劉 婷，武建明，姚 亮，佟艷會，戚應杰*

[1.中國科學技術(shù)大學附屬第一醫(yī)院（安徽省立醫(yī)院）感染病院，安徽 合肥 230000；2.山東見微生物科技有限公司，山東 濟南 250100]

丙型肝炎（簡稱丙肝）病毒（hepatitis C virus，HCV）感染遍及全球，中國約有1 000 萬感染者[1-2]，但由于其感染具隱匿性，造成我國HCV 感染的診斷率較低，仍有70%以上的HCV 感染者沒有被發(fā)現(xiàn)[3]。直接抗病毒藥物（direct-acting antivirals，DAAs）可以使90%以上的丙肝患者得到治愈，因此，對丙肝病毒感染者進行正確診斷尤為重要。血清HCV-RNA 檢測是確診HCV 感染的金標準[4]，對于急性HCV 感染窗口期患者、免疫抑制（如艾滋病、惡性腫瘤化學治療、造血干細胞移植、實體器官移植、血液透析、全身應用糖皮質(zhì)激素等）患者能有效檢出，同時也可作為抗病毒治療療效判斷的指標，可指導抗病毒治療及療效判定[1,5]。但不同廠家試劑核酸提取方法、引物探針特異性及擴增反應體系等都不同，導致試劑敏感度、特異度相差很大，因此對于臨床樣本的陽性判斷、臨床診療方法的制訂、患者停藥標準都有差異[4]。近幾年，國內(nèi)外發(fā)布的行業(yè)指南中就強調(diào)在治療前評估、治療監(jiān)測和治療終點判定，均采用敏感的檢查方法（檢查下限≤15 IU/mL）檢查血清或血漿HCV-RNA[1,5-9]?，F(xiàn)階段國產(chǎn)普敏試劑敏感度無法滿足各指南對于檢測下限的要求，而進口高敏試劑價格較高，增加了患者的負擔，因此國內(nèi)試劑廠商開發(fā)出國產(chǎn)高敏HCV-RNA 定量檢測試劑。本研究中對臨床樣本進行國產(chǎn)高靈敏的HCV-RNA 核酸定量檢測試劑與國產(chǎn)普敏HCV-RNA 定量檢測試劑的一致性分析，對稀釋的低濃度樣本進行國產(chǎn)高靈敏的HCV-RNA 核酸定量檢測試劑與進口高敏HCV-RNA 定量試劑的一致性分析，現(xiàn)報道如下。

式中：Qc為頻率為P的泥石流峰值流量，m3/s；1+Φ為修正系數(shù)，據(jù)表3取1.919；Qp為頻率為P暴雨洪峰流量，m3/s；Dc為堵塞系數(shù)，按勘查規(guī)范表I.1查表確定。

1 材料與方法

1.1 研究對象收集2021 年1 月至9 月中國科學技術(shù)大學附屬第一醫(yī)院臨床診斷為丙肝的患者血液標本165 例，所有患者診斷標準符合《丙型肝炎防治指南（2019 年版）》[1]。所選擇的患者均為單一HCV 感染，排除其他肝炎病毒或原因引起的肝病。納入標準：①有HCV 感染流行病學史；②臨床表現(xiàn)：有全身乏力、食欲減退、惡心和右季肋部疼痛等，少數(shù)伴低熱，輕度肝腫大，部分患者可出現(xiàn)脾腫大，少數(shù)患者可出現(xiàn)黃疸；③抗HCV 和（或）HCV-RNA 陽性。排除標準：①其他病毒性肝炎；②自身免疫性疾病合并抗HCV 陽性；③合并其他感染、腫瘤、炎癥等疾病。樣本離心后保存于-80 ℃。稀釋樣本制備，方法如下：選擇一例臨床樣本（濃度2.42×104IU/mL，COBAS Ampliprep/COBAS TaqMan HCV test.Version2.0 試劑定量）。采用陰性血清稀釋成濃度為（15～500 IU/mL）的樣本60 例。本研究已獲安徽省立醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

越來越多研究發(fā)現(xiàn)Corin存在于許多組織器官中，尤其在心肌組織中表達顯著?？杉せ顭o活性的利鈉肽系統(tǒng)，抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)，從而發(fā)揮排鈉利尿、舒張血管、調(diào)節(jié)血容量及改善心功能等生理作用。目前認為，Corin與心血管疾病(高血壓、冠心病、心力衰竭、房顫)的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，可作為心血管疾病診療及預后的生物學標志物。隨著研究進一步深入，Corin可能與心血管疾病相關(guān)疾病(腎臟疾病、糖尿病等)存在相關(guān)性。將有更多研究探索Corin的生物學及在心血管疾病中作用，為未來將Corin和利鈉肽研究結(jié)果用于心血管疾病治療奠定理論基礎。

1.2 試劑與儀器試劑A（國產(chǎn)高敏）定量檢測系統(tǒng)采用GBead 全自動核酸純化儀（山東見微生物科技有限公司，魯濟械備20170071 號，型號：GBead），標本用量200 μL；擴增試劑為丙型肝炎病毒核酸檢測試劑，配套擴增試劑使用核酸提取試劑盒（山東見微生物科技有限公司，國械注準2019340620）。試劑B（國產(chǎn)普敏）定量檢測系統(tǒng)采用丙型肝炎病毒核酸檢測試劑盒（廈門安普利生物工程有限公司，國械注準20173404605），全自動醫(yī)用聚合酶鏈反應（PCR）分析系統(tǒng)GeneLight9820（廈門安普利生物工程有限公司，國械注準20153402340）。兩種試劑盒檢測方法的基本原理一致，均通過熒光定量PCR 技術(shù)進行丙肝患者HCV 病毒載量的檢查。擴增儀采用ABI 7500實時熒光定量PCR 儀（Applied Biosystems 公司，型號：20163220767）。試劑C（進口高敏，羅氏診斷產(chǎn)品有限公司，國械注進20173400863）：COBAS Ampliprep/COBAS TaqMan HCV Quantitative test.Version2.0。三種試劑按照各自說明書進行結(jié)果判讀，當報告“未檢測到靶標”時結(jié)果判斷為陰性；當報告“

表1 兩種HCV-RNA 實時熒光定量PCR 試劑盒特征比較

2.2 試劑A/試劑B 臨床樣本檢測結(jié)果比較

2.2.2 一致性分析 165 例樣本中試劑A 與試劑B 在檢驗濃度<500 IU/mL 時，分別是77 例、78 例；濃度在5.0×102～5.0×104IU/mL 時分別是10 例、11 例；濃度在5.0×104～5.0×106IU/mL 分別是69 例、61 例；濃度>5.0×106IU/mL 分別是9 例、15 例，見表4。對于試劑A 與試劑B 定量值均≥500 IU/mL 的樣本，采用Bland-Altman 分析試劑A 與試劑B 定量值的差值均值為-0.032 6 log10IU/mL，95%置信區(qū)間為（-0.462 6～0.397 4）log10IU/mL，95.40%（83/87）的樣本檢測值在95%可信區(qū)，見圖2。但有4 例樣本不在95%置信區(qū)間內(nèi)。對這4 例樣本進行C試劑復測（表5 b～e 號樣本），結(jié)果顯示試劑A 與試劑C檢測的b、c、d、e 樣本對數(shù)偏差值均小于試劑B 檢測的b、c、d、e 樣本對數(shù)偏差值。

2.1.2 系統(tǒng)精密度 分別檢測康徹思坦HCV-RNA 系列血清（液體）標準物質(zhì)2.2×103IU/mL、4.4×105IU/mL 各10例，計算絕對偏差與變異系數(shù)CV，符合試劑A 中性能說明，見表2。

2 結(jié)果

因為時代在不斷變化，所以“互聯(lián)網(wǎng)+”模式下的人力資源管理相比較傳統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)會發(fā)生較大的改變，整體的組織結(jié)構(gòu)會更加扁平化，還可能會有一些新的組織形式不斷出現(xiàn)。所以人力資源管理者要不斷跟隨時代的變化，并且及時進行調(diào)整。

2.1.1 系統(tǒng)線性 濃度的理論對數(shù)值為X 軸，實測對數(shù)值為Y 軸，進行線性擬合，見圖1，線性方程為Y=1.011 4X-0.040 4，R2=0.999 9，符合考核試劑盒A 中性能說明。

圖1 試劑A 系統(tǒng)線性擬合

1.4 統(tǒng)計學分析用Excel 對數(shù)據(jù)進行整理，將HCVRNA 病毒載量對數(shù)轉(zhuǎn)換（log10IU/mL），通過SPSS22.0統(tǒng)計學軟件進行Bland-Altman 模型分析A/B 檢測試劑、A/C 檢驗試劑檢測結(jié)果的一致性。試劑A/B 檢出率進行χ2檢驗。

表2 試劑A 檢測系統(tǒng)精密度

1.3 檢測方法樣本檢測前校準試劑A 與儀器：使用試劑A 檢測康徹思坦生物科技有限公司的HCV-RNA 系列血清（液體）標準物質(zhì)GBW(E)090140、GBW(E)090142，計算線性擬合、絕對偏差和變異系數(shù)；將試劑B 檢測的165 例血清樣本，采用試劑A 進行檢測，對在Bland-Altman 分析中兩種試劑95%置信區(qū)間內(nèi)的樣本，采用試劑C 進行復測；以60 例稀釋濃度為50～500 IU/mL 的樣本，分別采用試劑A 與試劑C 進行病毒定量檢測，各試劑檢測方法按照試劑盒說明書標準步驟進行檢測。

2.3 試劑A/試劑C 稀釋樣本檢測結(jié)果比較

表3 試劑A/試劑B HCV-RNA 核酸檢測試劑檢測結(jié)果比較

一個青年人在思想上是否成熟，要看他是否有自我創(chuàng)造的自覺意識和有效結(jié)果，能不能通過自我創(chuàng)造過程，把外來的知識信息、資源條件轉(zhuǎn)換成自我創(chuàng)造的要素，完成社會性自我身心的創(chuàng)造。大學教育與中小學教育相比，青年自我創(chuàng)造的成分越來越突出。如果處在大學教育的關(guān)鍵階段，缺乏必要的自我創(chuàng)造意識，會是一個嚴重的問題。以往普遍存在的被動灌輸式教育壓抑了學生的創(chuàng)造力，使之忘記自己是創(chuàng)造的主體。而沒有自我創(chuàng)造的意識，就不能培養(yǎng)人的創(chuàng)造力。我們走向一個新時代，要使中華民族創(chuàng)造力煥發(fā)出來，青年在成長中就要培養(yǎng)自我創(chuàng)造的意識。

圖2 試劑A 與試劑B 一致性分析

表4 165 例不同濃度樣本試劑A 與試劑B 的檢出率分布例數(shù)/總例數(shù)（%）

表5 5 例差異樣本試劑A、試劑B、試劑C 檢測濃度（log10IU/mL）與對數(shù)偏差絕對值

2.2.1 檢測結(jié)果 本研究中共收集試劑B 檢測的血清樣本165 例，試劑B 檢測結(jié)果分布為：低于檢測下限即<500 IU/mL 的標本78 例，占47.27%（78/165）；500～5.0×108IU/mL 的標本87 例，檢出率52.73%（87/165）。使用試劑A 檢測結(jié)果分布為：低于檢測下限即<15 IU/mL 的標本77 例，占46.67%（77/165）；30～1.0×109IU/mL 的標本88 例，檢出53.33%（88/165），見表3。檢驗統(tǒng)計量χ2=1，小于界值χ20.05,1=3.84，得出P>0.05，可以認為兩者檢出率差異無統(tǒng)計學意義。但有1 例臨床樣本試劑B 檢測為<500 IU/mL，根據(jù)安徽省立醫(yī)院感染病院試劑B 的檢驗結(jié)果解釋，“檢驗結(jié)果<500 IU/mL，判斷為陰性或濃度低于檢測下限，報告為<500 IU/mL”，但這例樣本采用試劑A 檢測結(jié)果為4.45×106IU/mL。相差較大，因此對這例樣本采用進口高敏試劑C 進行復測，結(jié)果顯示為2.14×106IU/mL（表5 中的樣本a）。

2.3.1 檢測結(jié)果 本研究中以試劑C 檢測結(jié)果的2.42×104IU/mL 樣本，隨機稀釋濃度為50～500 IU/mL（60例），試劑A 檢測結(jié)果與試劑C 檢測結(jié)果分布，見表6。

2.1 試劑A 校準結(jié)果對試劑A 采用試劑盒參考品進行線性范圍限定，采用北京康徹思坦生物科技有限公司的HCV-RNA 系列血清（液體）標準物質(zhì)進行準確度驗證。

表6 60 例隨機稀釋濃度樣本試劑A 與試劑C 的檢出率分布[例(%)]

2.3.2 一致性分析 對于試劑A 與試劑C 定量值均≥500 IU/mL 的樣本，采用Bland-Altman 分析，試劑A 與試劑C 定量值差值均值為0.180 0 log10IU/mL，95%置信區(qū)間為（-0.090 7～0.450 6）log10IU/mL，96.67%（58/60）的樣本檢測值在95%置信區(qū)間內(nèi)，見圖3。這提示國產(chǎn)高敏試劑A 與進口高敏試劑C 在15～500 IU/mL 濃度內(nèi)，具有高度一致性。

②晴雯聽了這話，不覺又傷起心來，含淚說道：“為什么我出去？要嫌我，變著法兒打發(fā)我出去，也不能夠。”(第三十一回)

圖3 試劑A 與試劑C 一致性分析

3 討論

HCV-RNA 定量檢測試劑已廣泛應用于丙肝患者的臨床確診、抗病毒治療療效判斷中，目前在各臨床單位，主要應用的有進口高敏和國產(chǎn)普敏的HCV-RNA 定量檢測試劑盒[10]。進口高敏試劑價格以當前各地物價中位數(shù)計，為540.5 元，國產(chǎn)普敏試劑價格中位數(shù)為135 元，但進口高敏HCV-RNA 檢測試劑的敏感度、線性范圍等均優(yōu)于國產(chǎn)普通敏感度試劑，有利于正確指導患者治療方案的制定和評價療效[11]?；谥T多因素，開發(fā)國產(chǎn)高敏HCV-RNA 檢測試劑盒，因其即具有進口高敏試劑在敏感度上的優(yōu)勢，又具有相對低的價格，具有重要的實用意義。

鑒于各試劑廠商試劑與儀器研發(fā)能力的差異，國內(nèi)能開發(fā)高敏HCV-RNA 檢測試劑盒的廠家并不多。在本次試驗中，國產(chǎn)高敏試劑A 分別與國產(chǎn)普敏試劑B 進行了檢出率的比較與一致性的分析，雖然檢出率上看兩種試劑差異無統(tǒng)計學意義，但從其中差異樣本復測結(jié)果看，可以確定普敏試劑B 漏檢了1 例高濃度的陽性樣本，導致核酸漏檢的原因既可能來自于樣本特殊性（如溶血、脂血、藥血等），同時也不排除檢測過程中的人為誤差或系統(tǒng)本身的誤差造成。對國產(chǎn)高敏試劑A 與國產(chǎn)普敏試劑B 檢測的87例定值樣本進行Bland-Altman 一致性分析，試劑A 與試劑B 定量值差值均值為-0.032 6 log10IU/mL，95%置信區(qū)間為（-0.462 6～0.397 4）log10IU/mL，95.40%（83/87）的樣本檢測值在95%置信區(qū)間內(nèi)。但有4例樣本不在95%置信區(qū)間內(nèi)。對這4 例樣本進行進口高敏試劑C 復測，結(jié)果顯示國產(chǎn)高敏試劑與進口高敏試劑結(jié)果偏差分別為0.69 log10IU/mL、0.30 log10IU/mL、0.07 log10IU/mL、0.21 log10IU/mL，而相同樣本國產(chǎn)普敏與進口高敏偏差值分別為1.17 log10IU/mL、0.75 log10IU/mL、0.51 log10IU/mL、0.63 log10IU/mL，顯然，國產(chǎn)高敏試劑A 的定量值與進口高敏試劑C 定量值更為接近。HCV 在患者體內(nèi)具有較高的復制水平，病毒復制動力學與宿主免疫應答的產(chǎn)生存在時間上的差異[12]。因此HCV 病毒確診患者載量通常很高，雖然窗口期感染者和經(jīng)治后期患者病毒載量通常很低，但安徽省立醫(yī)院感染病院作為感染病治療醫(yī)院，收治的均是確診患者，DAA 藥物目前持續(xù)病毒學應答（Sustained virological response，SVR）已達到90%以上[13]，所以安徽省立醫(yī)院感染病院實驗室遇到≤500 IU/mL 的HCV 臨床樣本相對較少，因此在進行國產(chǎn)高敏試劑A 與進口高敏試劑C 一致性分析時采用稀釋樣本（15～500 IU/mL）進行一致性分析，結(jié)果顯示國產(chǎn)與進口高敏試劑定量值差值均值為0.180 0 log10IU/mL，95%置信區(qū)間為（-0.090 7～0.450 6）log10IU/mL，96.67%（58/60）的樣本檢測值在95%置信區(qū)間內(nèi)，說明國產(chǎn)高敏試劑和進口高敏試劑具有較高的一致性。

由于早期HCV 感染少有臨床癥狀，所以這些患者多數(shù)是在進行入院常規(guī)檢查的時候進行抗體篩查發(fā)現(xiàn)的，再由感染科醫(yī)生會診，檢查HCV-RNA 陽性，來確診丙肝感染。因此，敏感度高的核酸檢測方法，對確診HCV-RNA陽性尤為重要，否則可能導致患者大量流失。有研究選取14 個?。ㄗ灾螀^(qū)、直轄市）56 個縣區(qū)的二級及以上醫(yī)院進行HCV 診斷及治療情況分析，顯示HCV-RNA 檢測率僅為34.9%[14]。治療方面，近年來由于直接抗病毒（DAA）藥物的出現(xiàn)大大提高了治療率，國內(nèi)常見的1b、2a 型丙肝患者可得到治愈[15]。因而，確診HCV 感染、識別無癥狀感染或者抗-HCV 陰性的HCV 感染者、監(jiān)測DAA 用藥療效，對HCV-RNA 檢查的敏感度提出了更高的要求[16]。鑒于進口高敏感度核酸檢測試劑的成本高，而當前國產(chǎn)高敏試劑性能不斷提高，因此，建議采用國產(chǎn)高敏感度HCV-RNA 檢測試劑進行治療前評估、治療監(jiān)測和治療終點判定的定量檢測。