袁清亮，紀(jì)建粉，楊 超

（臨沭縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 臨沂 276700）

支原體肺炎是由于支原體感染而引發(fā)機(jī)體肺部發(fā)生病變，致病機(jī)制為支原體頂端吸附于細(xì)胞表面，將其微管侵入細(xì)胞，從而奪取細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，再釋放出過(guò)氧化氫等引發(fā)細(xì)胞溶解、壞死，致使炎癥反應(yīng)發(fā)生。當(dāng)支原體大量繁殖后，患兒肺部受到損傷，出現(xiàn)充血等現(xiàn)象，而其臨床表現(xiàn)多為持續(xù)性劇烈咳嗽、咽喉腫痛，其具有較強(qiáng)感染性[1]。該病主要由飛沫傳播，多發(fā)于冬春兩季，且其患病年齡可低至18 個(gè)月。據(jù)研究數(shù)據(jù)顯示，嬰幼兒支原體肺炎發(fā)病率為9.8%[2]。此外，周汝科等學(xué)者[3]在就微生物快速培養(yǎng)檢測(cè)法與快速血清學(xué)檢驗(yàn)法在成人肺炎支原體感染中的診斷價(jià)值對(duì)比中指出，支原體肺炎潛伏期長(zhǎng)達(dá)8～35 d。因此，早期診斷治療可以及時(shí)止損，保證機(jī)體健康，而血清學(xué)檢測(cè)和微生物快速培養(yǎng)對(duì)支原體肺炎有較高的診斷價(jià)值。對(duì)此，為研究微生物培養(yǎng)及血清學(xué)檢測(cè)對(duì)診斷小兒肺炎支原體感染的效能及其價(jià)值本研究對(duì)64 例肺炎支原體感染患兒相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019 年5 月至2022 年7 月臨沭縣人民醫(yī)院接治的64 例肺炎支原體感染患兒作為觀察組。1～3 歲患兒19 例，男性11 例，女性8 例；病程6～72 d，平均病程（11.59±8.46）d。4～7 歲患兒25 例，男性15例，女性10 例。病程6～70 d，平均病程（11.32±8.57）d；8～10 歲患兒20 例，男性12 例，女性8 例；病程5～69 d，平均病程（11.39±8.30）d。不同年齡患兒一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。64 例患兒病程≥7 d 有23 例，男性14 例，女性9 例；年齡1～11 歲，平均年齡（5.49±2.33）歲。病程≤7d 患兒41 例，男性22 例，女性19 例；年齡1～8 歲，平均年齡（5.44±2.62）歲。不同病程患兒一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。另選73 名健康兒童作為對(duì)照組，其中男性34 例，女性39 例；年齡1～10 歲，平均年齡（5.24±2.56）歲。觀察組患兒與對(duì)照組健康兒童一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)臨沭縣人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，入選兒童父母或監(jiān)護(hù)人知情并簽署知情同意書(shū)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①肺炎支原體感染患兒符合小兒肺炎支原體感染標(biāo)準(zhǔn)[4]并經(jīng)臨床病癥分析結(jié)合胸部X 線(xiàn)檢查確診；②健康兒童無(wú)基礎(chǔ)性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他嚴(yán)重疾?。虎诮谟蟹眉に仡?lèi)藥物；③合并嚴(yán)重精神疾病。

1.2 檢測(cè)方法診斷金標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)臨床病癥分析結(jié)合胸部X 射線(xiàn)檢查進(jìn)行小兒肺炎支原體感染的診斷。血清學(xué)檢測(cè)：囑家屬讓患兒及健康兒童在檢測(cè)前一晚開(kāi)始至第2 天檢測(cè)結(jié)束止，在該段時(shí)間內(nèi)要求其保持禁食狀態(tài)，并且保證空腹時(shí)間>8 h。在檢測(cè)當(dāng)天，取患兒晨時(shí)空腹?fàn)顟B(tài)下外周靜脈血2 mL，將其離心處理（轉(zhuǎn)速：2 300 r/min，持續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)間：5 min），選取離心后的血清，將其放置低溫環(huán)境中保存，將所有受檢血清標(biāo)本集齊后統(tǒng)一進(jìn)行處理。借助抗肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑盒（北京歐蒙生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：JSY1600437），再采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)患兒血清中肺炎支原體，與其特異性免疫球蛋白M抗體進(jìn)行反應(yīng)，若結(jié)果顯示出有兩條紅線(xiàn)則為陽(yáng)性。當(dāng)?shù)谝淮螜z測(cè)顯示其結(jié)果為陰性時(shí)，則需等待1 周后再進(jìn)行一次復(fù)檢，以此降低檢測(cè)誤差。微生物培養(yǎng)：采用無(wú)菌咽拭子（杭州創(chuàng)新生物檢控技術(shù)有限公司，國(guó)械注準(zhǔn)：20153401653），取出患兒口腔及咽喉部分泌物并置于無(wú)菌收集器中。將提取出的分泌物進(jìn)行稀釋處理，使其與肺炎支原體營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基混合，再將混合液倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，并將其放置密閉環(huán)境中，將溫度保持在37 ℃左右，持續(xù)進(jìn)行24 h 細(xì)菌培養(yǎng)。24 h 后觀察培養(yǎng)皿顏色變化，若皿中出現(xiàn)紅色或黃色狀物質(zhì)則表示為陽(yáng)性，若無(wú)顏色變化或呈現(xiàn)透明色則表示其結(jié)果為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)①對(duì)比不同人群血清學(xué)檢測(cè)、微生物培養(yǎng)結(jié)果：對(duì)比兩種檢測(cè)對(duì)健康人群與支原體肺炎患兒的診斷結(jié)果。②對(duì)比兩種檢測(cè)用于診斷不同年齡患兒的陽(yáng)性檢出率：將年齡分為1～3 歲、4～7 歲及8～10 歲。③對(duì)比兩種檢測(cè)用于診斷不同病程患兒的陽(yáng)性檢出率：將病程分為≥7 d 與≤7 d，檢測(cè)兩種病程患兒采用兩種檢測(cè)方式時(shí)陽(yáng)性檢出情況。④對(duì)比兩種檢測(cè)的診斷效能：以臨床病癥結(jié)合胸部X 線(xiàn)檢查作為本次研究的診斷金標(biāo)準(zhǔn)，分析對(duì)比血清學(xué)檢測(cè)與微生物培養(yǎng)的敏感度及特異度，并制作兩種檢測(cè)方法的受試者操作特征（ROC）曲線(xiàn)圖。敏感度=真陽(yáng)性數(shù)/（真陽(yáng)性數(shù)+假陰性數(shù)）×100%；特異度=真陰性數(shù)/（假陽(yáng)性數(shù)+真陰性數(shù)）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用() 表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用[例(%)]表示，行χ2檢驗(yàn)。應(yīng)用ROC 曲線(xiàn)分析敏感度與特異度。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同人群血清學(xué)檢測(cè)、微生物培養(yǎng)結(jié)果經(jīng)臨床病癥結(jié)合胸部X 射線(xiàn)檢查診斷為肺炎支原體感染的64 例觀察組患兒中，血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性患兒有54 例，微生物培養(yǎng)檢測(cè)出陽(yáng)性患兒51 例，血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率高于微生物培養(yǎng)；對(duì)照組健康兒童行血清學(xué)、微生物培養(yǎng)結(jié)果檢測(cè)結(jié)果為陰性。

2.2 不同年齡患兒陽(yáng)性檢出率比較情況血清學(xué)檢測(cè)出1～3歲患兒中陽(yáng)性有13 例，陰性有6 例；同樣檢測(cè)出4～7 歲患兒中有22 例陽(yáng)性，3 例陰性；而8～10 歲患兒中有19 例陽(yáng)性，1 例陰性。微生物培養(yǎng)檢測(cè)出1～3 歲患兒中有陽(yáng)性18 例，陰性1 例；4～7 歲患兒中有陽(yáng)性21 例，陰性4 例；而8～10 歲患兒中陽(yáng)性有12 例，陰性有8 例。其中1～3 歲患兒血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率低于微生物培養(yǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），4～7 歲患兒的血清學(xué)檢測(cè)與微生物培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；8～10 歲患兒血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率高于微生物培養(yǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同年齡患兒陽(yáng)性檢出率比較情況[例(%)]

2.3 兩組不同病程患兒陽(yáng)性檢出率比較情況血清學(xué)檢測(cè)出病程≥7 d 患兒有22 例陽(yáng)性，1 例陰性，血清學(xué)檢測(cè)出病程≤7 d 患兒有32 例陽(yáng)性，9 例陰性；微生物培養(yǎng)檢測(cè)出病程≥7 d 患兒有12 例陽(yáng)性，11 例陰性，微生物培養(yǎng)檢測(cè)出病程≤7 d 患兒有39 例陽(yáng)性，2 例陰性；病程≥7 d患兒的血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率其陽(yáng)性檢出率高于微生物培養(yǎng)，病程≤7d 患兒的血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率低于微生物培養(yǎng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），見(jiàn)表2。

表2 不同病程患兒陽(yáng)性檢出率比較情況[例(%)]

2.4 兩種檢測(cè)方法對(duì)感染患兒的診斷效能血清學(xué)檢測(cè)與微生物培養(yǎng)敏感度、特異度對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表3、表4 及圖1。

圖1 血清學(xué)檢測(cè)、微生物培養(yǎng)診斷效能ROC 曲線(xiàn)圖

表3 兩種檢測(cè)診斷結(jié)果

表4 兩種檢測(cè)診斷效能分析

3 討論

支原體侵入人體后主要作用于機(jī)體呼吸道黏膜，是一種具有活性的原核微生物，黏附于機(jī)體后便可進(jìn)行繁殖。通常以二分裂的方式進(jìn)行繁殖，繁殖初期速度比較慢[5]。因支原體肺炎療程較長(zhǎng)，當(dāng)支原體開(kāi)始大量繁殖后，會(huì)導(dǎo)致病情加重，進(jìn)一步損害機(jī)體。因此，在支原體潛伏期進(jìn)行早期診斷與治療，能夠有效阻斷支原體繁殖，可提高患者臨床療效，減少并發(fā)癥的發(fā)生。

因支原體感染造成的肺炎無(wú)明顯特征性臨床表現(xiàn)，且其影像學(xué)檢測(cè)同樣無(wú)顯著病理特征。因此，其誤診率、漏診率較高[6]。而據(jù)馮志山等[7]在研究微生物快速培養(yǎng)檢測(cè)與快速血清學(xué)檢驗(yàn)診斷小兒肺炎支原體感染的效果分析中提出，血清學(xué)檢測(cè)與微生物培養(yǎng)均可有效診斷支原體感染，是臨床常用于該病的診斷方法。而本研究結(jié)果與該研究觀點(diǎn)一致，說(shuō)明了兩種檢測(cè)方法具有一定診斷意義。而血清學(xué)檢測(cè)是指將血液處理后檢測(cè)機(jī)體血清中各物質(zhì)成分，利用抗體與抗原特異性結(jié)合及其專(zhuān)一性識(shí)別，診斷病毒、細(xì)菌及微生物等。其具有檢測(cè)速度快、操作簡(jiǎn)單便捷且敏感度高的特點(diǎn)。微生物培養(yǎng)則是指在人工配置的培養(yǎng)皿及人為環(huán)境下使微生物生長(zhǎng)繁殖，再借助培養(yǎng)基中顏色變化進(jìn)行診斷，該檢測(cè)方法具有簡(jiǎn)潔性、無(wú)創(chuàng)性及快速性。研究對(duì)比分別采用兩種方法對(duì)3 個(gè)年齡段患兒進(jìn)行檢測(cè)，其結(jié)果可得1～3 歲患兒血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率低于微生物培養(yǎng)，4～7 歲患兒的血清學(xué)檢測(cè)與微生物培養(yǎng)陽(yáng)性檢出率對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；8～10 歲患兒血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率高于微生物培養(yǎng)。分析其原因可能為嬰幼兒機(jī)體防御屏障薄弱，免疫系統(tǒng)發(fā)育不完全，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能下降，容易出現(xiàn)假陰性，從而導(dǎo)致低年齡段患兒采用血清學(xué)檢測(cè)機(jī)體支原體感染效果減弱。而隨著嬰幼兒年齡的增長(zhǎng)，其機(jī)體內(nèi)細(xì)菌、微生物數(shù)量及種類(lèi)均增多，進(jìn)行微生物培養(yǎng)時(shí)極其容易受到機(jī)體其他微生物及菌群的干擾。因此，幼兒年齡增長(zhǎng)后，微生物培養(yǎng)較血清學(xué)檢測(cè)而言，其陽(yáng)性檢出效果明顯降低。另一方面，分別采用兩種檢測(cè)方法對(duì)不同病程患兒進(jìn)行檢測(cè)后，其結(jié)果比較得出病程≥7 d患兒的血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率高于微生物培養(yǎng)，病程≤7 d 患兒的血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率低于微生物培養(yǎng)；血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性檢出率高于微生物培養(yǎng)。分析其原因，可能為患兒發(fā)病初期體內(nèi)抗體生產(chǎn)較少，使得抗原與抗體專(zhuān)一性結(jié)合減少。因此，采用血清學(xué)檢測(cè)病程較短的患兒，其陽(yáng)性檢測(cè)率會(huì)下降。而隨著病程的發(fā)展，機(jī)體免疫防御日漸減弱，導(dǎo)致其他微生物及細(xì)菌侵入機(jī)體，嚴(yán)重干擾了微生物培養(yǎng)檢測(cè)的準(zhǔn)確度，導(dǎo)致其極易出現(xiàn)假陽(yáng)性，故微生物培養(yǎng)檢測(cè)病程較長(zhǎng)患兒，會(huì)導(dǎo)致其陽(yáng)性檢出率降低。另外，ROC 曲線(xiàn)圖結(jié)果分析顯示血清學(xué)檢測(cè)與微生物培養(yǎng)敏感度、特異度對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，證實(shí)了血清學(xué)檢測(cè)與生物學(xué)培養(yǎng)對(duì)支原體感染均有較高的診斷價(jià)值。

綜上所述，采用血清學(xué)檢測(cè)與微生物培養(yǎng)均可有效診斷小兒肺炎支原體感染，微生物培養(yǎng)對(duì)1～3 歲且病程較短的患兒診斷價(jià)值更高，血清學(xué)檢測(cè)診斷應(yīng)用于對(duì)于年齡大、病程長(zhǎng)的患兒效果更顯著。