氧化應(yīng)激損傷［26］。NF-κB是一種以p50/p65二聚體形式存在的核轉(zhuǎn)錄因子，生理狀態(tài)下與特異性酶抑制劑結(jié)合而無生理活性；病理狀態(tài)下，ROS等將誘導(dǎo)NF-κB與酶抑制劑解離而使其活化，核轉(zhuǎn)位后p65亞基與DNA特異性位點(diǎn)結(jié)合而誘導(dǎo)炎性因子表達(dá)與釋放，進(jìn)而加重炎癥反應(yīng)［27］。HO-1則能夠抑制NF-κB活化與核轉(zhuǎn)位，從而間接抑制機(jī)體炎癥反應(yīng)［28］。本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)APS治療能夠明顯提高AD大鼠大腦海馬組織SOD、GSH-Px活性并降低MDA含量，降低TNF-α、IL-1β、IL-6水平，提高Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表達(dá)量，降低胞核NF-κB p65蛋白表達(dá)量及胞核NF-κB p65/胞漿NF-κB p65，APS上述作用具有劑量依賴性，且APS-H組作用優(yōu)于吡拉西坦片組，提示APS具有降低AD大鼠海馬神經(jīng)元氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的作用，其作用機(jī)制可能與激活Nrf2/HO-1通路、抑制NF-κB核轉(zhuǎn)位有關(guān)。

綜上所述，APS對AD大鼠海馬神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用，該作用具有一定的劑量依賴性，其機(jī)制可能與激活Nrf2/HO-1通路、抑制NF-κB核轉(zhuǎn)位，進(jìn)而抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

［1］ERATNE D，LOI S M，F(xiàn)ARRAND S，et al.Alzheimer′s disease：clinical update on epidemiology，pathophysiology and diagnosis［J］.Australasian Psychiatry，2018，26（4）：347-357.

［2］劉雅林，謝蘭蘭，王麗云，等.丁苯酞通過SIRT1/NF-κB信號(hào)通路抑制阿爾茨海默病大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的機(jī)制研究［J］.中國病理生理雜志，2019，35（9）：1635-1641.

［3］DARD R F，DAHAN L，RAMPON C.Targeting hippocampal adult neurogenesis using transcription factors to reduce Alzheimer′s disease-associated memory impairments［J］.Hippocampus，2019，29（7）：579-586.

［4］劉軍.氧化應(yīng)激在阿爾茨海默病病理發(fā)生中的作用機(jī)制與干預(yù)策略［J］.中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2020，41（5）：661-668.

［5］趙東岳，林丹楓.阿爾茨海默病炎癥的潛在治療靶點(diǎn)［J］.中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)，2021，43（4）：770-780.

［6］陳偉，謝林伸.黃芪多糖抑制p38MAPK信號(hào)通路減輕缺氧復(fù)氧腎小管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)［J］.免疫學(xué)雜志，2019，35（7）：593-598.

［7］何佳，鄢波，宋曉征，等.黃芪多糖緩解急性腦缺血再灌注損傷的氧化應(yīng)激反應(yīng)和免疫功能紊亂［J］.中國免疫學(xué)雜志，2019，35（12）：1443-1447.

［8］鄧六勤，黎梅桂，吳寶儀.黃芪多糖的氧化降解及其抗氧化和抗腫瘤活性研究［J］.中國藥業(yè)，2018，27（1）：13-16.

［9］陳萬宏，劉東偉，黃圣明.樺木酸通過激活磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/核因子E2相關(guān)因子2信號(hào)通路與高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞損傷關(guān)系的研究［J］.中國糖尿病雜志，2019，27（12）：917-921.

［10］曲敬蓉，張艷艷，宿宏佳，等.黃芪多糖激活Nrf2/HO-1信號(hào)通路改善模型大鼠糖尿病性肝損傷［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2020，36（10）：1422-1427.

［11］CHEN Y J，WANG J Y，LI J T，et al.Astragalus polysaccharide prevents ferroptosis in a murine model of experimental colitis and human Caco-2 cells via inhibiting NRF2/HO-1 pathway［J］.European Journal of Pharmacology，2021，911（11）：174518.

［12］宋彥，索愛琴，丁旭萌，等.尿酸對阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及其機(jī)制［J］.中國神經(jīng)精神疾病雜志，2011，37（10）：603-606.

［13］姜波，費(fèi)洪新，宋磊，等.黃芪多糖對阿爾茨海默病大鼠海馬超微結(jié)構(gòu)和低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1水平的影響［J］.長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，32（3）：451-454.

［14］周雨慧，苗明三，李曉寧，等.地黃飲子加減方對血管性癡呆模型大鼠行為學(xué)及神經(jīng)保護(hù)作用的影響［J］.中藥藥理與臨床，2020，36（1）：46-51.

［15］LI X，F(xiàn)ENG X，SUN X，et al.Global，regional，and national burden of Alzheimer′s disease and other dementias，1990-2019［J］.Front Aging Neurosci，2022，14（10）：937486.

［16］張?zhí)m.阿爾茨海默病治療藥物臨床應(yīng)用及新藥研發(fā)進(jìn)展［J］.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2019，33（6）：407.

［17］POSTU P A，SADIKI F Z，EL IDRISSI M，et al.Pinus halepensis essential oil attenuates the toxic Alzheimer′s amyloid beta （1-42）-induced memory impairment and oxidative stress in the rat hippocampus［J］. Biomed Pharmacother，2019，112（4）：108673.

［18］HAN C Y，YANG Y，GUAN Q B，et al.New mechanism of nerve injury in Alzheimer′s disease：β-amyloid-induced neuronal pyroptosis［J］.Journal of Cellular and Molecular Medicine，2020，24（14）：8078-8090.

［19］李少創(chuàng)，韓誠，秦亞莉，等.阿爾茨海默病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型評述［J］.中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2022，30（1）：131-145.

［20］屈文英，解建國，梁安心，等.黃芪多糖對阿爾茨海默病大鼠神經(jīng)細(xì)胞活性、認(rèn)知功能及Caspase-9表達(dá)水平的影響［J］.卒中與神經(jīng)疾病，2021，28（5）：543-549.

［21］房娉平，闞敏宸，郭立靜，等.燈盞花素對血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)病理改變及Nrf2/HO-1通路的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2021，19（16）：2751-2756.

［22］任巧，張林，劉小慧，等.β淀粉樣蛋白1-42寡聚體對人誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞源性小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響［J］.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2020，34（11）：817-824.

［23］HIRANO S，ZHOU Q，F(xiàn)URUYAMA A，et al.Differential regulation of IL-1β and IL-6 release in murine macrophages［J］.Inflammation，2017，40（6）：1933-1943.

［24］LI N M，LIU K F，QIU Y J，et al.Mutations of beta-amyloid precursor protein alter the consequence of Alzheimer′s disease pathogenesis［J］.Neural Regeneration Research，2019，14（4）：658-665.

［25］HOHENSINNER P J，TAKACS N，KAUN C，et al.Urokinase plasminogen activator protects cardiac myocytes from oxidative damage and apoptosis via HOGG1 induction［J］.Apoptosis，2017，22（8）：1048-1055.

［26］DESHMUKH P，UNNI S，KRISHNAPPA G，et al.The Keap1-Nrf2 pathway：promising therapeutic target to counteract ROS-mediated damage in cancers and neurodegenerative diseases［J］.Biophysical Reviews，2017，9（1）：41-56.

［27］ZHU H Q，LIU Z M，MENG X S，et al.Ligustrazine regulates LPS-induced apoptosis and inflammatory response of osteoarthritis chondrocytes via inhibiting phosphorylation of NF-κB P65 ［J］.Chin J Immunol，2019，35（2）：181-185.

［28］DANG X M，HE B B，NING Q，et al.Alantolactone suppresses inflammation，apoptosis and oxidative stress in cigarette smoke-induced human bronchial epithelial cells through activation of Nrf2/HO-1 and inhibition of the NF-κB pathways［J］.Respiratory Research，2020，21（1）：95.

（收稿日期：2021-11-29）

（本文編輯鄒麗）