劉炯娜，徐玉巧，范方宇

（西南林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，西南山地森林資源保育與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650224）

鼠李糖乳桿菌（Lactobacillus rhamnosusGG，LGG）具有調(diào)節(jié)腸道益生菌菌群、增強(qiáng)人體免疫力的功能[1]。當(dāng)益生菌活菌數(shù)高于6（lg（CFU/g））時(shí)，可在腸道內(nèi)定植，并發(fā)揮預(yù)期的健康作用[2]。貯藏和食用期間，益生菌易受水分、溫度、胃酸、膽鹽等影響，導(dǎo)致其活性降低，甚至失活[3]。為穩(wěn)定LGG的活性，采用微膠囊技術(shù)提升LGG穩(wěn)定性是一種有效方法。如王遠(yuǎn)一飛等[4]采用殼聚糖/黃原膠制備了LGG微膠囊，結(jié)果表明微膠囊化對(duì)LGG有較強(qiáng)的保護(hù)作用。采用復(fù)合凝聚法、噴霧干燥制備的LGG微膠囊，可有效降低外界環(huán)境對(duì)LGG的影響[5]，但噴霧干燥過(guò)程中的高溫?fù)p傷、滲透壓變化等，易導(dǎo)致益生菌存活率降低，因此如何有效提高益生菌微膠囊穩(wěn)定性是研究者探索的熱點(diǎn)之一。

益生元是一種寡糖型短鏈碳水化合物，不被人體消化吸收，但可被腸道中的微生物（如雙歧桿菌）利用，促進(jìn)腸道益生菌增殖，進(jìn)一步促進(jìn)調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和增強(qiáng)鈣的吸收能力[6-7]。有研究者發(fā)現(xiàn)，益生元為益生菌提供營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)益生菌增殖，并抑制腸道致病菌生長(zhǎng)和定植，對(duì)腸道中的益生菌具有一定的保護(hù)作用[8-9]。如李雅麗等[10]研究發(fā)現(xiàn)不同益生元對(duì)益生菌的作用效果差異顯著，乳糖對(duì)乳雙歧桿菌BL-99的增殖效果較好，而低聚半乳糖對(duì)嬰兒雙歧桿菌YLGB-1496、副干酪乳桿菌K56、副干酪乳桿菌ET-22的增殖效果較好。Anzawa等[11]將乳雙歧桿菌GCL2505和菊粉制成合生元飲料，可有效提高人體內(nèi)雙歧桿菌的增殖。Duque等[12]研究表明，益生菌中添加益生元可提高益生菌的存活率。Nunes等[13]噴霧干燥嗜酸乳桿菌La-5發(fā)現(xiàn)，加入菊糖、海藻糖和高直鏈淀粉對(duì)嗜酸乳桿菌La-5具有較好的保護(hù)作用。由于每種益生菌的代謝途徑和產(chǎn)生的酶不同，不同益生菌對(duì)益生元的利用也有一定區(qū)別[14]。目前，研究不同益生元對(duì)LGG微膠囊穩(wěn)定性的影響還鮮有報(bào)道。

基于此，本研究添加菊糖、低聚果糖、普魯蘭多糖和水蘇糖4 種益生元制備LGG微膠囊，研究LGG微膠囊模擬胃腸消化實(shí)驗(yàn)，分析LGG微膠囊的耐膽鹽、耐熱性、貯藏性、熱穩(wěn)定性，并采用掃描電鏡和差示掃描量熱儀對(duì)LGG微膠囊進(jìn)行表征，旨在為后續(xù)益生元在LGG微膠囊的進(jìn)一步利用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

LGG（ATCC 53013）凍干粉 美國(guó)菌種保藏中心。益生元具體參數(shù)如表1所示。

表1 4 種益生元Table 1 Information on four prebiotics

B型明膠（gelatin，GE）、阿拉伯膠（gum arabic，GA）國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶（transglutaminase，TG酶，100 U/g） 泰興市東勝食品科技有限公司；豬膽鹽 上海源葉生物科技有限公司；胃蛋白酶（3000 U/mg） 中國(guó)Biosharp公司；胰蛋白酶（250 U/mg） 德國(guó)Biofroxx公司。

1.2 儀器與設(shè)備

B-290小型噴霧干燥儀 瑞士Büchi實(shí)驗(yàn)室儀器公司；PHS-25 pH計(jì) 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；THZ-82氣浴恒溫?fù)u床 上海力辰儀器科技有限公司；3K15離心機(jī) 德國(guó)Sigma公司；S-3000N掃描電鏡日本Hitachi公司；差示掃描量熱儀 德國(guó)Netzsch儀器制造有限公司。

1.3 方法

1.3.1 益生元LGG微膠囊的制備

基于本課題組方法[5]，以復(fù)合凝聚法制備益生元LGG微膠囊。配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%的GE和GA混合溶液200 mL，GE和GA質(zhì)量比為1∶1，加入0.5%益生元，40 ℃水浴攪拌溶解，加入9（lg（CFU/g））濃縮菌液，混勻后用0.5 mol/L的HCl溶液調(diào)pH 3.75，40 ℃恒溫水浴攪拌60 min，轉(zhuǎn)速200 r/min。將反應(yīng)體系自然冷卻至室溫，用0.5 mol/L的NaOH溶液調(diào)pH 6.0，加入TG酶（添加量為25 U/g，以GE質(zhì)量計(jì)）進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，冰浴中繼續(xù)攪拌3 h。2000 r/min離心5 min收集微膠囊，用無(wú)菌水洗滌2 次，清除表面的菌體。將濕囊與無(wú)菌水配備成懸浮液進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥參數(shù)：進(jìn)風(fēng)溫度170 ℃，進(jìn)料流量9 mL/min，進(jìn)料量30%，出風(fēng)溫度約80 ℃。

1.3.2 性質(zhì)測(cè)定

1.3.2.1 模擬胃腸消化特性

模擬胃液[17]：將質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%的胃蛋白酶（3000 U/mg）、2%的NaCl添加至無(wú)菌水中，用0.5 mol/L的HCl溶液調(diào)pH 2.0，過(guò)0.22 μm濾膜除菌備用。

模擬腸液[18]：將質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%的胰蛋白酶（250 U/mg）添加至pH 6.8的無(wú)菌磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）中，過(guò)0.22 μm濾膜除菌備用。

基于姚澤晨等[19]的方法進(jìn)行修改，測(cè)定模擬胃腸道實(shí)驗(yàn)中未添加益生元LGG微膠囊（空白組）和添加益生元LGG微膠囊（益生元組）的活菌數(shù)。待測(cè)樣品溶于模擬胃液中，37 ℃、100 r/min的恒溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別在0、30 min和60 min取樣進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。

在模擬胃液中培養(yǎng)60 min后，10000 r/min離心5 min，棄上清液，將沉淀物添加至模擬腸液中（總體積10 mL），在60、120 min取樣進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。

1.3.2.2 膽鹽耐受性

將空白組和益生元組LGG微膠囊分別添加至0.1%、0.3%和0.6%的膽鹽溶液中，3 h后離心，取沉淀于無(wú)菌PBS中進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。

1.3.2.3 耐熱性

將0.02 g空白組和益生元組LGG微膠囊分別置于2 mL無(wú)菌離心管中，加入1 mL無(wú)菌PBS，離心管分別在55、65 ℃和75 ℃水浴，10 min和30 min時(shí)迅速取出離心管，冰水浴冷卻，冷卻后轉(zhuǎn)移至37 ℃培養(yǎng)箱，待微膠囊溶解后涂布計(jì)數(shù)。

1.3.2.4 貯藏穩(wěn)定性

不同水分活度的貯藏性：根據(jù)課題組研究方法[5]，將空白組和益生元組微膠囊分別置于水分活度為0.11、0.33、0.75環(huán)境中保存8 周，每周測(cè)定一次活菌數(shù)。

常溫條件下的貯藏性：將微膠囊置于常溫條件下保存8 周，每隔1 周計(jì)算活菌數(shù)。測(cè)定活菌數(shù)時(shí)，每次取0.1 g微膠囊置于10 mL無(wú)菌PBS中，37 ℃恒溫振蕩至完全溶解，用稀釋梯度法涂布平板計(jì)數(shù)。

1.3.2.5 差示掃描量熱分析

在N2氛圍下進(jìn)行測(cè)試，分別取空白組和益生元組微膠囊5～10 mg，升溫速率10 ℃/min，測(cè)試溫度范圍25～250 ℃[5]。

1.3.3 表觀形態(tài)觀察

分別取少量空白組和益生元組微膠囊置于導(dǎo)電膠表面后噴金90 s，通過(guò)掃描電鏡觀察樣品表觀形態(tài)，放大倍數(shù)3000，加速電壓15 kV。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

2 結(jié)果與分析

2.1 微膠囊性能分析

2.1.1 LGG微膠囊模擬胃腸道消化實(shí)驗(yàn)

益生菌發(fā)揮作用的最終部位為腸道，LGG經(jīng)口進(jìn)入人體后，需要抵御胃酸中的高濃度氫離子的影響，才可到達(dá)腸道發(fā)揮益生菌的作用[19]。由表2可見(jiàn)，無(wú)論是否添加益生元，微膠囊經(jīng)過(guò)模擬胃腸消化后，其活菌數(shù)仍然可以保持較高，說(shuō)明微膠囊化對(duì)LGG具有保護(hù)作用。添加益生元的LGG微膠囊初始活菌數(shù)均高于空白組，其中菊糖和水蘇糖顯著提高LGG存活率（P＜0.05）。原因?yàn)槎嗵穷愇镔|(zhì)在噴霧干燥過(guò)程中可以取代從細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)中損失的水分，提高細(xì)胞膜的耐受溫度，改善益生菌在干燥過(guò)程中的存活率[20]。益生元屬糖類物質(zhì)，干燥的LGG細(xì)胞組分與益生元直接相互作用，減小高溫對(duì)LGG損傷，在干燥過(guò)程中保持細(xì)胞的活性，提高微膠囊中LGG的存活率。模擬胃腸道實(shí)驗(yàn)前后，空白組活菌數(shù)下降了約0.3（lg（CFU/g）），添加菊糖、低聚果糖、普魯蘭多糖和水蘇糖分別下降了約0.9、0.6、0.7（lg（CFU/g））和1.6（lg（CFU/g））。可見(jiàn)，添加益生元的微膠囊在模擬胃腸道實(shí)驗(yàn)時(shí)并未提供額外的保護(hù)作用。經(jīng)模擬腸液處理120 min，未加益生元組活菌數(shù)為7.5（lg（CFU/g）），添加菊糖、低聚果糖、普魯蘭多糖和水蘇糖的LGG微膠囊活菌數(shù)分別達(dá)到了約9.5、9.0、9.0（lg（CFU/g））和8.5（lg（CFU/g））。模擬胃腸道處理后添加益生元的4 組微膠囊的活菌數(shù)均大于空白組（P＜0.05），結(jié)果表明添加益生元的微膠囊在到達(dá)腸道時(shí)LGG能發(fā)揮更好的作用。在常依柳等[21]添加益生元的長(zhǎng)雙歧桿菌微膠囊、鄧紫玙等[22]添加羧甲基茯苓多糖的植物乳桿菌微膠囊研究中也發(fā)現(xiàn)了類似的結(jié)果。

表2 LGG微膠囊在模擬胃腸道中的活菌數(shù)Table 2 Viable count of LGG microcapsules under simulated gastrointestinal conditions（lg（CFU/g））

2.1.2 LGG微膠囊耐膽鹽分析

膽鹽是參與脂肪消化和吸收的鈉鉀鹽，會(huì)破壞益生菌的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，使其發(fā)生氧化損傷失活。由圖1可知，隨膽鹽添加量增加，空白組和益生元組的活菌數(shù)均降低，表明膽鹽溶液對(duì)LGG有一定損害作用，但益生元組的活菌數(shù)始終比空白組高，其中添加水蘇糖的LGG微膠囊對(duì)膽鹽更具有耐受性。3 種膽鹽添加量下，添加水蘇糖的LGG微膠囊都具有最高的存活數(shù)。經(jīng)0.1%膽鹽溶液處理后，空白組LGG活菌數(shù)下降了2.6（lg（CFU/g）），添加菊糖、低聚果糖、普魯蘭多糖和水蘇糖的活菌數(shù)分別下降了1.4、1.1、1.3（lg（CFU/g））和1.6（lg（CFU/g））。當(dāng)膽鹽添加量為0.6%時(shí)，空白組下降4.7（lg（CFU/g）），添加菊糖、低聚果糖、普魯蘭多糖和水蘇糖的LGG微膠囊活菌數(shù)分別下降3.9、4.0、4.1（lg（CFU/g））和2.6（lg（CFU/g））。由此可見(jiàn)，在低膽鹽環(huán)境下，添加益生元顯著增強(qiáng)了微膠囊對(duì)LGG 的保護(hù)作用（P＜0.05），且添加水蘇糖的保護(hù)效果最佳。原因?yàn)楦稍锝橘|(zhì)中的益生元，可在細(xì)胞內(nèi)積聚并減小內(nèi)部和外部環(huán)境之間的滲透壓，有效降低膽鹽對(duì)益生菌的損傷[23]。

圖1 不同膽鹽添加量時(shí)LGG微膠囊活菌數(shù)Fig.1 Viable count of LGG microcapsules with different bile salt concentrations

2.1.3 LGG微膠囊耐熱性分析

由表3可見(jiàn)，隨著溫度的升高和時(shí)間的延長(zhǎng)，LGG微膠囊活菌數(shù)逐漸減少，但添加益生元的LGG微膠囊活菌數(shù)均高于空白（P＜0.05）。55 ℃、10 min后，空白組的活菌數(shù)下降了約3.1（lg（CFU/g）），添加菊糖、低聚果糖、普魯蘭多糖和水蘇糖的LGG微膠囊活菌數(shù)分別下降約1.9、1.8、0.9（lg（CFU/g））和0.4（lg（CFU/g））；75 ℃、30 min后，空白組下降約4.2（lg（CFU/g）），4 種添加益生元的LGG微膠囊活菌數(shù)分別下降約3.4、3.7、3.5（lg（CFU/g））和2.3（lg（CFU/g））。結(jié)果表明，添加益生元提高了LGG微膠囊的耐熱性，且不同益生元對(duì)LGG微膠囊的影響不同（耐熱性：水蘇糖＞菊糖＞普魯蘭多糖＞低聚果糖），在75 ℃、30 min后添加水蘇糖的LGG微膠囊活菌數(shù)仍達(dá)8.7（lg（CFU/g））。相關(guān)研究中，Bilenler等[24]研究發(fā)現(xiàn)，在70 ℃熱處理后，添加淀粉的植物乳桿菌和木糖葡萄球菌微膠囊在70 ℃條件下，仍可保持較高活性，可提高益生菌微膠囊對(duì)高溫的耐受能力。Li Haiping等[25]研究表明，在高溫條件下，添加木瓜多糖的干酪乳桿菌ATCC 334的存活率和熱穩(wěn)定性比未添加木瓜多糖的益生菌高，在逆境下木瓜多糖對(duì)干酪乳桿菌ATCC 334具有保護(hù)作用。這可能是添加的益生元穩(wěn)定性好、耐高溫可減緩熱量向微膠囊內(nèi)部擴(kuò)散[26]，從而增強(qiáng)了益生菌微膠囊的耐熱性。

表3 不同溫度條件 LGG微膠囊活菌數(shù)Table 3 Viable count of LGG microcapsules at different temperatures（lg（CFU/g））

2.1.4 LGG微膠囊不同水分活度下的貯藏穩(wěn)定性

圖2a中，水分活度0.11條件下，空白組和添加菊糖、低聚果糖、普魯蘭多糖、水蘇糖4 種益生元的LGG微膠囊活菌數(shù)在8 周內(nèi)分別下降了3.0、3.2、3.6、5.6、6.7（lg（CFU/g）），結(jié)果表明益生元不能有效提高微膠囊的貯藏穩(wěn)定性，添加水蘇糖的LGG微膠囊在8 周后的活菌數(shù)還低于空白組。圖2b中，水分活度0.33條件下，各組LGG微膠囊隨時(shí)間延長(zhǎng)，活菌數(shù)快速下降?？瞻捉M的微膠囊活菌數(shù)第5周開(kāi)始低于2.0（lg（CFU/g））；菊糖組從第7周開(kāi)始低于2.0（lg（CFU/g））。其他3 組添加益生元微膠囊在第8周保持了一定水平的活菌數(shù)，其中低聚果糖組貯藏穩(wěn)定性最佳。圖2c中，5 組微膠囊在水分活度0.75條件下，活菌數(shù)下降迅速。原因?yàn)樗只疃仍黾?，加快了益生菌脂質(zhì)發(fā)生氧化，導(dǎo)致菌體失活[27]。第2 周開(kāi)始普魯蘭多糖組檢測(cè)不到活性（活菌數(shù)＜2.0（lg（CFU/g））），空白組在第3周失去活性，其他3 組微膠囊活菌數(shù)隨時(shí)間陸續(xù)失去活性。其中低聚果糖在高水分活度條件下對(duì)LGG微膠囊提供了較好的保護(hù)效果，在第6周時(shí)仍保持了3.3（lg（CFU/g））的活菌數(shù)。原因?yàn)榈途酃窃谝欢ǖ臏囟葪l件下可取代水分子，并與益生菌體內(nèi)的蛋白質(zhì)極性基團(tuán)或磷脂基團(tuán)形成氫鍵，從而保護(hù)益生菌中蛋白質(zhì)和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性。此外，低聚果糖屬大分子多糖類，雖不能透過(guò)益生菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，但可降低溶質(zhì)濃度，保護(hù)益生菌[28]，且高水分活度下，低聚果糖作為唯一碳源，其對(duì)LGG的促生長(zhǎng)效果可能更好[29]。

圖2 LGG微膠囊在不同水分活度下的活菌數(shù)Fig.2 Viable count of LGG microcapsules under different water activities

2.1.5 LGG微膠囊常溫條件下的貯藏穩(wěn)定性

由表4可見(jiàn)，4 種益生元LGG微膠囊的活菌數(shù)在常溫貯藏的第1周開(kāi)始顯著下降（P＜0.05）；未加益生元的LGG微膠囊活菌數(shù)第2周開(kāi)始顯著下降。隨著貯藏時(shí)間延長(zhǎng)，未加益生元、添加低聚果糖和水蘇糖的LGG微膠囊活菌數(shù)顯著下降（P＜0.05）；在第8周后，空白組LGG微膠囊活菌數(shù)下降了1.9（lg（CFU/g）），添加菊糖、低聚果糖、普魯蘭多糖、水蘇糖4 種益生元的LGG微膠囊活菌數(shù)分別下降了0.8、1.5、2.1（lg（CFU/g））和2.5（lg（CFU/g））。各組噴霧干燥微膠囊在第8周時(shí)均保持較高的活性（活菌數(shù)＞6（lg（CFU/g））），5 組微膠囊的貯藏穩(wěn)定性為：菊糖組＞水蘇糖組＞低聚果糖組＞普魯蘭多糖組＞空白組（P＜0.05）?？傊?，常溫貯藏時(shí)，LGG微膠囊可以保持較好的穩(wěn)定性，益生元的添加為L(zhǎng)GG微膠囊的貯藏提供了更好的保護(hù)條件，可以延長(zhǎng)LGG微膠囊的貨架期。

表4 LGG微膠囊常溫條件下活菌數(shù)Table 4 Viable count of LGG microcapsules at ambient temperature（lg（CFU/g））

2.1.6 差示掃描量熱分析

由圖3可見(jiàn)，空白組的熔融溫度約為148 ℃，添加菊糖、低聚果糖、普魯蘭多糖和水蘇糖的微膠囊熔融溫度分別約為162、105、169 ℃和172 ℃，菊糖、普魯蘭多糖和水蘇糖的添加有效提高了微膠囊的熔融溫度，低聚果糖降低了微膠囊的熔融溫度，可能是由于低聚果糖是菊粉部分酶解的產(chǎn)物，聚合度較低（2～10），熱穩(wěn)定性差[30]，而添加其他3 種益生元可提高LGG微膠囊的熱穩(wěn)定性，且添加水蘇糖的微膠囊熱穩(wěn)定性最佳。原因?yàn)橐嫔軌蚪Y(jié)合益生菌細(xì)胞膜和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)內(nèi)的水分子，導(dǎo)致微膠囊的熔融溫度增加[31]。Ashwar等[32]通過(guò)差示掃描量熱分析乳酸菌微膠囊的熱穩(wěn)定性發(fā)現(xiàn)，抗性淀粉可以提高微膠囊的熱穩(wěn)定性。Alehosseini等[33]研究也表明，添加益生元后雙歧桿菌BB-12微膠囊的熱穩(wěn)定性更好，且與低聚果糖相比，菊粉的熔融溫度更高，對(duì)雙歧桿菌BB-12的保護(hù)效果更好，這與本研究結(jié)果一致。

圖3 不同益生元對(duì)LGG微膠囊差示掃描量熱曲線的影響Fig.3 Effects of different prebiotics on the DSC curve of LGG microcapsules

2.2 掃描電鏡分析

由圖4可見(jiàn)，5 組微膠囊顆粒均完整、無(wú)破裂，各組之間粒徑差距較小。這是因?yàn)? 組微膠囊的制備條件相同，所得微膠囊粒徑大小一致，經(jīng)噴霧干燥的微膠囊在外觀結(jié)構(gòu)上沒(méi)有明顯差異。但空白組的微膠囊凹陷較深，表面褶皺多。添加益生元后，部分微膠囊壁材表面褶皺減少，菊糖和水蘇糖微膠囊較為明顯，而壁材可以增大胃腸液、膽鹽溶液和水等的穿越阻力，從而避免其與菌體接觸，使微膠囊結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定[34]，提高微膠囊對(duì)LGG的保護(hù)作用。

圖4 5 組LGG微膠囊掃描電鏡圖（×3000）Fig.4 SEM micrographs of fvie groups of LGG microcapsules (× 3000)

3 結(jié)論

以菊糖、低聚果糖、普魯蘭多糖和水蘇糖為4 種益生元，分別制備含有益生元的LGG微膠囊，以未添加益生元的LGG微膠囊為對(duì)照，探究不同益生元對(duì)微膠囊性能的影響。結(jié)果表明添加益生元提高了LGG微膠囊存活率，益生元組的LGG存活率均高于空白組，其中水蘇糖對(duì)LGG微膠囊的保護(hù)作用最強(qiáng)。但4 種益生元LGG微膠囊在各自條件下處理后，其穩(wěn)定性不同。模擬胃腸液測(cè)試中，菊糖活菌數(shù)存活率最高，達(dá)9.5（lg（CFU/g））；在膽鹽溶液中益生元也增強(qiáng)了微膠囊對(duì)LGG的保護(hù)能力，其中水蘇糖的效果最佳，在膽鹽添加量0.6%條件下，空白組LGG活菌數(shù)下降4.7（lg（CFU/g）），而添加水蘇糖僅下降2.6（lg（CFU/g））；耐熱性實(shí)驗(yàn)中，75 ℃、30 min后，添加水蘇糖的微膠囊耐熱性最佳，活菌數(shù)達(dá)8.7（lg（CFU/g））；在高水分活度下添加低聚果糖可有效提高微膠囊的貯藏穩(wěn)定性。差示掃描量熱研究表明，菊糖、普魯蘭多糖和水蘇糖的添加有效提高了LGG微膠囊的熔融溫度，低聚果糖降低了LGG微膠囊的熔融溫度，其中水蘇糖增強(qiáng)了微膠囊的熱穩(wěn)定性，熔融溫度達(dá)172 ℃。研究可為益生元在LGG微膠囊中的應(yīng)用提供參考。