張立江，王 琨

(國(guó)藥集團(tuán)容生制藥有限公司，河南 焦作 454950)

地塞米松注射液主要成分為：地塞米松磷酸鈉，化學(xué)名稱為16α-甲基-11β,17α,21-三羥基-9α-氟孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮-21-磷酸酯二鈉鹽。它是用于某些對(duì)皮質(zhì)類固醇治療有反應(yīng)的內(nèi)分泌和非內(nèi)分泌疾病。地塞米松磷酸鈉注射液可作為控制由腦腫瘤或與神經(jīng)外科手術(shù)相關(guān)的腦水腫的輔助藥物，但不適用于因顱腦外傷引起的水腫的情況。呼吸系統(tǒng)疾病、支氣管哮喘和吸入性肺炎、皮膚病中毒性表皮壞死松解癥、休克，需要高藥物劑量的輔助治療。地塞米松已被證明在休克的早期治療中是有益的，但對(duì)整體生存情況可能不會(huì)產(chǎn)生影響。對(duì)美國(guó)藥典、英國(guó)藥典、中國(guó)藥典的方法進(jìn)行重復(fù)，并對(duì)中國(guó)藥典測(cè)定方法進(jìn)行優(yōu)化色譜條件改用辛烷基硅烷健合硅膠為填充劑，結(jié)果表明，此方法穩(wěn)定性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏度高。

1 方法對(duì)比與方法重復(fù)

對(duì)中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、英國(guó)藥典的方法進(jìn)行對(duì)比，并對(duì)方法進(jìn)行重復(fù)，結(jié)果顯示，美國(guó)藥典方法主峰出峰時(shí)間為 21.449 min，且存在拖尾(色譜圖見圖1)；英國(guó)藥典方法主峰出峰時(shí)間為 21.000 min(色譜圖見圖2)；中國(guó)藥典方法主峰出峰時(shí)間為 33.402 min，色譜圖見圖3。主峰出峰時(shí)間均較長(zhǎng)。方法對(duì)比見表1

圖1 美國(guó)藥典方法重復(fù)典型圖譜

圖2 英國(guó)藥典方法重復(fù)典型圖譜

圖3 中國(guó)藥典方法重復(fù)典型圖譜

2 方法優(yōu)化結(jié)果

2.1 材料

1)儀器

高效液相色譜儀(Waters 2695)：美國(guó)Waters公司；S210-K pH計(jì)：梅特勒-托利多有限公司；梅特勒分析天平。

2)試劑

甲醇(HPLC級(jí))：康科德科技有限公司；乙腈(HPLC級(jí))：康科德科技有限公司；三乙胺(AR)：康科德科技有限公司；磷酸(AR):鳳船公司；地塞米松磷酸酯對(duì)照品：批號(hào)10116-201803，含量99.1%；中國(guó)食品藥品檢定研究院。

2.2 方法

1)色譜條件

Kromasil C8(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相： 三乙胺溶液(取三乙胺7.5 mL，加水稀釋1000 mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0)-甲醇-乙腈(55∶40∶5)；流速 1.5 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng) 242 nm；柱溫 30 ℃；進(jìn)樣體積 20 μL。

表1 地塞米松磷酸鈉注射液含量檢測(cè)方法比較

2)樣品配制

①對(duì)照品溶液配制：取地塞米松磷酸酯對(duì)照品 20 mg，精密稱定，置 50 mL 量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5 mL 至 50 mL 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

②供試品溶液配制：取本品10支混勻，精密量取 2 mL，置 25 mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取 2 mL 至 20 mL 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

2.3 結(jié)果

1)專屬性試驗(yàn)

空白溶劑及空白輔料無干擾；系統(tǒng)適用性溶液中，地塞米松磷酸酯峰理論塔板數(shù)為7097(大于5000)，地塞米松磷酸酯峰與雜質(zhì)地塞米松峰的分離度為7.29(大于4.4)；已知雜質(zhì)不干擾主峰的檢測(cè)，空白溶劑、輔料無干擾，主峰出峰時(shí)間為 13.667 min。色譜圖見圖4。

圖4 專屬性圖譜

2)線性關(guān)系

取地塞米松磷酸酯用流動(dòng)相配制成每 1 mL 含 0.016 mg、0.04 mg、0.048 mg、0.056 mg 的溶液。量取各質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。濃度與峰面積關(guān)系見表2，線性關(guān)系見圖5。

以峰面積為橫坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為縱坐標(biāo)，作線性回歸方程。得回歸方程為：y=26233254.83x+3515.07。

表2 線性關(guān)系

圖5 線性關(guān)系

結(jié)果表明，在限度標(biāo)準(zhǔn)為40%～140%范圍內(nèi)，地塞米松磷酸酯和地塞米松磷酸鈉質(zhì)量濃度與峰面積間線性關(guān)系良好，r值均為1.00000(大于0.998)，Y軸截距相對(duì)于100%限度濃度響應(yīng)值均小于2.0%，符合規(guī)定。

3)重復(fù)性試驗(yàn)

取地塞米松磷酸鈉注射液，按供試品溶液配制法平行配制6份供試品溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖。數(shù)據(jù)見表3。

結(jié)果表明：地塞米松磷酸鈉注射液6份供試品溶液中，含量的平均值為102.4%，RSD為0.12%(小于1.0%)，符合要求，該方法重復(fù)性良好。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)

4)精密度試驗(yàn)

參照重復(fù)性試驗(yàn)于不同日期、不同儀器，重復(fù)檢測(cè)。

結(jié)果表明(表4)，中間精密度試驗(yàn)中，6份供試品溶液中，含量的平均值為102.864%，RSD為0.74%(小于1.0%)，12份供試品溶液含量的RSD為0.74%(小于2.0%)，該方法精密度良好。

表4 精密度試驗(yàn)

5)回收率試驗(yàn)

取地塞米松磷酸鈉按80%、100%、120%供試品溶液配制各3份。分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。數(shù)據(jù)見表5。結(jié)果表明，限度約為80%～120%的濃度范圍內(nèi)，9份供試品溶液回收率均在98.0%～102.0%范圍內(nèi)，回收率平均值為99.5%，RSD為0.70%(小于2.0%)，均符合規(guī)定，該方法準(zhǔn)確度良好。

表5 回收率試驗(yàn)

3 討論

地塞米松磷酸鈉注射液含量測(cè)定方法在中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、英國(guó)藥典中都有收載，均采用高效液相色法。通過對(duì)各國(guó)藥典測(cè)定方法對(duì)比發(fā)現(xiàn)，色譜柱填料基本一致(均為C18柱)，但供試品溶液質(zhì)量濃度及檢測(cè)波長(zhǎng)不一致，流動(dòng)相組成不同。嘗試改用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑進(jìn)行方法優(yōu)化，并對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行必要的方法驗(yàn)證，可滿足地塞米松磷酸鈉注射液中地塞米松磷酸鈉的含量檢測(cè)，同時(shí)縮短檢測(cè)時(shí)間，大大降低了成本，提高了工作效率。