汪文芳，朱毛毛，楊艷君，葉 亮，賈曉斌，封 亮

·數(shù)據(jù)挖掘與循證醫(yī)學(xué)·

基于數(shù)據(jù)挖掘及砷含量探究礦物藥雄黃在兒科制劑中應(yīng)用規(guī)律及解決策略

汪文芳，朱毛毛，楊艷君，葉 亮，賈曉斌*，封 亮*

中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院，江蘇 南京 211198

基于含雄黃兒科制劑及方劑探討礦物藥雄黃在兒科制劑中的應(yīng)用規(guī)律及開發(fā)價值。通過Excel 2019統(tǒng)計分析《中國藥典》2020年版等國家標(biāo)準(zhǔn)中含雄黃的兒科制劑的應(yīng)用特點(diǎn)。利用Spss modeler及R語言對《中醫(yī)方劑大辭典》（1～11冊）中含雄黃兒科方劑的藥物配伍關(guān)聯(lián)規(guī)則進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘。利用LC-ICP-MS測定7種含雄黃兒科制劑的總砷及可溶性無機(jī)砷含量。與市場常見的兒科中藥制劑相比，含雄黃兒科制劑的功能主治在神經(jīng)系統(tǒng)上具有優(yōu)勢，但存在劑型不合適、服用劑量不合理及質(zhì)量控制欠缺等問題，含雄黃兒科方劑的藥物配伍規(guī)律可為治療兒童驚癇、疳癥、痘、瘡、痧痢等中藥的開發(fā)提供參考。常見市售含雄黃兒科制劑中總砷的含量遠(yuǎn)高于可溶性無機(jī)砷含量，且二者之間并無關(guān)聯(lián)。雄黃在兒科制劑的開發(fā)中具有療效廣的優(yōu)勢，但現(xiàn)有含雄黃兒童制劑需進(jìn)一步提升劑型、劑量、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。

雄黃；兒科制劑；數(shù)據(jù)挖掘；砷；配伍規(guī)律；關(guān)聯(lián)規(guī)則

礦物藥是中藥寶庫的重要組成類別之一，雖然其品種相對較少，但功效覆蓋范圍廣。不同于植物藥與動物藥，礦物藥大多質(zhì)堅(jiān)實(shí)，不易入煎劑，以口服固體制劑及外用制劑的形式為主。兒童因自我管理能力有限、不易服用煎劑，自古以來的兒科中藥制劑均以口服固體制劑為主，因此礦物藥在兒科用藥中占有重要地位。其中雄黃是兒科中藥制劑中出現(xiàn)頻率較高的中藥之一。

雄黃又名雞冠石、黃石、雄精，是一種主要含有二硫化二砷（As2S2）的礦物類中藥，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。雄黃性味溫、辛，功效主要為燥濕化痰、殺蟲解毒、截瘧，常用于治療瘡癰腫毒、驚癇、瘧疾等[1]。《馮氏錦囊秘錄》中記載雄黃“稟火土之性，得正陽之氣以生”[2]，中醫(yī)認(rèn)為兒童為“純陽之體”，但臟腑嬌嫩，行氣未充，因此雄黃常被古代醫(yī)師用于治療兒童病癥。

自20世紀(jì)有研究發(fā)現(xiàn)砷劑具有治療早幼粒細(xì)胞白血病的作用[3]，雄黃等含砷礦物類中藥就備受重視。雄黃的藥理作用如抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌等被不斷地發(fā)現(xiàn)[4-6]。在兒童制劑緊缺的今天，開發(fā)中藥兒科制劑是解決我國兒童用藥難問題的有效途徑之一。雄黃在兒科制劑中的出現(xiàn)頻率較高，但是由于其主要含元素砷，故相關(guān)制劑產(chǎn)品和方劑在使用時的有效性和安全性一直存在爭議[7-8]。因此，本研究通過統(tǒng)計含雄黃的現(xiàn)代兒科制劑及古代方劑，分析目前雄黃在兒科制劑中的應(yīng)用現(xiàn)狀及其治療兒科疾病的關(guān)聯(lián)規(guī)律，并利用現(xiàn)代儀器分析方法測定了7種含雄黃兒科制劑中總砷及價態(tài)砷的含量，為含雄黃兒科中成藥質(zhì)量控制及研發(fā)提供參考。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法

1.1.1 數(shù)據(jù)來源 含雄黃的中成藥信息均來自《中國藥典》2020年版（簡稱藥典）、《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》（1～21冊）（簡稱部頒標(biāo)準(zhǔn)）以及《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》；含雄黃的方劑信息均來自《中醫(yī)方劑大辭典》（1～11冊）。

1.1.2 數(shù)據(jù)篩選 （1）組方中包含雄黃的中成藥；（2）組方中包含雄黃、明雄黃、雄精、雞冠石的古代方劑；（3）方劑藥物組成及主治病齊全。

1.1.3 數(shù)據(jù)規(guī)范化 由于同物異名的原因，需對含雄黃的兒童方劑中的中藥名稱進(jìn)行統(tǒng)一，參考藥典及《中藥大辭典》確定藥材名稱，如“雄精”統(tǒng)一為“雄黃”，“當(dāng)門子”統(tǒng)一為“麝香”，“全蟲”統(tǒng)一為“全蝎”等。

1.1.4 分析方法 利用Excel 2019軟件建立含雄黃中藥制劑以及含雄黃中藥方劑數(shù)據(jù)庫，對其適用人群、劑型、用法用量進(jìn)行頻數(shù)分析；構(gòu)建含雄黃兒科方劑的處方藥物矩陣，利用Spss modeler subscription 1.0軟件繪制方劑核心藥物網(wǎng)絡(luò)圖，利用R語言的Apriori算法對不同適用證方劑的組成藥物進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析及可視化分析。

1.2 材料與含量測定方法

1.2.1 試劑及藥品 硝酸，電子級別（購于上海安普實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；質(zhì)譜調(diào)諧液：Li、Ce、Y、Co、Ti，質(zhì)量濃度10 ng/mL；內(nèi)標(biāo)儲備液：Sc、Ge、Rh、In、Bi，質(zhì)量濃度100 μg/mL，均購于美國安捷倫科技有限公司；無水乙酸鈉、磷酸二氫鈉、硝酸鉀、乙二胺四乙酸二鈉、正己烷、無水乙醇、氨水，均為分析純，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；砷標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度100 μg/mL，編號BZJK0230，批號20D6421），As3+標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書編號GBW08666，批號2002），As5+標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書編號GBW08667，批號1902），均購于國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

健兒藥片（市售，洛陽寧竹藥業(yè)有限公司，批號20200302）；小兒驚風(fēng)七厘散（市售，云南騰藥制藥股份有限公司，批號20200505）；小兒化毒散（市售，健民藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號190708）；健兒藥丸（市售，河南信心藥業(yè)有限公司，批號200104）；小兒奇應(yīng)丸（市售，廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司，批號A04004）；小兒七珍丸（市售，朗致集團(tuán)雙人藥業(yè)有限公司，批號20060601）；小兒牛黃清心散（市售，山東廣育堂國藥有限公司，批號20191209）。

1.2.2 儀器設(shè)備 Agilent 7900型電感耦合等離子質(zhì)譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；奧豪斯PX125DZH型電子天平（美國奧豪斯公司）；CEM Mars6高通量密閉高壓微波消解儀（美國CEM公司）；HH-4水浴鍋（常州國華電器有限公司）；TDZ5-WS湘儀低速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）；默克Milli-Q?Reference超純水系統(tǒng)（默克化工技術(shù)有限公司）。

1.2.3 LC-ICP-MS檢測條件

（1）總砷的含量測定：質(zhì)譜條件為射頻功率1550 W，載氣體積流量1.04 L/min，采樣深度固定為8 mm，裝備同心霧化器的霧化室溫度為2 ℃，等離子體氣體積流量15 L/min，Ni采樣錐，輔助氣流量0.8 L/min，采樣模式為跳峰，He氣流量4.3 mL/min；自動檢測模式，每峰檢測3點(diǎn)，樣品提升速率0.5 r/s，每個樣品重復(fù)測定3次；待測元素As的/75，元素103Rh為內(nèi)標(biāo)。

（2）As3+及As5+的含量測定：色譜條件為Hamilton PRP-X100 COL（250 mm×4.1 mm，10 μm）色譜柱，流動相為磷酸二氫銨緩沖溶液（25 mmol/L），pH 8.0；等度洗脫；進(jìn)樣體積50 μL。質(zhì)譜條件：射頻功率1550 W，高純氬氣體積流量0.70 L/min，補(bǔ)償氣體積流量0.15 L/min，泵速為0.40 r/min，檢測質(zhì)量數(shù)/75（As）。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

（1）總砷標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密吸取1 mL砷標(biāo)準(zhǔn)溶液加入100 mL量瓶中，以2%的硝酸溶液稀釋至刻度，搖勻得1.00 mg/L砷標(biāo)準(zhǔn)使用液（按As計）。精密吸取砷標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00 mL于6個100 mL量瓶中，以2%硝酸溶液配成砷質(zhì)量濃度分別是0.00、1.00、2.50、5.00、10.00、20.00 ng/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液（1）～（6）。

（2）As3+及As5+標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別精密稱取1.321 0 g As3+標(biāo)準(zhǔn)溶液以及5.714 3 g As5+標(biāo)準(zhǔn)溶液于同一個100 mL量瓶中，用超純水稀釋至刻度制成As3+、As5+混合標(biāo)準(zhǔn)使用液（1.00 mg/L，按As計），現(xiàn)配現(xiàn)用。分別精密量取1.00 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0.01、0.025、0.05、0.10、0.20 mL至6個10 mL量瓶中，用超純水稀釋至刻度，配成質(zhì)量濃度分別為0.0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0 ng/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液（1）～（6）。

1.2.5 樣品前處理方法

（1）測定總砷樣品的前處理：精密稱取7種藥品各0.2 g于消解罐中，加入純硝酸7 mL，通風(fēng)櫥中靜置30 min后安上安全閥，消解罐放進(jìn)微波消解儀后微波消解32 min，冷卻后于100 ℃的趕酸儀趕酸30 min，冷卻后轉(zhuǎn)移消解液至50 mL的離心管，超純水洗滌內(nèi)罐至少3次，洗滌液轉(zhuǎn)移至管中后用純水稀釋至刻度，搖勻，取0.5 mL上述溶液于50 mL離心管中，用超純水稀釋至刻度搖勻后，重復(fù)上述稀釋操作1次得待測溶液。同時配制空白溶液。

（2）測定As3+及As5+樣品的前處理：分別稱取小兒驚風(fēng)七厘散、小兒化毒散、小兒奇應(yīng)丸、小兒七珍丸、小兒牛黃清心散0.2～0.5 g于50 mL離心管中，加20 mL硝酸溶液（0.15 mol/L），靜置過夜，90 ℃水浴提取2.5 h，隔0.5 h振蕩離心管1 min。提取結(jié)束后冷卻到室溫，4000 r/min離心15 min，取上清液通過0.45 μm的有機(jī)濾膜濾過后，取0.1 mL續(xù)濾液稀釋到100 mL得待測溶液。同時制備空白溶液。

因健兒藥片、健兒藥丸配方含有蜂蠟，且雄黃占比較小，故分別稱取約0.4 g的藥品于50 mL離心管中，按上述方法提取離心后，取5 mL上清液于離心管后加入5 mL正己烷，振蕩1 min，棄去上層正己烷后重復(fù)此操作1次，吸取下層清液，通過0.45 μm的有機(jī)濾膜濾過及C18小柱凈化后收集濾液，取0.1 mL濾液稀釋至100 mL得待測溶液。

1.2.6 方法學(xué)考察 依據(jù)藥典分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則[9]，進(jìn)行線性、檢測限、重復(fù)性、精密度、加樣回收、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，其中重復(fù)性試驗(yàn)、加樣回收試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)以小兒驚風(fēng)七厘散為試驗(yàn)樣品。

2 結(jié)果

2.1 含雄黃兒科制劑的現(xiàn)狀分析

根據(jù)篩選條件在藥典、部頒標(biāo)準(zhǔn)以及《國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》中共收集到含雄黃制劑182種，根據(jù)功能主治及用法用量劃分為34種“兒科專用制劑”、53種“兒科可用制劑”以及95種“成人專用制劑”，具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 含雄黃中藥制劑數(shù)量統(tǒng)計

2.1.1 含雄黃兒科制劑劑型統(tǒng)計 182種含雄黃制劑均為固體劑型，其中以丸劑、片劑、散劑為主。其中，87種含雄黃的兒科制劑（兒科專用制劑＋兒科可用制劑）劑型分布如圖1所示，以丸劑為主，占比49.43%，丸劑中以水丸為主，占比26.44%。

2.1.2 含雄黃兒科制劑雄黃占比及用法用量統(tǒng)計 劑量合理和使用方法正確是藥物發(fā)揮療效及保證用藥安全的重要前提。因此本研究根據(jù)制劑標(biāo)準(zhǔn)的“處方”及“用法用量”項(xiàng)統(tǒng)計了含雄黃兒科制劑中雄黃占比及用法用量情況。結(jié)果顯示在87種含雄黃兒科制劑中準(zhǔn)確規(guī)定了服用劑量的有36種，占比41.38%，注明了“酌減”或“酌加”等模糊關(guān)鍵詞的品種51個，占比58.62%；對兒童服藥的年齡進(jìn)行準(zhǔn)確劃分的有43種，占比49.43%，年齡劃分模糊的有36種，占比41.38%，無年齡劃分的有8種，占比9.19%。另外，藥典中對雄黃飲片的日服用劑量規(guī)定為0.05～0.1 g[1]，其中六應(yīng)丸、點(diǎn)舌丸、牛黃醒腦丸的處方劑量保密，因此對統(tǒng)計的其他84種含雄黃兒科制劑中雄黃占比及單日最大、最小雄黃服用量進(jìn)行換算統(tǒng)計，如圖2、3所示，大部分制劑的雄黃占比在2.5%～12.5%，較少制劑超過20%。而大部分制劑中雄黃的日服用最大量高于藥典規(guī)定，34種制劑的最小日服用量超過了限定值。

圖1 含雄黃兒科制劑劑型統(tǒng)計

2.1.3 含雄黃兒科制劑功能主治分析 兒童常見病癥主要涉及呼吸道疾病、皮膚疾病、腸道疾病、傳染類疾病等，然而目前市場上的兒科中成藥多集中針對于呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)。統(tǒng)計87個含雄黃兒科制劑的功能主治中主要關(guān)鍵詞出現(xiàn)頻次，其中，具有“祛風(fēng)鎮(zhèn)驚”功效的有41個，占比47.13%；具有“清熱解毒”功效的有31個，占比35.63%；具有“祛痰”功效的有30個，占比34.48%；可“止痢”的有6個，占比6.90%。統(tǒng)計結(jié)果顯示藥典中含雄黃兒科制劑主要用于治療兒童驚風(fēng)、瘡癰腫毒、痢疾等疾病。

圖2 含雄黃兒科制劑處方中雄黃占比

圖3 含雄黃兒科制劑雄黃日服劑量分布

2.1.4 含雄黃兒科制劑砷元素檢查項(xiàng)分析 雄黃中的元素砷主要以難溶性的As2S2形式存在，但是即使經(jīng)過水飛法炮制仍然會存在部分可溶性砷如As2O3，藥典中以砷斑法限定雄黃藥材中可溶性As2O3含量以保證其安全合格。在統(tǒng)計的181個含雄黃中藥制劑中，18個質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中包含As2O3檢測項(xiàng)，占比9.94%，在87種含雄黃兒科制劑中，僅有8個品種具有砷檢測項(xiàng)，占比9.20%。

2.2 含雄黃方劑的特點(diǎn)分析

根據(jù)篩選條件在《中醫(yī)方劑大辭典》（1～11冊）中共錄入含雄黃方劑2930條。根據(jù)方劑來源如《小兒藥證直訣》、功能主治及用法用量來判斷是否可用于兒童，篩選得到專用小兒疾病的459條，占比15.67%；可用于兒童的263條，占比8.98%；二者共722條，占24.65%。

2.2.1 含雄黃兒科方劑劑型統(tǒng)計 在含雄黃兒科方劑中，各種劑型的數(shù)量及比例是丸劑420個（56.65%）、散劑229個（31.72%）、膏劑38個（5.26%）、錠劑11個（1.52%）、湯劑10個（1.39%）、餅劑6個（0.83%）、丹藥4個（0.55%）以及其他4個（0.55%）。結(jié)果顯示丸劑是最常用劑型，這與雄黃不入煎劑有一定關(guān)聯(lián)。

2.2.2 含雄黃兒科方劑主治兒童病癥統(tǒng)計 以精煉的詞概括含雄黃兒科方劑的功效，如治療小兒急慢驚風(fēng)概括為祛風(fēng)鎮(zhèn)驚。出現(xiàn)頻次最多的前20個關(guān)鍵詞見表2，以“祛風(fēng)鎮(zhèn)驚”“清熱除疳”及“祛風(fēng)止痙”排名前3。另外，分別統(tǒng)計了含雄黃兒科方劑的常見主治病癥“驚癇”“疳”“瘡”“痘”以及“痧痢”分布情況，如圖4所示，“驚癇”及“疳”癥為含雄黃兒童方劑的主治病證，也屬于中醫(yī)兒科4大證。這顯示含雄黃兒科方劑在治療兒科疾病上的廣泛性，具有較好的開發(fā)價值。

表2 含雄黃兒科方劑功效關(guān)鍵詞頻數(shù)

圖4 含雄黃兒科方劑主治病證分布統(tǒng)計

2.2.3 含雄黃兒科方劑藥物配伍頻次統(tǒng)計 統(tǒng)計了722條含雄黃兒科方劑藥物配伍使用情況，涉及到540味藥物，總頻次6848。配伍頻次最高的前30味藥物見表3，頻數(shù)大于100的中藥中有鎮(zhèn)靜安神藥朱砂，開竅藥麝香、冰片，祛風(fēng)止痙藥牛黃、全蝎，補(bǔ)虛和中藥甘草，清熱化痰藥天竺黃，這與統(tǒng)計的高頻功效關(guān)鍵詞相吻合。鏈接數(shù)大于30的核心藥物網(wǎng)絡(luò)圖見圖5，藥物連接線及顏色深淺表示藥物配伍關(guān)系及強(qiáng)度，由圖可知朱砂、牛黃、麝香、冰片等藥物常與其他藥物配伍，且它們之間常常存在配伍關(guān)系。

2.2.4 含雄黃兒科方劑藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則分析 利用R語言的Apriori算法分別對主治病證為“驚癇”“疳”“痘”“痧痢”“瘡”的含雄黃兒科方劑中的藥物進(jìn)行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析，設(shè)置支持度＞7%，置信度＞60%，分別得到關(guān)聯(lián)規(guī)則1892、444、618、2196、60條，所有關(guān)聯(lián)藥對提升度均大于1。由于每個方劑中均含有雄黃，因此篩除單味藥→雄黃的藥對規(guī)則后，根據(jù)疾病分類進(jìn)行可視化分析，以置信度高低排列核心藥對。5種病證的置信度大于0.8的藥對規(guī)則見表4。對于治療小兒驚癇來說，輕粉、麝香、雄黃→朱砂藥物組合的支持度與置信度最高，防風(fēng)、牛黃、全蝎、雄黃→天麻藥物組合的提升度最高；對于疳癥來說，雄黃、熊膽→麝香藥物組合的置信度、支持度及提升度最高；對于兒童痘疹來說，沒藥、乳香、雄黃→朱砂藥對的置信度與支持度最高，琥珀、麝香、雄黃、朱砂→膽南星以及琥珀、麝香、雄黃、朱砂→天竺黃藥對的提升度最高；對于兒童痧痢，置信度與支持度最高的藥對是半夏、藿香、雄黃→陳皮，提升度最高的是藿香、木香、雄黃→桔梗；至于治療瘡癰，置信度、支持度及提升度最高的藥對是乳香、雄黃→沒藥。5種疾病對應(yīng)的藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則的可視化網(wǎng)狀圖見圖6，點(diǎn)的大小表示置信度大小，顏色深淺代表提升度大小，可直觀顯示較核心藥物之間的關(guān)聯(lián)規(guī)律。

表3 含雄黃兒科方劑配伍藥物頻數(shù)

圖5 含雄黃兒科方劑配伍核心藥物網(wǎng)絡(luò)

2.3 市售7種含雄黃兒科制劑中總砷及可溶性砷含量

考慮到含雄黃兒科制劑及方劑功能主治統(tǒng)計結(jié)果，故選取了目前市售功能主治為祛風(fēng)鎮(zhèn)驚的小兒驚風(fēng)七厘散、小兒奇應(yīng)丸、小兒七珍丸、小兒牛黃清心散，主治消化不良的健兒藥片、健兒藥丸以及主治瘡癰的小兒化毒散為研究對象，測定7種藥品中總砷及可溶性砷的含量。

7種藥物中以小兒驚風(fēng)七厘散中雄黃占比最少，為2.31%，健兒藥片及健兒藥丸中雄黃占比最高，為16.22%，其他4種雄黃占比在5%～10%。

2.3.1 方法學(xué)考察

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線：總砷（As75）、AS3+及As5+的線性方程及相關(guān)系數(shù)如表5所示，結(jié)果顯示3者標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，達(dá)到分析要求。

（2）檢測限：總砷、As3+、As5+的方法檢出限分別為0、0.001 7、0.000 5 mg/kg，達(dá)到分析要求。

（3）精密度：總砷、As3+、As5+的精密度RSD分別為1.47%、1.20%和4.20%，證明儀器精密度良好。

表4 含雄黃兒科方劑藥物-疾病關(guān)聯(lián)規(guī)則

表5 標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)

（4）重復(fù)性：總砷測定的RSD為0.80%；As3+、As5+的RSD分別為3.50%、7.21%，證明方法重復(fù)性符合藥典要求。

（5）穩(wěn)定性：總砷的RSD為1.10%；As3+、As5+的RSD分別為1.83%、1.53%，證明方法在24 h穩(wěn)定性良好。

（6）加樣回收率：總砷加樣回收率為96.55%，RSD為0.45%；As3+、As5+的加樣回收率分別為92.7%、93.8%，RSD分別為7%、2%，證明方法準(zhǔn)確性符合藥典要求[9]。

2.3.2 總砷的測定結(jié)果 準(zhǔn)確稱取市售的7種含雄黃兒科制劑各0.2 g，經(jīng)前處理后，利用ICP-MS法測定總砷含量，結(jié)果顯示健兒藥片中總砷的含量最高，小兒牛黃清心散中總砷的含量最低，結(jié)果見表6。

2.3.3 可溶性無機(jī)砷的測定結(jié)果 7種含雄黃兒科制劑中均檢測到了As3+與As5+，其中As3+含量最高的藥物為小兒化毒散，最低的為小兒牛黃清心散；As5+含量最高的為小兒奇應(yīng)丸，最低的為健兒藥丸，總無機(jī)砷含量最高的為小兒奇應(yīng)丸，最低的為小兒牛黃清心散，結(jié)果見表7。

3 雄黃合理應(yīng)用與研究的解決策略

雄黃作為古代中醫(yī)常用于兒科藥物，具有功能主治廣的特點(diǎn)。然而現(xiàn)代研究中因其主含元素砷而備受安全性爭議。在目前國家大力扶持中醫(yī)藥復(fù)興的背景下，以更加客觀全面地研究探討雄黃在兒科制劑的開發(fā)可行性是必要的。本研究結(jié)合古今分析雄黃在兒科的應(yīng)用特點(diǎn)，可見含雄黃兒科制劑存在部分兒科制劑通用的問題，但在兒童疾病治療的適應(yīng)證范圍上有獨(dú)特優(yōu)勢，這對兒科制劑匱乏的今天極具研究價值。研究含雄黃兒科制劑的開發(fā)可行性，首要任務(wù)是確定其療效，可從古代中醫(yī)用藥規(guī)律探索方向。其次便是保證用藥的安全性問題，這要求進(jìn)行全面的質(zhì)量控制研究，特別是其中的可溶性砷，最后是要改善兒科制劑存在的普遍問題即兒童適應(yīng)性問題，這需要從制劑手段及給藥裝置上進(jìn)行改進(jìn)。

圖6 含雄黃兒科方劑核心藥物-疾病關(guān)聯(lián)規(guī)則網(wǎng)絡(luò)圖

表6 含雄黃兒科藥品中總砷的含量

表7 含雄黃兒科藥品中As3+與As5+的含量

雄黃的藥效與毒性休戚相關(guān)，因此構(gòu)建含雄黃制劑的“量-效-毒”研究至關(guān)重要?！耙孕窳?、以毒限量、效毒權(quán)衡”是中藥特別是有毒中藥的用量指導(dǎo)原則。因此研究含雄黃制劑時，需要在綜合雄黃質(zhì)量[10]、適用證、適用人群及藥物配伍的基礎(chǔ)上考察雄黃量、效、毒之間的關(guān)系，為雄黃在兒科應(yīng)用中的科學(xué)性與安全性提供數(shù)據(jù)支撐。

3.1 兒科適應(yīng)證的擴(kuò)展

3.1.1 雄黃配伍治療驚癇 統(tǒng)計顯示驚癇為雄黃配伍治療的主要兒科病癥。驚癇是常發(fā)于兒童時期的危急重癥，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的癲癇、驚厥等疾病具有相似性[11]。古代典籍中“驚癇”和“驚風(fēng)”病因、病機(jī)、發(fā)病特點(diǎn)，具有高度相似性。由于統(tǒng)計的方劑來源于不同歷史時期，故以“驚癇”統(tǒng)稱，而宋代以后典籍中論述病因病機(jī)以“驚風(fēng)”為主。根據(jù)病因病程不同，驚風(fēng)有急慢之分，需辨證分治，陽癇相當(dāng)于急驚風(fēng)，陰癇相當(dāng)于慢驚風(fēng)。急驚風(fēng)主要由驚、風(fēng)、熱以及痰相互影響，常用息風(fēng)止痙、鎮(zhèn)靜安神、清熱祛痰等藥物相互配伍。高頻藥物中的息風(fēng)止痙藥有牛黃、全蝎、白僵蠶等，鎮(zhèn)靜安神藥包括朱砂、琥珀等；清熱祛痰藥有天竺黃、黃連等，挖掘的關(guān)聯(lián)規(guī)則與之相對應(yīng)。實(shí)驗(yàn)證明?；撬?、全蝎中的多肽、白僵蠶蛋白提取物、天麻素、麝香酮、膽南星水煎液、冰片及結(jié)構(gòu)修飾物等具有抗驚厥活性或神經(jīng)保護(hù)作用[12-18]。由相關(guān)藥物配伍的藥物小兒牛黃清心散、固本防驚湯、安宮牛黃丸等可有效防治動物驚厥[19-21]。慢驚風(fēng)因肝、脾、腎受損，虛而生風(fēng)，或由急驚風(fēng)轉(zhuǎn)化，病久已虛，需在鎮(zhèn)靜安神的基礎(chǔ)上補(bǔ)脾益腎，故治療時除了息風(fēng)止痙藥，還需要搭配補(bǔ)虛藥如甘草、麥冬、人參等。研究表明人參皂苷、麥冬皂苷具有神經(jīng)損傷修復(fù)及保護(hù)作用[22-23]，含有太子參、甘草的防驚湯可預(yù)防大鼠驚厥復(fù)發(fā)[24]。

3.1.2 雄黃配伍治療疳癥 兒童脾胃嬌弱，飲食不當(dāng)易導(dǎo)致脾胃失調(diào)，其治療原則以疏肝健脾、和胃消積為主，清熱瀉火、補(bǔ)氣養(yǎng)血為輔，因此疳癥治療常需配伍消食化積藥、清熱解毒藥、殺蟲藥。雄黃入肝經(jīng)可疏肝且具有殺蟲功效故常用于疳癥。配伍關(guān)聯(lián)規(guī)則及其核心藥物網(wǎng)絡(luò)中的蘆薈、大黃、巴豆為瀉下藥，均入胃、大腸經(jīng)，可消除食積；胡黃連、青黛、黃連及熊膽為清熱藥，可清心脾虛火；全蝎、熊膽等具有殺蟲功效，可消蛔。具有破積驅(qū)蟲，開胃進(jìn)食功效的健兒藥片與健兒藥丸也配伍殺蟲藥使君子與瀉下藥巴豆。根據(jù)疳癥病程階段，雄黃可配伍不同藥物以治療小兒疳癥。

3.1.3 雄黃配伍治療痘、瘡 兒童痘疹中醫(yī)的治療原則是清熱化濕解毒。雄黃本身具有解毒殺蟲燥濕功效，可用于治療痘疔。配伍關(guān)聯(lián)規(guī)則及其核心藥物網(wǎng)絡(luò)中的乳香、沒藥、琥珀、血竭等藥物內(nèi)服外用具有生肌之效，蟾酥、朱砂具有解毒之效，天竺黃、膽南星具有清熱之效，珍珠兼具清熱解毒生肌之效，各藥配伍使用可治療痘疹。

《幼幼集成》中記載：“諸痛癢瘡瘍，皆屬心火，世間瘡瘍癤疥，惟小兒最多”[25]，故治療小兒生瘡以清熱祛風(fēng)除濕為主。雄黃自身可祛濕，配伍關(guān)聯(lián)規(guī)則中的乳香、沒藥可生肌消腫，冰片、黃連等可清熱解毒祛濕，朱砂、蟾酥可解毒止痛，麝香具有活血止痛之效，藥物配伍使用可清熱解毒、斂瘡生肌、止血消腫，共同治療小兒瘡癰?，F(xiàn)有的市售制劑小兒化毒散便由珍珠、乳香、沒藥、黃連、冰片、雄黃等藥物配伍制成，可口服或外用以治療小兒瘡瘍。

3.1.4 雄黃配伍治療痧痢 痧痢常因感染時令不正之氣或飲食衛(wèi)生問題所致，根據(jù)病因不同分為熱痧、寒痧及絞腸痧[26]。治療原則主要是祛濕化濁、開竅祛暑等。雄黃的主要功效中便有祛濕解毒。熱痧因暑熱、污濁內(nèi)阻所致，常需清熱、解毒、燥濕藥配伍治療，這與關(guān)聯(lián)規(guī)則藥物網(wǎng)絡(luò)中黃連、青黛、冰片、珍珠、牛黃、貫眾、桔梗等藥物相吻合；寒痧主要因寒濕中阻所致，常需搭配祛濕散寒藥、開竅藥如藿香、半夏、細(xì)辛等；絞腸痧因暑濕阻中焦、氣機(jī)閉塞所致，因腹痛明顯，治療中需搭配理氣藥如木香行氣止痛，又因其易傷脾胃，故需健脾藥物如陳皮等配伍使用。

3.2 劑型的創(chuàng)新

統(tǒng)計結(jié)果顯示，當(dāng)前含雄黃兒科制劑中丸劑占比超過50%，而丸劑中又以不便兒童服用的大蜜丸為主。大蜜丸起效遲緩，而含雄黃制劑常用于驚風(fēng)等較緊急的病證。另外，部分兒童成人兼用制劑的兒童用藥劑量小于藥物最小規(guī)格，需拆分服用，這造成了一定的用藥劑量不準(zhǔn)及釋藥效果不佳等問題[27]。因此在開發(fā)含雄黃兒科制劑時應(yīng)該考慮到劑型的創(chuàng)新。低齡兒童較適宜的劑型有小劑量液體劑型如滴劑、糖漿劑、混懸劑；學(xué)齡期兒童傾向考慮口崩片、咀嚼片等固體制劑[28]。考慮到兒童的天性，還可以考慮引入3D打印技術(shù)制作出更加生動有趣的形狀、顏色、大小的藥片[29]。

為了減少用藥失誤，避免分劑量破壞藥品的結(jié)構(gòu)，研發(fā)人員在制劑開發(fā)過程中重視兒科制劑規(guī)格的問題，特別是對于兒童成人均可使用的制劑應(yīng)分規(guī)格生產(chǎn)，如將小劑量兒童用藥開發(fā)為最小制劑單元為微片（直徑≤3 mm的片劑）[30]。合適的給藥裝置對兒童精準(zhǔn)服藥也具有好的輔助作用，目前常見的兒童給藥裝置有量匙、量杯、滴管、口腔注射劑等[31]。

3.3 制劑用法說明的規(guī)范

不同年齡段的兒童由于身體素質(zhì)差異對藥物的吸收代謝有較大差異，這就要求兒科給藥劑量及方法精準(zhǔn)可靠。然而統(tǒng)計結(jié)果顯示，多數(shù)含雄黃兒科中藥制劑存在用法用量不準(zhǔn)、年齡劃分不準(zhǔn)確不完整的問題（如以“小兒”“兒童”等模糊語劃分年齡），超半數(shù)制劑的雄黃兒童日用量超過按單味雄黃藥典規(guī)定用量。因此，在制定含雄黃兒科藥品說明書時需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究盡量明確用法用量，減少模糊語的出現(xiàn)。

3.4 砷元素分析質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立

影響雄黃毒性的最關(guān)鍵因素在于其可溶性砷的價態(tài)及形態(tài)，可溶性砷包含三價和五價，在毒性上三價大于五價，無機(jī)砷大于有機(jī)砷。《中國藥典》2020年版一部第1次對雄黃藥材中的三價砷和五價砷以砷計的總量規(guī)定限量7%，檢測儀器是液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜聯(lián)用儀。然而本研究結(jié)果顯示，絕大多數(shù)含雄黃的制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中不含砷檢查項(xiàng)，部分規(guī)定了砷檢查項(xiàng)的制劑其檢測方法也僅限于砷鹽半定量檢查法。本研究測定的7種含雄黃兒科制劑中三價砷與五價砷的含量都遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其總砷含量，以As計含量均小于1%，遠(yuǎn)低于藥典中雄黃藥材中三價砷與五價砷的總量低于7%的限量。另外，檢測結(jié)果證明藥品制劑總砷含量高并不代表其可溶性無機(jī)砷含量高。聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織在2010年修訂無機(jī)砷攝入限量為每日3 μg/kg（2～7 μg/kg），若按1歲兒童體質(zhì)量10 kg算，健兒藥片、小兒驚風(fēng)七厘散、小兒化毒散、健兒藥丸、小兒七珍丸、小兒奇應(yīng)丸及小兒牛黃清心散的日服用劑量分別為0.050、0.100、0.600、0.100、0.093、0.130、0.300 g，根據(jù)檢測結(jié)果計算無機(jī)砷的日攝入量分別為5.26、6.06、80.88、8.89、11.17、19.00、9.54 μg/kg，此結(jié)果顯示對比日常食品中無機(jī)砷的嚴(yán)格要求，部分藥品存在差距，但是藥品不必如食品長期使用，這進(jìn)一步證明了對于含雄黃兒科制劑的質(zhì)量控制方面，若以砷元素為限量對象，不僅需要關(guān)注總砷，毒性大的無機(jī)砷更值得關(guān)注。另外中藥復(fù)方配伍常具有增效減毒之效，雄黃的毒性與配伍藥物也有一定關(guān)系[32-33]，因此在制定含雄黃兒科制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，合理制定兒童服用劑量及其中可溶性砷的含量限定值。現(xiàn)代精準(zhǔn)的儀器分析手段如液相色譜聯(lián)用原子熒光光譜法、原子吸收光譜法、電感耦合等離子質(zhì)譜法等也應(yīng)盡量代替半定法來制定三價砷及五價砷的含量測定標(biāo)準(zhǔn)[34-35]，為含雄黃兒科制劑的安全提供科學(xué)保障。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Application law and solution strategy of mineral medicine realgar in pediatric preparations based on data mining and arsenic content

WANG Wen-fang, ZHU Mao-mao, YANG Yan-jun, YE Liang, JIA Xiao-bin, FENG Liang

School of Traditional Chinese Pharmacy, China Pharmaceutical University, Nanjing 211198, China

To explore the application laws and development value of realgar in pediatric preparations based on the formula and prescriptions containing realgar.Excel 2019 was used to analyze the application characteristics of pediatric preparations containing realgar in national standards such as. Spss Modeler and R language were used to mine the data of association rules of drug compatibility of the prescriptions containing realgar in the(volumes 1—11). In addition, the contents of total arsenic and soluble inorganic arsenic in seven pediatric preparations containing realgar were measured by HPLC-ICP-MS.Compared with the common pediatric traditional Chinese medicine preparations, pediatric preparations containing realgar had advantages in the nervous system, but there were problems such as inappropriate dosage form, unreasonable dosage and lack of quality control, etc. The compatibility rules of pediatric prescriptions containing realgar could provide a reference for the development of modern traditional Chinese medicine for the treatment of eclampsia, malnutrition, pox, sore and Sha. The content of total arsenic in marketed pediatric preparations containing realgar was much higher than that of soluble inorganic arsenic, and there was no correlation between them.Realgar has the advantage of wide therapeutic effect in the development of pediatric preparations, but the form, dosage and quality standards need to be further improved.

realgar; pediatric preparations; data mining; arsenic; association rules;compatibility regularity

R283.2；R282.76

A

0253 - 2670(2023)01 - 0181 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.01.021

2022-08-20

國家重點(diǎn)研發(fā)計劃中藥現(xiàn)代化專項(xiàng)（2018YFC1706900）；中國藥科大學(xué)雙一流創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)（CPU2018GY11）；天然藥物活性組分與藥效國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室資助項(xiàng)目（SKLNMZZ202025）；江蘇省科技成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)資金（BA2020077）

汪文芳（1999—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幹苿?。E-mail: 18851100831@163.com

通信作者：封 亮（1981—），男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┡c創(chuàng)新中藥研究。E-mail: wenmoxiushi@163.com

賈曉斌（1966—），男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幣谥婆c特色制藥技術(shù)的傳承與創(chuàng)新。E-mail: jiaxiaobin2015@163.com

[責(zé)任編輯 潘明佳]