陳多菲 徐暢 劉文佳 張俐敏 莫繼先

摘要：為發(fā)掘具有優(yōu)秀促生能力的東北地區(qū)水稻根際促生菌（PGPR）資源，通過選擇性培養(yǎng)基篩選，對菌株促生特性與能力定量分析，確定目標(biāo)菌株并進(jìn)行鑒定，通過盆栽試驗(yàn)分析其促生效應(yīng)。在篩選出的5株解磷菌、3株解鉀菌、3株自生固氮菌中，菌株R8具有較強(qiáng)的解磷、合成鐵載體、分泌赤霉素的能力；菌株K25具有較強(qiáng)的解鉀、分泌吲哚乙酸能力；菌株N2具有較強(qiáng)的固氮能力。經(jīng)鑒定，菌株R8、K25、N2分別為Pantoea eucalypti、Enterobacter sichuanensis、Bacillus zanthoxyli。3株菌株對水稻幼苗均具有顯著的促生作用和定殖于水稻根際的能力。混菌促生試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，T3（K25+N2）、T4（R8+K25+N2）混菌處理組在水稻幼苗的生物量積累、地上部與根系生長、根系形態(tài)結(jié)構(gòu)等方面表現(xiàn)出較好的促生效果?；炀M對水稻幼苗的促生作用優(yōu)于單菌組，具有研發(fā)制備微生物肥料的潛力。

關(guān)鍵詞：水稻；根際促生菌；鑒定；促生特性；促生作用

中圖分類號：S182? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2023）24-0196-07

水稻是我國三大主要糧食作物之一，在糧食生產(chǎn)與消費(fèi)中占據(jù)主導(dǎo)地位，全國約有65%以上的國民以稻米作為口糧［1］。2011年以來，我國稻谷產(chǎn)量連續(xù)11年穩(wěn)定在2億t以上，種植面積穩(wěn)定在 3 000萬hm2 左右，對保障國家糧食安全和促進(jìn)社會經(jīng)濟(jì)平穩(wěn)發(fā)展發(fā)揮了巨大作用［2］。在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中，化肥和農(nóng)藥是提高作物產(chǎn)量的重要生產(chǎn)資料［3］。有數(shù)據(jù)表明，1980年以來我國在水稻種植方面的化肥使用量顯著增加；化肥對農(nóng)作物產(chǎn)量的提升作用顯著，但增產(chǎn)趨勢在逐漸減弱［4］。在糧食生產(chǎn)過程中，對化肥的過度依賴及過量、盲目、不科學(xué)施用，不僅無法達(dá)到增產(chǎn)目的，還會降低農(nóng)作物品質(zhì)，造成土壤肥力下降，耕地退化，土壤板結(jié)、酸化，土壤微生物群落結(jié)構(gòu)惡化以及地下水、農(nóng)田環(huán)境污染等危害，不利于農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。2014年，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部提出“到2020年化肥、農(nóng)藥使用量零增長行動方案”的“雙減”政策。微生物菌肥因其綠色、安全、高效、環(huán)保等特點(diǎn)，受到廣泛的關(guān)注與研究［5］。微生物菌肥是近年來發(fā)展起來的一種新型肥料，含有大量有益活性微生物，能通過微生物的特定活動為植物提供營養(yǎng)，調(diào)節(jié)植物生長［6］。微生物菌肥應(yīng)用于水稻生產(chǎn)，不僅能提高水稻產(chǎn)量，還能提高土壤肥力，提升水稻品質(zhì)，提高化肥有效利用率，減少環(huán)境污染等，有利于綠色農(nóng)業(yè)的發(fā)展［7］。

植物根際促生菌（PGPR）是微生物肥料中促進(jìn)農(nóng)作物生長發(fā)育的關(guān)鍵成分，也是其重要的菌種來源［8］。PGPR的應(yīng)用被廣泛認(rèn)為是促進(jìn)綠色農(nóng)業(yè)發(fā)展的一種可行策略。PGPR具有直接或間接促進(jìn)植物生長的能力［9］。通常由PGPR直接轉(zhuǎn)化養(yǎng)分，如固氮、溶磷、解鉀作用；或通過分泌代謝產(chǎn)物［如胞外多糖、有機(jī)酸、1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸（ACC）脫氨酶、吲哚乙酸、赤霉素、鐵載體等］供植物吸收利用，進(jìn)而影響植物應(yīng)激反應(yīng)［9］；或通過幫助植物抵抗細(xì)菌等病原體的侵害以及誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，間接促進(jìn)植物生長［8，10］。因此，篩選具有優(yōu)秀促生潛力的PGPR并開發(fā)高效PGPR菌劑，已成為當(dāng)前國內(nèi)外研究熱點(diǎn)之一［11］。近年來國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，水稻根際促生菌對促進(jìn)水稻生長發(fā)育、提高水稻產(chǎn)量方面具有良好的正向作用。楊華等通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，篩選的水稻根際促生菌中，C7-1、20-10、L26、S11-11、GYM-bt5對水稻的種子發(fā)芽率、根系、莖的生長以及分蘗方面具有不同程度的提升［12］。戚秀秀等研究發(fā)現(xiàn)，在水稻育苗基質(zhì)中添加解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）LY11，對水稻幼苗地上部生物量、根系活力、氮磷鉀養(yǎng)分吸收的提升效果顯著，并促進(jìn)秧苗生長，提高其代謝活性［13］。還有研究表明，菌株組合的應(yīng)用效果優(yōu)于單一菌株。Sun等通過田間試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，膠凍樣芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）與黑曲霉（Aspergillus niger）聯(lián)合施用，對改善土壤微生物數(shù)量與結(jié)構(gòu)、土壤酶活性、植物總養(yǎng)分含量及水稻產(chǎn)量有顯著效果，且優(yōu)于單獨(dú)施用［14］。自2000年我國開始微生物菌肥登記以來，登記數(shù)量逐年增加，尤其在2015—2018年，登記產(chǎn)品數(shù)量快速攀升［15］。但目前適用于東北地區(qū)的水稻生長特性、土壤性質(zhì)的微生物菌肥數(shù)量和水稻根際促生菌的相關(guān)研究報道較少。本研究從黑龍江省齊齊哈爾市水稻根際土壤中篩選出多株水稻根際促生菌，對其養(yǎng)分轉(zhuǎn)化能力、植物激素分泌能力進(jìn)行定量測定，并對優(yōu)良菌株進(jìn)行種屬鑒定，對單一菌株與復(fù)合菌株在水稻幼苗和根系發(fā)揮的促生效應(yīng)進(jìn)行探究，旨在為適宜當(dāng)?shù)厮臼┯玫奈⑸锓柿祥_發(fā)和應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)與技術(shù)支持。

1 材料與方法

水稻根際土壤采樣于黑龍江省齊齊哈爾市的一處稻田（47°21′16″ N，123°55′ 6″ E），種植水稻品種為墾稻19。本試驗(yàn)采用的水稻品種為綏稻616，水稻育苗基質(zhì)為市售（氮、磷、鉀含量≥2%，有機(jī)物總量≥28%）。

1.1 培養(yǎng)基配方

LB 培養(yǎng)基（1 L）：含酵母浸膏粉5.0 g、NaCl 10.0 g、蛋白胨10.0 g，pH值為7.0。PKO無機(jī)磷培養(yǎng)基（1 L）：含葡萄糖10.0 g、MgSO4·7H2O 0.3 g、（NH4）2SO4 0.5 g、NaCl 0.3 g、Ca3（PO4）2 2.0 g、KCl 0.3 g、MnSO4·H2O 0.03 g、FeSO4·7H2O 0.036 g，pH值為7.0。亞歷山大羅夫培養(yǎng)基（1 L）：含蔗糖 5.0 g、Na2HPO4 2.0 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、CaCO3 0.1 g、FeCl3·6H2O 0.005 g、鉀長石粉1.0 g，pH值為7.0。無氮培養(yǎng)基（1 L）：含甘露醇10.0 g、KH2PO4 0.2 g、MgSO4 ·7H2O 0.005 g、NaCl 0. 2 g、CaSO4·2H2O 0.1 g、CaCO3 5.0 g，pH值為7.2。MKB培養(yǎng)基（1 L）：含酪蛋白氨基酸5.0 g、甘油15.0 mL、K2HPO4 2.5 g、MgSO4·7H2O 0.2 g，pH值為7.0。

固體培養(yǎng)基為1 L液體培養(yǎng)基加瓊脂20.0 g。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 PGPR的篩選

將水稻根系上的大塊土壤抖落，無菌水涮下根表附著土壤，離心后取1 g，與 9 mL 無菌水在裝有玻璃珠的錐形瓶中配制成土壤懸液，30 ℃、140 r/min振蕩2 h。梯度稀釋至10-4、10-5、10-6濃度，分別吸取0.1 mL涂布在PKO無機(jī)磷培養(yǎng)基平板（解磷菌篩選）、亞歷山大羅夫培養(yǎng)基平板（解鉀菌篩選）。30 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5 d。根據(jù)解磷圈、解鉀圈大小，篩選優(yōu)勢菌株，進(jìn)行分離純化多代后，保藏備用。采用富集純化法［16］分離高效固氮菌株。取10 g離心后的根際土壤加入90 mL液體無氮培養(yǎng)基中，30 ℃、140 r/min培養(yǎng)5 d，取1%培養(yǎng)物，接種到100 mL液體無氮培養(yǎng)基中進(jìn)一步培養(yǎng)，之后每2 d轉(zhuǎn)接1次。重復(fù)轉(zhuǎn)接4次后，梯度稀釋并涂布在固體無氮培養(yǎng)基平板上篩選、純化菌株后，保藏備用。

1.2.2 促生特性能力測定

采用鉬銻抗比色法［17］測定菌株解磷能力；采用火焰原子分光光度計(jì)法［18］測定菌株解鉀能力；采用碳氮分析儀測定菌株固氮能力；采用濃硫酸反應(yīng)法［19］測定菌株分泌赤霉素能力；采用Salkowski比色液比色法［20］測定菌株分泌吲哚乙酸能力；采用CAS檢測液檢測法［21］測定菌株鐵載體合成能力。每組均設(shè)3次重復(fù)。

1.2.3 菌種鑒定

菌株形態(tài)學(xué)鑒定與生理生化試驗(yàn)方法參考《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》［22］進(jìn)行操作。16S rDNA測序工作由上海生工生物工程公司進(jìn)行，采用通用引物27F（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′）和1492R（5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。將測序結(jié)果于EzBioCloud數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源性比對，使用MEGA 7.0軟件及Neighbor-Joining法構(gòu)建菌株系統(tǒng)進(jìn)化樹。將測得序列批量上傳至GenBank獲得菌株登錄號。

1.2.4 菌株生長曲線測定

將保藏的菌株分別接種于50 mL的LB液體培養(yǎng)基，30 ℃、140 r/min振蕩培養(yǎng)16 h活化后，轉(zhuǎn)接至100 mL的LB液體培養(yǎng)基中，同條件下培養(yǎng)24 h，每隔2 h測定吸光度（D600 nm），繪制各株菌生長曲線。

1.2.5 浸種促生試驗(yàn)

用3.5%次氯酸鈉溶液將水稻種子消毒5 min，再用75%乙醇消毒5 min，無菌水洗凈。分別用無菌水、3種供試菌株菌懸液（D600 nm=0.5）浸種24 h。將水稻種子轉(zhuǎn)至無菌且鋪有雙層濾紙的培養(yǎng)皿中，每皿放20粒種子，每組設(shè)3次重復(fù)。在30 ℃、濕度60%的氣候箱中培養(yǎng)，7 d后測量水稻種子胚根長、芽長、苗鮮質(zhì)量及苗干質(zhì)量［23］。

1.2.6 定殖試驗(yàn)

將水稻種子消毒（方法同“1.2.5”節(jié)）后，28 ℃浸泡2 d，每12 h換水1次。用紗布包裹種子，28 ℃催芽24 h，中間用無菌水沖洗1次。挑取萌發(fā)程度相近的種子，無菌操作轉(zhuǎn)移至已滅菌裝有石英砂、20 mL 1/4MS營養(yǎng)液的大試管中，每管轉(zhuǎn)入3株幼苗，28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)7 d后，加入D600 nm=0.5的各菌株菌懸液5 mL，同條件繼續(xù)培養(yǎng)7 d，期間定期澆灌等量1/4MS營養(yǎng)液。7 d 后將水稻苗取出，抖凈石英砂，稱取0.1 g水稻根，加入含10 mL無菌水的錐形瓶，140 r/min渦旋振蕩30 min后，梯度稀釋涂布于LB平板，30 ℃培養(yǎng)2 d后計(jì)數(shù)，每組3次重復(fù)［24］。

1.2.7 水稻幼苗盆栽促生試驗(yàn)

試驗(yàn)共設(shè)8個處理組，分別為：CK（無菌水）、R8、K25、N2、T1（R8+K25，1：1）、T2（R8+N2，1 ∶1）、T3（K25+N2，1 ∶1）、T4（R8+K25+N2，1 ∶1 ∶1）。將催芽后萌發(fā)程度相近的水稻種子均勻播種后，將50 mL菌懸液（D600 nm=0.5）均勻噴灑于土壤表面。覆土 0.2 cm 并噴灑無菌水至基質(zhì)含水量達(dá)到飽和狀態(tài)。每個處理重復(fù)5次。在相同室溫環(huán)境條件下，各處理隨機(jī)擺放，并定時隨機(jī)調(diào)整擺放位置，定期補(bǔ)充等量水分。21 d后采樣，測定水稻幼苗株高、莖粗、全株干質(zhì)量、根干質(zhì)量、根系總長、根總表面積、根總體積、根平均直徑、根尖數(shù)。根系相關(guān)指標(biāo)使用根系分析儀（Scan Maker i800 plus）及根系分析軟件（Scan Wizard EZ）測定并分析。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 26軟件進(jìn)行單因素方差分析，各試驗(yàn)組間數(shù)據(jù)差異用Duncans法進(jìn)行檢驗(yàn)（α=0.05）。采用Origin 2021繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 PGPR促生特性能力測定

從水稻根際土壤中初步篩選出80株根際促生菌，其中5株具有溶解無機(jī)磷能力、3株具有解鉀能力、3株具有固氮能力。對其促生特性能力進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。其中解磷能力最強(qiáng)的菌株為R8，7 d 發(fā)酵液中有效磷含量為33.94 μg/mL（磷標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=1.530 6x-0.058 4，r2=0.991 9）。解鉀能力最強(qiáng)的菌株為K25，7 d發(fā)酵液中K+含量為 2.62 μg/mL。固氮能力最強(qiáng)的菌株為N2，7 d發(fā)酵液中N元素含量為3.05 μg/mL。在后續(xù)促生特性能力測定中發(fā)現(xiàn)，5株菌株具有產(chǎn)吲哚乙酸的能力，其中能力最強(qiáng)的菌株為K25，2 d發(fā)酵液中吲哚乙酸濃度達(dá)到93.87μg/mL（吲哚乙酸標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.000 5x+0.005 4，r2=0.990 9）；9株菌株具有合成鐵載體的能力，其中能力最強(qiáng)的菌株為R8，2 d發(fā)酵液中鐵載體活性為56.97%；2株菌株具有分泌赤霉素的能力，其中能力最強(qiáng)的菌株為R8，2 d發(fā)酵液中赤霉素濃度為8.13 μg/mL（赤霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.060 5x+0.030 0，r2=0.990 5）。

2.2 確定目標(biāo)菌株

從各菌株促生特性能力強(qiáng)弱以及功能多樣性的角度綜合分析，菌株R8具有最強(qiáng)的解磷和合成鐵載體能力，且具有產(chǎn)吲哚乙酸、赤霉素能力；菌株K25具有最強(qiáng)的解鉀能力、最強(qiáng)的產(chǎn)吲哚乙酸能力且可以合成鐵載體；菌株N2有最強(qiáng)的固氮能力且具有合成鐵載體的能力。所以選取此3株P(guān)GPR為目標(biāo)菌株，并進(jìn)行菌間交叉劃線拮抗試驗(yàn)，結(jié)果為各菌株間相互不拮抗（圖1）。

2.3 菌種鑒定

生理生化試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。通過對菌落形態(tài)的觀察，菌株R8為黃色圓形不透明菌落，表面光滑濕潤，邊緣整齊。菌株K25為白色圓形不透明菌落，表面光滑干燥，邊緣整齊。菌株N2為乳白色圓形不透明菌落且具有黏性，表面光滑濕潤，邊緣整齊。通過對3株菌株的基因序列分別進(jìn)行比對，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖2、圖3、圖4）。結(jié)果表明，菌株R8、K25、N2分別與Pantoea eucalypti LMG24198、Enterobacter sichuanensis WCHECI1597、Bacillus zanthoxyli 1433處于同一分支，序列相似性分別為99.63%、99.30%、99.65%。綜上，3株菌株分別屬于泛菌屬、腸桿菌屬、芽孢桿菌屬，最終鑒定為桉樹泛菌、四川腸桿菌、花椒芽孢桿菌。3株菌株的序列上傳GenBank獲得的登錄號分別為OQ410706、OQ410707、OQ410708。

2.4 菌株生長曲線測定

由圖5可知，菌株R8、K25、N2的發(fā)育遲緩期持續(xù)時間不同，菌株R8、N2相同，為0～4 h；菌株K25發(fā)育遲緩期極短。菌株進(jìn)入對數(shù)生長期后，迅速生長繁殖。菌株R8、K25、N2分別在16、16、22 h達(dá)到最高濃度，之后進(jìn)入穩(wěn)定期。

2.5 浸種促生試驗(yàn)

由圖6-A、圖6-B可知，浸種促生7 d后，CK組水稻幼苗芽長為4.15 cm，與CK組相比，菌株R8、K25、N2菌懸液處理的水稻芽長分別提高25.06%、38.07%、55.66%；CK組水稻幼苗胚根長為6.98 cm，與CK組相比，菌株R8、K25、N2菌懸液處理的水稻胚根長分別提高15.19%、30.37%、47.42%；CK組水稻幼苗鮮質(zhì)量為88.79 mg，與CK組相比，菌株R8、K25、N2菌懸液處理的水稻幼苗鮮質(zhì)量分別提高13.27%、21.88%、46.93%；CK組水稻幼苗干質(zhì)量為19.29 mg，與CK組相比，菌株R8、K25、N2菌懸液處理的水稻幼苗干質(zhì)量分別提高30.38%、37.38%、49.82%。3株菌株的菌懸液對水稻幼苗均具有顯著的促進(jìn)生長發(fā)育作用。

2.6 定殖試驗(yàn)

在MS營養(yǎng)液試管苗定殖試驗(yàn)中，3株P(guān)GPR在水稻根際均具有較好的定殖能力且差異顯著（圖7）。菌株K25定殖能力最強(qiáng)，達(dá)到了2.04×106 CFU/g。菌株R8定殖能力為1.10×106 CFU/g。菌株N2定殖能力顯著低于菌株R8、K25，為7.09×105 CFU/g。

2.7 水稻幼苗盆栽促生試驗(yàn)

施加單一菌株與復(fù)合菌株的菌懸液21 d后，不同處理組對水稻各項(xiàng)生長指標(biāo)的影響如圖8所示。與CK組相比，7組施加PGPR菌懸液的處理均顯著提高水稻幼苗的株高，提高幅度為19.04%～46.67%， 其中T4處理效果最佳（圖8-A）。 R8、T1、T4處理對莖粗提高幅度較大，對比CK處理增幅分別達(dá)31.75%、35.04%、39.05%（圖8-B）。在水稻幼苗干物質(zhì)積累方面，添加PGPR的處理組對比CK組提高效果顯著（圖8-C、圖8-D），T3、T4處理顯著增加全株干物質(zhì)積累量，增幅分別為24.71%、20.19%；T1、T2、T3、T4處理對根系干物質(zhì)的積累量增幅為18.60%～22.09%，其中T3處理增幅最高。在植物根系結(jié)構(gòu)方面，由圖8-E、圖 8-F、圖8-G、圖8-H、圖8-I可知，對比CK處理，各處理在根系總長、根平均直徑、根總體積、根總表面積、根尖數(shù)方面均有不同程度的提高，分別增加18.19%～99.64%、19.74%～68.35%、28.78%～107.73%、54.89%～147.52%、45.43%～101.04%。T3處理在根系總長、根總體積、根總表面積、根尖數(shù)方面優(yōu)于其他處理，T4處理在根平均直徑方面優(yōu)于其他處理。上述結(jié)果表明，篩選的3株水稻根際促生菌可以有效促進(jìn)水稻幼苗的生長發(fā)育、改善水稻根系結(jié)構(gòu)及促進(jìn)植株干物質(zhì)的積累。綜合分析，復(fù)合菌株處理組T3、T4對水稻幼苗總體促生效果優(yōu)于其他單菌組與復(fù)合菌組。

3 討論與結(jié)論

本研究篩選出5株解磷菌、3株解鉀菌、3株自生固氮菌，并對其植物激素類物質(zhì)分泌、養(yǎng)分轉(zhuǎn)化能力進(jìn)行測定分析。最終確定3株促生能力優(yōu)良且互不拮抗的目標(biāo)PGPR，經(jīng)鑒定分別為Pantoea eucalypti R8、Enterobacter sichuanensis K25、Bacillus zanthoxyli N2。在浸種促生試驗(yàn)中，3株P(guān)GPR均表現(xiàn)出對水稻胚根長、胚芽長、苗鮮質(zhì)量、苗干質(zhì)量的顯著提高效果。PGPR的定殖同樣是其發(fā)揮促生作用的關(guān)鍵因素，PGPR需高效定殖于植物根際，競爭根系分泌物中的營養(yǎng)物質(zhì)，發(fā)揮其正向作用，對植物產(chǎn)生有益影響［25］。本研究通過定殖試驗(yàn)，證明3株P(guān)GPR均具有定殖于水稻根際的能力。在后續(xù)促生試驗(yàn)中，單一菌株與復(fù)合菌株制備的菌懸液均顯示出不同程度的促生作用，T3、T4組復(fù)合菌株在促進(jìn)水稻生長發(fā)育、改善根系結(jié)構(gòu)、提高干物質(zhì)積累方面表現(xiàn)出優(yōu)于其他處理的效果。其原因可能是，PGPR間的協(xié)同作用多維度地促進(jìn)根系生長，進(jìn)而提高植株對土壤中水分和養(yǎng)料的吸收與利用，促進(jìn)植株的生長發(fā)育及干物質(zhì)的積累［26］。周靜等研究發(fā)現(xiàn)，4株P(guān)GPR菌液等比例混合，對辣椒幼苗株高、莖粗、鮮質(zhì)量、葉綠素含量具有顯著提高作用［27］。大多數(shù)由單一菌株制備的菌劑，其促生功能較為單一，無法滿足農(nóng)作物生長過程中的多種需求。由多菌種制備、具有多種功能的復(fù)合型菌劑已逐漸成為微生物菌劑研究及應(yīng)用的一種趨勢［28］。韓梅等研究發(fā)現(xiàn)，互不拮抗的根瘤菌 S-2、溶磷菌P-3、硅酸鹽細(xì)菌K-5混合培養(yǎng)后的溶磷效果優(yōu)于三者之和，S-2、P-3混合培養(yǎng)時的解鉀能力優(yōu)于單一菌株［29］。綜上表明，復(fù)合菌劑中不同菌株間可能發(fā)生協(xié)同作用，所帶來的促生效果要優(yōu)于單一菌株所制備的菌劑。本研究篩選出的PGPR復(fù)合菌株組合T3、T4對水稻具有良好的促生效果，具有研發(fā)制備微生物肥料的潛力。但由于本試驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室穩(wěn)定條件下進(jìn)行的，PGPR的促生特性能否在田間土壤復(fù)雜的生態(tài)條件以及諸多生物與非生物因素影響下穩(wěn)定發(fā)揮促生作用，仍須進(jìn)一步驗(yàn)證。在制備復(fù)合菌劑時，各菌株的配比以及復(fù)合菌劑應(yīng)用中載體及劑型的選擇上，仍須進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

［1］趙 凌，趙春芳，周麗慧，等. 中國水稻生產(chǎn)現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（10）：105-107.

［2］徐春春，紀(jì) 龍，李鳳博，等. 當(dāng)前我國水稻產(chǎn)業(yè)發(fā)展形勢與戰(zhàn)略對策［J］. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2022，41（1）：21-27.

［3］楊曉明.化肥農(nóng)藥減量使用中存在問題與措施探究［J］. 南方農(nóng)業(yè)，2021，15（5）：208-209.

［4］韓天富，馬常寶，黃 晶，等. 基于Meta分析中國水稻產(chǎn)量對施肥的響應(yīng)特征［J］. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019，52（11）：1918-1929.

［5］袁雅文. 有益微生物作用機(jī)理及微生物菌肥的應(yīng)用前景［J］. 雜交水稻，2022，37（4）：7-14.

［6］郭志剛，李文芳，馬宗桓，等. 生物菌肥和鉀肥配施對蘋果鉀素吸收及果實(shí)品質(zhì)的影響［J］. 干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究，2021，39（3）：113-121.

［7］于深州. 微生物菌肥對水稻產(chǎn)量的影響試驗(yàn)［J］. 北方水稻，2017，47（2）：38-39.

［8］萬水霞，王 靜，李 帆，等. 玉米根際高效溶磷菌的篩選、鑒定及促生效應(yīng)研究［J］. 生物技術(shù)通報，2020，36（5）：98-103.

［9］Sun L，Cheng L，Ma Y H，et al. Exopolysaccharides from Pantoea alhagi NX-11 specifically improve its root colonization and rice salt resistance［J］. International Journal of Biological Macromolecules，2022，209：396-404.

［10］Ngalimat M S，Hata E M，Zulperi D，et al. Plant growth-promoting bacteria as an emerging tool to manage bacterial rice pathogens［J］. Microorganisms，2021，9（4）：682.

［11］陳 蘇，簡敏菲，張 曉，等. 東鄉(xiāng)野生稻根際促生菌分離篩選及其促生作用的研究［J］. 中國土壤與肥料，2022（10）：222-230.

［12］楊 華，胡 展，郭照輝，等. 水稻促生菌的篩選、鑒定及其促生效果［J］. 微生物學(xué)通報，2022，49（6）：2088-2099.

［13］戚秀秀，魏 暢，劉曉丹，等. 根際促生菌應(yīng)用于基質(zhì)對水稻幼苗生長的影響［J］. 土壤，2020，52（5）：1025-1032.

［14］Sun T，Liu Y，Wu S A，et al. Effects of background fertilization followed by co-application of two kinds of bacteria on soil nutrient content and rice yield in Northeast China［J］. International Journal of Agricultural and Biological Engineering，2020，13（2）：154-162.

［15］戴美松，王月志，蔡丹英，等. 我國微生物菌肥登記現(xiàn)狀及其在果樹減肥增效中的應(yīng)用［J］. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2021，62（2）：241-246.

［16］靳海洋，王 慧，張燕輝，等. 基于基因組的一株土壤固氮菌分離菌株鑒定及其促生作用［J］. 微生物學(xué)報，2021，61（10）：3249-3263.

［17］黃 濤. 玉米根際促生細(xì)菌的篩選及其促生機(jī)理初步研究［D］. 沈陽：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2020：15-16.

［18］王珣玨，黃巧云，蔡 鵬，等. 解鉀菌解鉀效率檢測方法的比較［J］. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2016，35（1）：81-85.

［19］王保勤，牛吉山. 一種小麥子粒赤霉素含量測定方法的建立［J］. 中國農(nóng)學(xué)通報，2007，23（1）：334-337.[HJ2mm]

［20］朱詩苗. IAA促生菌的分離鑒定及對煙草種子萌發(fā)與煙苗生長發(fā)育的影響［D］. 延吉：延邊大學(xué)，2019：31-32.

［21］孫蘭平. 芍藥根際微生物多樣性及具ACC脫氨酶活性的促生菌研究［D］. 揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué)，2021：36.

［22］東秀珠，蔡妙英，等. 常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊［M］. 北京：科學(xué)出版社，2001：364-379.

［23］徐偉慧，劉澤平，符春敏，等. 根際芽孢桿菌對水稻根系的促生效應(yīng)［J］. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，47（4）：59-63.

［24］張小蘭，韋 中，梅新蘭，等. 一種基于根際定殖能力篩選溶磷菌的方法［J］. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2014，37（2）：79-84.

［25］李 穎，龍長梅，蔣 標(biāo)，等. 兩株P(guān)GPR菌株的花生定殖及對根際細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的影響［J］. 生物技術(shù)通報，2022，38（9）：237-247.

［26］劉 玲，馮乃杰，鄭殿峰，等. 不同微生物菌劑對水稻幼苗形態(tài)建成和生理特性的影響［J］. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報，2022，53（1）：88-95.

［27］周 靜，黃文茂，秦利軍，等. 四株P(guān)GPR菌株混菌發(fā)酵體系的構(gòu)建及促生效應(yīng)評價［J］. 生物技術(shù)通報，2021，37（4）：116-126.

［28］王恒煦，劉澤平，徐偉慧，等. 幾種菌株對水稻的促生能力測定［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019，47（11）：94-99.

［29］韓 梅，李麗娜，魏 冉，等. 混合培養(yǎng)提高菌株解磷解鉀能力的探討［J］. 微生物學(xué)雜志，2010，30（5）：74-77.