袁 琳

（建湖縣人民醫(yī)院腫瘤科，江蘇 鹽城 224700）

肺癌作為世界上最常見的腫瘤之一，其在世界上的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，而且通過統(tǒng)計(jì)5 年存活率分析，其態(tài)勢不容樂觀[1]。肺癌從組織學(xué)上分為小細(xì)胞型和非小細(xì)胞型，小細(xì)胞肺癌在肺癌中占小部分，大部分為非小細(xì)胞肺癌（nonsmall-cell lung cancer，NSCLC），非小細(xì)胞肺癌可具體化劃分為鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、大細(xì)胞和未分化的肺癌。近年來，液體活檢技術(shù)受到了廣泛關(guān)注，其代表方法為外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）檢測。CTC 檢測在肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)測中，相比血清腫瘤標(biāo)志物的檢測敏感度較高。但是在特異度方面，CTC 檢測在某些方面不如血清腫瘤標(biāo)志物，如CTC 比神經(jīng)元特異度烯醇化酶（NSE）、糖類抗原125（CA125）、糖類抗原153（CA153）、細(xì)胞角蛋白19 片段（CYFRA21）和鱗狀細(xì)胞癌抗原（SCCA）的特異度好，但是低于癌胚抗原（CEA）的特異度。結(jié)合兩種檢測技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，聯(lián)合檢測不但提高了檢測的敏感度，而且提高了特異度。故而開展本次研究，以期將CTC 和CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 等經(jīng)典肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物與肺癌之間的關(guān)系進(jìn)一步明確下來，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2021 年10 月至2022 年8 月建湖縣人民醫(yī)院收治的60 例符合標(biāo)準(zhǔn)的NSCLC 患者。根據(jù)檢測方法分為A、B、C 組，各20 例。A 組患者男性11 例，女性9 例；年齡44～86 歲，平均年齡（65.23±9.42）歲；腺癌13 例，鱗癌及其他類型7 例。B 組患者男性12 例，女性8 例；年齡45～87 歲，平均年齡（65.85±9.23）歲；腺癌10 例，鱗癌及其他類型10 例。C 組患者男性10 例，女性10 例；年齡44～87 歲，平均年齡（65.28±9.24）歲；腺癌10 例，鱗癌及其他類型10 例。以上3 組患者的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)建湖縣人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及其家屬均簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：①60例患者均已進(jìn)行病理學(xué)檢查并且確診；②血清腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)異常；③未接受其他腫瘤治療方法；④無其他腫瘤史；⑤無其他器官病變。排除標(biāo)準(zhǔn)：①血樣采集過程中出現(xiàn)凝結(jié)血塊者；②精神異?；驘o法正常溝通者。

1.2 檢測方法

1.2.1 循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測 對(duì)本研究中3 組患者進(jìn)行外周血CTC 檢測，采集患者空腹靜脈血5 mL 裝于真空采血管中，使用自動(dòng)化檢測系統(tǒng)（青島博亞澤自動(dòng)化系統(tǒng)有限公司，型號(hào)：LG-11）對(duì)其進(jìn)行檢測，采用免疫磁珠陰性富集技術(shù)分離CTC，利用熒光原位雜交和免疫熒光染色鑒別CTC（熒光原位雜交樣品處理試劑），在熒光顯微鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)CTC 的數(shù)量。CTC≥4 個(gè)為陽性，CTC<4 個(gè)為陰性[2]。

1.2.2 血清腫瘤標(biāo)志物檢測 對(duì)本研究中3 組患者進(jìn)行血清腫瘤標(biāo)志物檢測，采集患者空腹靜脈血5 mL 裝于真空采血管中，離心10 min 后進(jìn)行血清分離，針對(duì)CEA、糖類抗原199（CA199）、CA125、CYFRA-21 水平的檢測所使用的儀器為全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（成都斯馬特科技有限公司，型號(hào)：SMT-680）及其配套試劑，具體的操作步驟和注意事項(xiàng)按照儀器的使用說明和試劑的說明進(jìn)行操作。針對(duì)血清瘤標(biāo)志物的正常值范圍參考以下值：CEA 為0～5 ng/mL、CA125 為0～35 ng/mL、CA199 為0～37 ng/mL、CYFRA-21 為0～3.3 ng/mL，陽性標(biāo)準(zhǔn)為結(jié)果以高于上限值[3]。

1.3 觀察指標(biāo)①比較3 組患者術(shù)后1 周后的循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)量、4 種血清腫瘤標(biāo)志物的含量水平。②比較3 組患者術(shù)后1 周后的循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)量、4 種血清腫瘤標(biāo)志物檢出陽性率。陽性率=陽性例數(shù)/總例數(shù)×100%。③3組診斷效能。以病理學(xué)檢查為金標(biāo)準(zhǔn)，以受試者操作特征（ROC）曲線及曲線下面積將血清腫瘤標(biāo)志物、CTC、血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合CTC 檢測的敏感度、特異度計(jì)算出來。敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%；特異度=真陰性/（真陰性+假陽性）×100%；準(zhǔn)確度=（真陽性+真陰性）/總數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以() 表示，多組間計(jì)量資料比較用F檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用[例(%)]表示，行χ2檢驗(yàn)；以受試者工作特征（ROC）曲線及曲線下面積將CTC、腫瘤標(biāo)志物（CEA、CA199、CA125、CYFRA-21）在復(fù)發(fā)預(yù)測的敏感度、特異度進(jìn)行計(jì)算。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組患者術(shù)后1 周后的循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)量、4 種血清腫瘤標(biāo)志物的含量水平比較C 組患者的CTC、CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 含量水平均高于A 組、B 組，但A 組、B 組患者的CTC、CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 含量水平之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，3 組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 3 組患者術(shù)后1 周后的循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)量、4 種血清腫瘤標(biāo)志物的含量水平比較（）

表1 3 組患者術(shù)后1 周后的循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)量、4 種血清腫瘤標(biāo)志物的含量水平比較（）

2.2 3 組患者術(shù)后1 周后的循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)量、4 種血清腫瘤標(biāo)志物檢出陽性率比較C 組患者的CTC、CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 檢出陽性率均高于A 組、B 組，但A 組、B 組患者的CTC、CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 檢出陽性率之間的差異均不顯著，3 組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 3 組患者術(shù)后1 周后的循環(huán)腫瘤細(xì)胞、4 種血清腫瘤標(biāo)志物檢出陽性率比較[例(%)]

2.3 3 組診斷效能比較ROC 曲線結(jié)果顯示：C 組診斷敏感度、特異度均高于A 組、B 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但A 組、B 組診斷敏感度、特異度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表3、圖1。

表3 3 組診斷效能比較

圖1 3 組診斷效能的ROC 曲線

3 討論

CTC 一般產(chǎn)生于腫瘤原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶，在腫瘤早期的診斷過程中具有很重要的意義。有學(xué)者對(duì)CTC 的檢測進(jìn)行了研究[4]，發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肺癌及良性肺病的患者CTC 陽性率分別為84%和4.2%，通過這項(xiàng)研究也提出了CTC 在肺癌診斷中具有的價(jià)值意義。有學(xué)者在NSCLC 的患者中進(jìn)行研究[5]，其中NSCLC 患者中以肺腺癌為主，而且伴有少數(shù)的肺鱗癌患者，通過研究發(fā)現(xiàn)，其中CEA 含量升高的患者占總數(shù)的63.6%，而CYFRA-21 主要在復(fù)層腫瘤上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中分布，在細(xì)胞死亡的情況下會(huì)在血中溶解，從而提升血液中CYFRA-21 含量。另有文獻(xiàn)報(bào)道[6]，CYFRA-21 能夠?qū)⒒颊邫C(jī)體內(nèi)腫瘤的負(fù)荷量反映出來，在病情嚴(yán)重程度的評(píng)定中可作為參考指標(biāo)。有學(xué)者也有報(bào)道，CEA、CA125、NSE、CYFRA-21 經(jīng)化療后降低，在療效評(píng)估中可作為可靠指標(biāo)[7]。

外周血中能夠檢測到CTC 的NSCLC 患者占總數(shù)的68%左右，同時(shí)，CTC 數(shù)量隨著疾病進(jìn)展不斷增加，而患者預(yù)后隨著CTC 數(shù)量的增加而惡化[8]。另外，CTC 的數(shù)量與肺癌的發(fā)生時(shí)期及轉(zhuǎn)移都有一定的關(guān)聯(lián)性，通過監(jiān)測CTC 的數(shù)量，能夠提高對(duì)肺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移判斷的準(zhǔn)確性。隨著患者病情的發(fā)展，對(duì)其血清腫瘤物進(jìn)行監(jiān)測，并沒有達(dá)到循環(huán)腫瘤細(xì)胞的監(jiān)測效果。

常見CTC 捕獲檢測技術(shù)，超過50 種CTC 檢測技術(shù)已經(jīng)被報(bào)道，不依賴于細(xì)胞表面標(biāo)記的富集技術(shù)或多種富集技術(shù)的融合逐漸成為CTC 富集技術(shù)的主流。國內(nèi)首家CTC活細(xì)胞捕獲儀器Nextctc，主要通過納米微流控系統(tǒng)技術(shù)進(jìn)行非抗體依賴的循環(huán)腫瘤活細(xì)胞捕獲，利用CTC 核質(zhì)比和電荷特性（負(fù)電性）等生物特性，采用納米微流控技術(shù)，不依賴于抗體的自動(dòng)捕獲CTC 活細(xì)胞技術(shù)。Nextctc 可以有效分離出包括EpCAM+/CK+陽性上皮來源、間質(zhì)類、干細(xì)胞來源的CTC，與現(xiàn)有商業(yè)化儀器相比，具有更高敏感度和特異度。在惡性腫瘤治療方面，盡早發(fā)現(xiàn)、盡早診斷、盡早治療十分重要，對(duì)病情的控制與治療效果至關(guān)重要，手術(shù)作為治療惡性腫瘤方面最常用且最基礎(chǔ)的手段，治療效果較好，一般運(yùn)用多種輔助手段，包括生物治療、放療、化療、靶向治療等，雖然能夠減輕疼痛、延長壽命、改善生活質(zhì)量，使一部分患者從中獲益，但是也帶來了一些副作用。如存在術(shù)后癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象，轉(zhuǎn)移的病患概率約為50%，對(duì)患者的生命安全產(chǎn)生極大的威脅。因此，在惡性腫瘤患者進(jìn)行手術(shù)后，應(yīng)及時(shí)監(jiān)測原腫瘤部位，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和治療復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況，盡早進(jìn)行干預(yù)治療，降低術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。

有研究表明[9]，CEA、NSE、CA125、CA153、CYFRA21-1、SCCA 聯(lián)合檢測的敏感度為94.3%，高于CTC 檢測的敏感度77.1%。本研究結(jié)果表明，C 組患者的CTC、CEA、CA199、CA125、CYFRA-21 含量水平及檢出陽性率均高于A 組、B 組，C 組診斷敏感度、特異度均高于A 組、B組（P<0.05），和上述研究結(jié)果一致。通過本研究應(yīng)用動(dòng)態(tài)監(jiān)測循環(huán)腫瘤細(xì)胞聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物的變化對(duì)肺癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)測的檢測方式，更有效和準(zhǔn)確地預(yù)測肺癌患者的術(shù)后癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的問題，為廣大肺癌患者樹立了治療的信心，并且通過減少其他檢查項(xiàng)目，降低了患者的費(fèi)用，對(duì)社會(huì)和患者有重要的影響作用。

綜上所述，腫瘤患者術(shù)后發(fā)生復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的預(yù)測中CTC聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物檢測的評(píng)估效能高于單獨(dú)CTC、血清腫瘤標(biāo)志物檢測。