李 攀，高曉娟

急性腦梗死是指腦組織血液循環(huán)突然中斷造成的腦損傷，有高傷殘率、高復(fù)發(fā)率、高死亡率的三高特點(diǎn)[1]。在急性腦梗死的防治進(jìn)程中，丁苯酞因其具有重構(gòu)微循環(huán)、保護(hù)線粒體、改善細(xì)胞能量代謝、調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的作用[2]，但目前對(duì)于丁苯酞在炎癥方面的研究還很欠缺。本研究運(yùn)用基因芯片技術(shù)，篩選出了與正常人相比有明顯差異的炎性細(xì)胞因子OPN、IL-1、CX3CL1，再用qRT-PCR技術(shù)對(duì)靶基因的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)OPN、IL-1、CX3CL1和HCY的水平，分析神經(jīng)功能受損程度與OPN、IL-1、CX3CL1、HCY之間的關(guān)系，探討丁苯酞對(duì)以上炎性指標(biāo)的影響及對(duì)急性腦梗死的臨床療效，并對(duì)神經(jīng)功能的改善與OPN、CX3CL1、IL-1、 HCY水平進(jìn)行相關(guān)性分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2020年10月至2022年月4于本院神經(jīng)內(nèi)科住院治療的急性腦梗死患者70例為研究對(duì)象，診斷符合《中國(guó)急性腦梗死診治指南》中的標(biāo)準(zhǔn)[3]。按隨機(jī)數(shù)字表法分為常規(guī)組和觀察組各35例，并選取35名健康體檢者作為正常對(duì)照組，見(jiàn)表1。常規(guī)組和觀察組在性別、年齡、危險(xiǎn)因素(高血壓、糖尿病和高脂血癥)、入院時(shí)NIHSS評(píng)分上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，入組時(shí)基本情況大體相等，有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

表1 2組患者入組時(shí)的基本資料比較

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)：①CT或MRI掃描顯示急性腦梗死的早期病灶；②首次發(fā)病，可在卒中發(fā)病后48 h內(nèi)開(kāi)始試驗(yàn)藥物治療；③無(wú)意識(shí)障礙、視聽(tīng)力障礙，能夠配合進(jìn)行認(rèn)知及語(yǔ)言量表測(cè)試；④簽署知情同意書(shū)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)：①心源性腦栓塞或因其他原因?qū)е碌哪X梗死；②其他重要臟器功能障礙者；③合并嚴(yán)重感染的患者。

1.4 治療方法:根據(jù)《中國(guó)急性腦梗死診治指南》對(duì)患者均進(jìn)行改善腦血液循環(huán)的治療，包括降顱壓、改善腦水腫、抗血小板聚集、營(yíng)養(yǎng)腦神經(jīng)等常規(guī)治療。觀察組在常規(guī)組治療的基礎(chǔ)上給丁苯酞氯化鈉注射液(石藥集團(tuán)恩必普藥業(yè)有限公司)100 mL/次，2次/d靜脈輸注。2組患者均連續(xù)治療14 d，治療過(guò)程中根據(jù)病情需要給予對(duì)癥處理。

1.5 研究方法：通過(guò)基因芯片篩選出差異性最明顯的三個(gè)因子作為研究對(duì)象。所有患者均于入院后24 h內(nèi)及治療14 d后空腹抽取靜脈血2 mL，同時(shí)抽取35名健康體檢者空腹肘靜脈血2 mL，離心取上清液用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中OPN、IL-1、CX3CL1的水平，HCY在全自動(dòng)生化儀上用酶循環(huán)法進(jìn)行測(cè)定。

1.6 觀察指標(biāo)：根據(jù)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)[4]對(duì)腦梗死患者入院時(shí)和治療后第14 d的情況進(jìn)行評(píng)分，評(píng)價(jià)內(nèi)容包括意識(shí)水平、凝視、視野、面癱、上下肢運(yùn)動(dòng)、共濟(jì)失調(diào)、感覺(jué)、語(yǔ)言、構(gòu)音困難、消失和忽視共11個(gè)項(xiàng)目，總分0～42分。分值越高表示被檢者神經(jīng)功能損傷越嚴(yán)重，其中NHISS>7分為存在神經(jīng)功能損傷。出院時(shí)患者NIHSS評(píng)分為0～2分或較入院時(shí)減少≥4分為好轉(zhuǎn)。根據(jù)Barthel指數(shù)(ADL)[5]以患者日常實(shí)際表現(xiàn)作為依據(jù)對(duì)治療前后的獨(dú)立生活能力進(jìn)行評(píng)分，根據(jù)總分評(píng)定其功能有無(wú)明顯障礙。最后分析神經(jīng)功能的改善與OPN、CX3CL1、IL-1、HCY水平變化的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 基因芯片結(jié)果和qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果:檢測(cè)炎癥因子及其受體基因共84條。急性腦梗死炎癥基因表達(dá)譜中差異表達(dá)的基因共45條，其中上調(diào)基因29條，下調(diào)基因16條。差異最大的包括OPN、IL-1、CX3CL1。用qRT-PCR對(duì)基因芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，急性腦梗死患者OPN、IL-1的mRNA水平較正常對(duì)照組上調(diào)，CX3CL1的mRNA水平較正常對(duì)照組下調(diào)，與基因芯片結(jié)果一致。

2.2 2組患者治療前和治療后第14 d NIHSS及ADL指數(shù)分值比較:常規(guī)組和觀察組均無(wú)失訪者，2組患者在入院時(shí)進(jìn)行評(píng)分比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療14 d，常規(guī)組和觀察組較治療前NIHSS評(píng)分降低，ADL指數(shù)升高(P<0.05)。觀察組治療后評(píng)分比常規(guī)組治療后評(píng)分變化更明顯(P<0.05)，說(shuō)明加用丁苯酞治療可以改善神經(jīng)功能損傷，起到更好的治療效果，見(jiàn)表2。

表2 2組患者治療前后NIHSS和ADL的比較(分,

2.3 治療前急性腦梗死患者與正常對(duì)照組血清中OPN、IL-1、CX3CL1、HCY水平比較:治療前，腦梗死組血清中OPN、IL-1、HCY水平較正常對(duì)照組明顯增高(P<0.05)，而血清中CX3CL1水平較正常對(duì)照組明顯降低(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 治療前急性腦梗死組與正常對(duì)照組HCY、OPN、CX3CL1、IL-1水平比較

2.4 常規(guī)組和觀察組患者治療前后血清中OPN、IL-1、CX3CL1、HCY水平比較:治療前，常規(guī)組和觀察組OPN、IL-1、CX3CL1、HCY水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療14 d后，2組OPN、IL-1、HCY水平較治療前下降，CX3CL1水平較治療前升高，觀察組比常規(guī)組四個(gè)因子水平變化更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表4。

表4 常規(guī)組和觀察組治療前后血清中OPN、IL-1、CX3CL1、HCY水平的比較

2.5 臨床療效與OPN、IL-1、CX3CL1、HCY的相關(guān)性分析:臨床療效指標(biāo)NIHSS評(píng)分、ADL指數(shù)評(píng)分與OPN、IL-1、HCY呈顯著正相關(guān)性(P<0.05)，與CX3CL1呈顯著負(fù)相關(guān)性(P<0.05),見(jiàn)表5至表6。

表5 NISSH評(píng)分與OPN、IL-1、CX3CL1、HCY的相關(guān)性分析

表6 ADL評(píng)分與OPN、IL-1、CX3CL1、HCY的相關(guān)性分析

3 討論

隨著居民不健康生活方式的流行和社會(huì)老齡化形勢(shì)的加快，急性腦梗死患病率不斷呈上升趨勢(shì)，給患者造成巨大的健康和經(jīng)濟(jì)后果，并且這種趨勢(shì)在未來(lái)還將繼續(xù)增長(zhǎng)。除了發(fā)病率高外，公認(rèn)的有效治療方法也很有限。臨床研究發(fā)現(xiàn),血管內(nèi)炎癥反應(yīng)在急性腦梗死發(fā)展中具有重要作用[6],早在腦缺血后數(shù)小時(shí)，增加的氧化應(yīng)激會(huì)激活內(nèi)皮細(xì)胞和相關(guān)蛋白質(zhì)，使其在缺血核心區(qū)和周?chē)M織中升高。激活的內(nèi)皮細(xì)胞還促進(jìn)白細(xì)胞在腦血管的黏附、積累、滲透，導(dǎo)致神經(jīng)血管單元內(nèi)的炎癥加劇，加速梗死擴(kuò)張?？梢哉f(shuō)炎癥反應(yīng)在腦梗死的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的整個(gè)過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用[7]，故可通過(guò)檢測(cè)炎性相關(guān)因子水平變化來(lái)評(píng)估急性腦梗死病情進(jìn)展情況。由于丁苯酞治療對(duì)于OPN、IL-1、CX3CL1、HCY水平的影響及療效的關(guān)系并不明確，在此方面還有待深入研究。

OPN是一種分泌性基質(zhì)細(xì)胞炎性細(xì)胞因子，其作用是觸發(fā)不同的白細(xì)胞，引起功能性反應(yīng)，誘導(dǎo)細(xì)胞因子分泌，從而促成整個(gè)免疫反應(yīng)[8]。在急性和慢性缺血時(shí)會(huì)高度上調(diào)，其功能中有一部分是作為一種炎癥細(xì)胞因子，可以促進(jìn)多種炎癥細(xì)胞的募集，從而調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。NBP可有效地抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，使OPN水平降低。NBP還可以有效的抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，抑制OPN的升高。IL-1在急性中風(fēng)后早期，對(duì)腦血流量有不利的作用，可加重腦缺血[9]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，急性腦梗死患者IL-1水平明顯高于正常人，丁苯酞治療較常規(guī)治療后IL-1水平下降更明顯，推測(cè)丁苯酞很可能從多途徑抑制了IL-1的水平，對(duì)大腦起到了保護(hù)作用。CX3CLl是目前已知CX3C趨化因子亞家族的唯一成員，其通過(guò)與腦組織小膠質(zhì)細(xì)胞上的受體CX3CR1結(jié)合，能夠激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通道或直接介導(dǎo)白細(xì)胞黏附、趨化及聚集，從而參與各種炎癥反應(yīng)，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活[10]。NBP在抗炎方面的作用和CX3CLL有異曲同工之妙，可有效地抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和隨后促炎性細(xì)胞因子的釋放，還可通過(guò)一些信號(hào)通路降低機(jī)體炎癥反應(yīng)，最終改善CX3CLL水平，提升治療效果。高HCY引起的氧化應(yīng)激、內(nèi)皮功能障礙、炎癥、平滑的肌肉細(xì)胞增殖等，被認(rèn)為在包括動(dòng)脈硬化、急性腦梗死在內(nèi)的多種疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了重要作用[11]。本研究結(jié)果也顯示，治療14 d后急性腦梗死患者HCY水平均較治療前顯著下降，且加用丁苯酞治療后的HCY水平降低更顯著，說(shuō)明丁苯酞可能作用于急性腦梗死致病機(jī)制的多個(gè)環(huán)節(jié)，抑制了炎癥的發(fā)生，降低了患者體內(nèi)HCY水平，達(dá)到了治療的目。

在本研究中，丁苯酞治療組患者的OPN、IL-1、HCY水平較對(duì)照組顯著降低，CX3CLI水平升高，它們均有可能在急性腦梗死病程中發(fā)揮其作用。高水平的OPN、IL-1、HCY均有可能與腦梗死高復(fù)發(fā)率和不良預(yù)后有關(guān)。在本研究中,采用 NIHSS評(píng)分、Barthel指數(shù)評(píng)定獨(dú)立生活能力,結(jié)果表明丁苯酞組NIHSS評(píng)分顯著低于正常對(duì)照組,ADL指數(shù)顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)。

綜上所述,丁苯酞的治療效果優(yōu)于常規(guī)治療,能顯著降低急性腦梗死患者血清中OPN、IL-1、HCY水平，使CX3CLI水平升高；OPN、IL-1、HCY與丁苯酞的治療療效呈正相關(guān)性，CX3CL1與丁苯酞的治療療效呈負(fù)相關(guān)性。因此,丁苯酞對(duì)治療腦梗死,促進(jìn)腦梗死后神經(jīng)系統(tǒng)損傷的修復(fù),改善腦梗死后肢體運(yùn)動(dòng)功能障礙、言語(yǔ)障礙等,以及預(yù)防二次中風(fēng)具有十分重要的意義。