彭麗華，袁鐵軍，高 進(jìn)，李 東，施沐陽，尚 強(qiáng)*

麝香舒活靈水凝膠劑的制備與體外評(píng)價(jià)

彭麗華1, 2，袁鐵軍1，高 進(jìn)3，李 東4, 5，施沐陽1，尚 強(qiáng)4, 5*

1. 浙江大學(xué)藥學(xué)院，浙江 杭州 310058 2. 中醫(yī)藥質(zhì)量研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，澳門科技大學(xué)，澳門 999078 3. 廣東省氣溶膠吸入制劑工程技術(shù)研究中心，廣東 珠海 528447 4. 麗珠醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司，廣東 珠海 519090 5. 四川省抗病毒中藥產(chǎn)業(yè)化工程技術(shù)研究中心，四川 成都 611930

通過基于水凝膠的劑型改良，制備麝香舒活靈水凝膠劑（Shexiang Shuohuoling Hydrogel，SS-H），解決原麝香舒活靈酊劑（Shexiang Shuhuoling Tincture，SS-T）的刺激性和親水性活性成分遞送不良等問題，并優(yōu)化SS-H處方。通過單因素試驗(yàn)篩選SS-H制備的最佳條件，并考察凝膠流變特性、平衡含水量與氧氣滲透性等物化表征。在膠原酶模擬體表環(huán)境下考察體外生物降解，并比較SS-H與粗提物和SS-T的體外釋放，皮膚滲透性能和生物相容性。SS-H的最佳處方為2%卡波姆、5%甘油、1.6%三乙醇胺，不需要促透劑。SS-H具有可觀的可涂抹性和物理強(qiáng)度，并表現(xiàn)出一定的保濕性與透氧性，體外降解性能良好。在親脂性藥物的體外釋放和皮膚滲透率未受顯著影響下，親水性藥物羥基紅花黃色素A在SS-H中的累積釋放率和皮膚滲透率比在SS-T中分別提高了20%和40%。此外SS-H將皮膚細(xì)胞活力相對(duì)粗提物提高了20%～60%，顯示出良好的生物相容性，而SS-T對(duì)細(xì)胞活力無明顯促進(jìn)作用。對(duì)SS-T進(jìn)行凝膠制劑的改良，是有效的劑型改良策略，制備的SS-H物化性能良好，可緩解原酊劑對(duì)人體的刺激性并增強(qiáng)親水性活性成分的局部遞送效果，為優(yōu)化基于中藥復(fù)方的傳統(tǒng)外用制劑提供了新的劑型改良策略。

麝香舒活靈；酊劑；水凝膠；外用制劑；藥物遞送；透皮吸收

麝香舒活靈是由麝香、三七、血竭、紅花、地黃、樟腦、冰片、薄荷腦8味藥材采用乙醇滲漉提取工藝[1-2]制備的傳統(tǒng)中藥配方，具有活血化瘀、消腫止痛、舒筋活絡(luò)的功效[3-4]，目前主要以酊劑的形式上市（國藥準(zhǔn)字Z51020078），用于治療各種閉合性新舊軟組織損傷和肌肉疲勞酸痛。由于酊劑存在生產(chǎn)周期長、所含乙醇可與頭孢類藥物產(chǎn)生反應(yīng)且對(duì)皮膚具有刺激性[5-6]、涂擦后不易在體表留存和遞送不良等問題[7-8]，亟需對(duì)麝香舒活靈的劑型進(jìn)行改良[9-10]。水凝膠作為成熟的外用制劑藥物載體，具有保證藥物在長時(shí)間內(nèi)持續(xù)釋放、水化角質(zhì)層，促進(jìn)藥物的透皮吸收等優(yōu)勢(shì)[11-13]。同時(shí)也可保持受藥部位濕潤、透氣，有利于組織的恢復(fù)，減少疼痛或疤痕[14-16]。因此，本研究旨在制備一種麝香舒活靈水凝膠劑（Shexiang Shuohuoling Hydrogel，SS-H），并考察其流變特性、平衡含水量與氧氣滲透性、體外生物降解、體外釋放研究和生物相容性等多項(xiàng)性能[17]，為存在同類不足的中藥酊劑改良為凝膠劑奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州澳華儀器有限公司；CS101-2EB電熱鼓風(fēng)干燥箱，重慶四達(dá)試驗(yàn)設(shè)備有限公司；Agilent氣相色譜儀、RYJ-6B型藥物透皮擴(kuò)散試驗(yàn)儀，上海黃海藥檢儀器有限公司；C1820型弗蘭茲擴(kuò)散池，上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司；TK-24BL經(jīng)皮吸收儀，上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司；Anton Paar MCR302旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)，奧地利安東帕公司。

麝香舒活靈中間體，按照麝香舒活靈滲漉提取工藝，由麗珠醫(yī)藥集團(tuán)四川光大制藥有限公司提供人工麝香、三七等8味藥材制備；卡波姆980NF，黏度40～60 Pa·s，路博潤化學(xué)（昆山）有限公司；羥丙甲纖維素（黏度400 Pa·s，編號(hào)XW900465317）、羧甲基纖維素鈉（編號(hào)30036328），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；對(duì)照品羥基紅花黃色素A（hydroxysafflor yellow A，HYA，批號(hào)11637-201609，相對(duì)分子質(zhì)量612.53）、樟腦（批號(hào)110747-201409，相對(duì)分子質(zhì)量152.23）、龍腦（批號(hào)110881-201508，相對(duì)分子質(zhì)量154.25），中國食品藥品檢定研究院；水凝膠樣品，SNCF20-4、SNCF21-4，自制；氮酮，天門科捷制藥有限公司，批號(hào)160201；脫毛劑，8%硫化鈉溶液，自制；0.9%氯化鈉注射液，批號(hào)S20151226，上海百特醫(yī)療用品有限公司；無水乙醇、無水甲醇和乙腈均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；其他試劑均為分析純。

豚鼠，Hartley普通級(jí)，雄性，體質(zhì)量240～260 g，購于廣州省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK（粵）2014-0035。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程均遵守廣州省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)的指導(dǎo)方針和規(guī)程。人表皮HaCaT細(xì)胞和人皮膚成纖維HSF細(xì)胞購自中國科學(xué)院ATCC細(xì)胞研究所。

2 方法與結(jié)果

2.1 凝膠基質(zhì)的篩選及空白凝膠的制備

選取凝膠常用基質(zhì)卡波姆980NF（CP）、羥丙甲纖維素（HPMC）和羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）作為凝膠基質(zhì)篩選對(duì)象，分別按以下2種方法進(jìn)行制備：①取適量凝膠劑基質(zhì)，然后逐步加水，放置過夜，使其充分溶脹；②取適量凝膠劑基質(zhì)，分次撒于水面上，靜置過夜，使其充分溶脹。

根據(jù)凝膠外觀、黏性、流動(dòng)性為指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分，結(jié)果見表1、2。采用制備方法2得到的1.5%～2.0%卡波姆空白凝膠較好，表現(xiàn)為白色半固體，黏度適中，成型性好，穩(wěn)定性好。

2.2 SS-H中指標(biāo)成分樟腦和龍腦測(cè)定方法的建立

2.2.1 色譜條件 以聚乙二醇-20兆為固定相的毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；程序升溫：起始溫度為100 ℃，以5 ℃/min的速率升溫至200℃；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；檢測(cè)器溫度為250 ℃；分流比為10∶1；理論板數(shù)按龍腦峰計(jì)算應(yīng)不低于20 000。色譜圖見圖1。

表1 水凝膠制備方法選擇試驗(yàn)結(jié)果

“?”差（可見氣泡＞10，難以流動(dòng)，無黏性） “+”一般（可見氣泡3≤≤10，流動(dòng)緩慢，有一定黏性且易分離） “++”良好（可見氣泡＜3，易流動(dòng)，黏性較強(qiáng)且不易分離） “/”無該表征

“?” terrible (visible bubble> 10, difficult to flow, non-viscous) “+” general (visible bubble 3 ≤≤ 10, slow flow, a certain viscosity and easy separation) “++” better (visible bubble< 3, liquid, viscous and not easy to separate) “/” none

表2 SS-H基質(zhì)用量篩選試驗(yàn)結(jié)果

“?”差（無黏性；很難延展和涂布；穩(wěn)定性評(píng)價(jià)出現(xiàn)較嚴(yán)重分層）；“+”一般（有一定黏性且易分離；難以延展，不易涂布；穩(wěn)定性評(píng)價(jià)出現(xiàn)分層） “++”良好（黏性較強(qiáng)且不易分離；易延展涂布；穩(wěn)定性評(píng)價(jià)不分層）

“?” none (it is not sticky; hard to extend and smear; severelystratified in stability evaluation) “+” general (it is sticky and easy to separate; difficult to extend and smear; stratified in stability evaluation) “++” good (strong viscosity and difficult to separate; easy to extend and smear; not stratified in stability evaluation)

2.2.2 供試品溶液的制備 取SS-H約1.0 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加甲醇超聲處理20 min（功率300 W、40 kHz），放至室溫后加甲醇定容至刻度，搖勻，即得。

圖1 樟腦、龍腦混合對(duì)照品(a)和SS-H樣品(b)的GC圖

2.2.3 線性關(guān)系考察 將按照“2.2.2”項(xiàng)方法精密配制的樟腦、龍腦混合對(duì)照品溶液A（其中樟腦質(zhì)量濃度為8.702 38 mg/mL，龍腦質(zhì)量濃度為2.908 84 mg/mL），稀釋成5種不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液（樟腦質(zhì)量濃度分別為8 702.38、4 351.19、 2 175.59、1 087.80、217.56 μg/mL，龍腦質(zhì)量濃度分別為2 908.84、1 454.42、727.21、363.61、72.72 μg/mL）；精密吸取不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，以對(duì)照品進(jìn)樣質(zhì)量濃度（）對(duì)峰面積（）進(jìn)行線性回歸，樟腦的回歸方程為＝1 660.8－87.9（＝0.999 9），龍腦的回歸方程為＝1 801.3－35.1（＝0.999 8），結(jié)果表明樟腦在217.56～8 702.38 ng，龍腦在72.72～2 908.84 ng線性關(guān)系均良好。

2.2.4 精密度考察 精密吸取樟腦質(zhì)量濃度為2.0 mg/mL、龍腦質(zhì)量濃度為0.8 mg/mL的對(duì)照品溶液和供試品溶液各1 μL，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算得到樟腦峰面積的RSD為0.50%，龍腦峰面積的RSD為0.51%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性考察 取SS-H 6份，每份1.0 g，加甲醇適量，超聲處理20 min（功率300 W、40 kHz），放冷后甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，注入氣相色譜儀，依法測(cè)定樟腦和龍腦的含量，計(jì)算得樟腦質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD為1.0%，龍腦質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD為0.97%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性考察 分別在制備后0、3、6、9、12、18、24、36 h，精密吸取供試品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算得樟腦、龍腦峰面積的RSD分別為0.73%、1.50%，表明供試品溶液在36 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 加樣回收率考察 精密稱定SS-H 0.5 g置量瓶中，每3份為1組（已測(cè)定樟腦和龍腦含量），共3組，分別加入一定量的對(duì)照品溶液（第1、2、3組分別精密加入2.2.3中混合對(duì)照品溶液A 5、10、15 mL），按照“2.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，注入氣相色譜儀測(cè)定樟腦和龍腦的含量，計(jì)算得樟腦的平均加樣回收率為100.82%，RSD為1.01%，龍腦的平均加樣回收率為100.73%，RSD為1.38%，均符合定量測(cè)定要求。

2.3 單因素考察試驗(yàn)

2.3.1 保濕劑甘油用量篩選 按“2.1”項(xiàng)下1.5%配方制成空白卡波姆凝膠，邊攪勻邊加入與卡波姆等量的麝香舒活靈中間體和0、5%、10%、15%甘油，然后加入與卡波姆等量的三乙醇胺，最后加純化水制成SS-H。以其外觀、黏度、涂展性、穩(wěn)定性（高溫、低溫、離心）等指標(biāo)，篩選保濕劑的用量，結(jié)果見表3。使用10%、15%甘油時(shí)，油膩感太強(qiáng)且15%甘油的凝膠離心時(shí)出現(xiàn)分層；而不加甘油時(shí)，無保濕性能，故選擇甘油使用量為5%，表現(xiàn)為棕色半固體，涂展性好。黏度適中，穩(wěn)定性好，略有油膩感。

2.3.2 pH調(diào)節(jié)劑三乙醇胺用量的篩選 按“2.1”項(xiàng)下方法制成空白卡波姆凝膠，邊攪勻邊加入等量的麝香舒活靈中間體和甘油，然后加入不同量的三乙醇胺調(diào)節(jié)pH值，最后加純化水制成SS-H。以其外觀、黏度、涂展性、穩(wěn)定性（高溫、低溫、離心）等指標(biāo)，篩選pH調(diào)節(jié)劑用量，結(jié)果見表4?？ú放c三乙醇胺的比例為1∶0.8時(shí)，pH值為6.22，接近人體皮膚的pH值（5.5～7.0），故選擇卡波姆與三乙醇胺的質(zhì)量比為1∶0.8，此時(shí)，SS-H表現(xiàn)為棕色半固體，涂展性好，黏度適中，穩(wěn)定性好。

表3 SS-H中保濕劑甘油用量考察結(jié)果

“?”無（很難延展和涂布；無黏性；穩(wěn)定性評(píng)價(jià)出現(xiàn)較嚴(yán)重分層；無油膩感）；“+”一般（難以延展，不易涂布；有一定黏性且易分離；穩(wěn)定性評(píng)價(jià)出現(xiàn)分層） “++”良好（易延展涂布；黏性較強(qiáng)且不易分離；穩(wěn)定性評(píng)價(jià)不分層），表4同

“?” none (hard to extend and smear; it is not sticky; severelystratified in stability evaluation; it is not greasy) “+” general (difficult to extend and smear; it is sticky and easy to separate; stratified in stability evaluation) “++” good (easy to extend and smear; strong viscosity and difficult to separate; not stratified in stability evaluation), same as table 4

表4 SS-H中pH調(diào)節(jié)劑三乙醇胺用量考察結(jié)果

2.3.3 促透劑氮酮用量的篩選

在“2.3.2”項(xiàng)篩選的配方基礎(chǔ)上繼續(xù)加入不同含量的氮酮以篩選其用量。剪取大小基本相同的鼠皮表皮層面朝向供給池，真皮層面朝向接收池，取麝香舒活靈及其凝膠樣品均勻涂布于鼠皮上。固定好后注入接收液6.5 mL。在32 ℃轉(zhuǎn)速設(shè)置為300 r/min下開始實(shí)驗(yàn)，于2、4、8、12、24 h在接收池中取樣1 mL，并補(bǔ)加對(duì)應(yīng)的新鮮接收液。測(cè)定樣品中樟腦、龍腦和HYA的含量。

（1）樟腦、龍腦含量測(cè)定：色譜條件同“2.2.1”項(xiàng)。取“2.2.3”項(xiàng)中質(zhì)量濃度分別為樟腦217.56 μg/mL和龍腦363.61 μg/mL的對(duì)照品溶液作為對(duì)照品溶液。取“2.3.3”項(xiàng)中不同時(shí)間取出的接收液，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

（2）HYA含量測(cè)定：同“2.3.3（1）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。其余均參照黃珍珍等[2]研究進(jìn)行檢測(cè)。

（3）氮酮用量的確定：樟腦和冰片的累積透過量（圖2）在8 h內(nèi)相差較大，在8 h后基本相當(dāng)，可能是藥物在凝膠劑中釋放較慢。而凝膠劑中HYA在24 h內(nèi)的累積透過量明顯高于酊劑，原因應(yīng)該是凝膠制劑比起酊劑在皮膚表面有更長的滯留時(shí)間?？傮w上看，氮酮促進(jìn)脂溶性成分樟腦和冰片透過皮膚，而抑制水溶性成分HYA的透過，考慮到麝香舒活靈處方中有效成分復(fù)雜，加上處方中薄荷腦等本身具有促滲的作用，又因三七、紅花等在處方中為君臣藥，故選擇不加氮酮。

2.3.4 SS-H的制備工藝 優(yōu)化SS-H的制備工藝為取20 g卡波姆與50 g甘油充分溶脹后加入提取藥液與16 g三乙醇胺，攪拌均勻后加純化水適量制成1000 g凝膠。

圖2 麝香舒活靈及其凝膠劑透皮吸收特性曲線

2.4 SS-H制劑學(xué)評(píng)價(jià)

2.4.1 流變特性 采用振蕩應(yīng)力掃頻試驗(yàn)和頻率掃頻試驗(yàn)。樣品在25 ℃下以1 Hz的恒定頻率承受0.01～110 Pa的遞增應(yīng)力。并在25 ℃的線性黏彈性場(chǎng)中以1 Pa的恒定應(yīng)力對(duì)樣品進(jìn)行從0.01～200 Hz的逐級(jí)遞增的頻率測(cè)試。試驗(yàn)過程中監(jiān)測(cè)了彈性模量（′）和黏性模量（″）。研究獲得的對(duì)數(shù)′和對(duì)數(shù)″與對(duì)數(shù)頻率的力學(xué)譜，以確定這些模量的頻率相關(guān)性[18]。如圖3-A所示，SS-H在不同的剪切速率下與其產(chǎn)生的剪切應(yīng)力之間呈非線性關(guān)系，這是非牛頓流體相關(guān)的塑性流動(dòng)行為[19]。同時(shí)，SS-H的彈性模量（′）始終大于其黏性模量（″），且隨著頻率的進(jìn)一步增加，′并沒有降低（圖3-B），表明振動(dòng)沒有扭曲凝膠分子的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。以上結(jié)果表明，本研究制備的SS-H具有可涂抹性，并且對(duì)外力具有一定的抗性和穩(wěn)定性，在用藥部位涂抹后可對(duì)抗機(jī)體活動(dòng)產(chǎn)生的機(jī)械力保持穩(wěn)定[20]，是流變學(xué)性質(zhì)良好的皮膚外用制劑。

圖3 流變學(xué)特性曲線

2.4.2 平衡含水率（EWC）的測(cè)量 將SS-H完全凍干，準(zhǔn)確稱量質(zhì)量記為1。將干凝膠劑浸入過量的蒸餾水中直到水凝膠達(dá)到吸水平衡。將其以2500 G的轉(zhuǎn)速離心2 min，去除表面多余水分后準(zhǔn)確稱量質(zhì)量記為2。SS-H的EWC計(jì)算如下。

EWC＝(2－1)/1

完全膨脹的SS-H的EWC值約為629.03%，這說明單位質(zhì)量的SS-H可以吸收自身質(zhì)量約6倍的水，具有很強(qiáng)的親水性。與酊劑相比，該凝膠劑可對(duì)病灶施加潮濕環(huán)境[21]，增強(qiáng)藥物的皮膚滲透性。

2.4.3 透氧性 將凝膠劑溶于乙醇并涂在圓柱體上，干燥后用薄膜覆蓋，并測(cè)量其長度和直徑。然后在101 kPa的大氣壓力下，將圓柱體插入空氣性能測(cè)量裝置。通過記錄皂膜達(dá)到一定高度的時(shí)間來推斷透氧率。測(cè)得的透氧率為（4.01±1.80）×10?5mL/(s?kPa)，這可能部分歸因于較高的EWC值。因其所引起的皮膚水化作用會(huì)促進(jìn)皮膚對(duì)氧的吸收[22]，保證凝膠劑涂抹后的皮膚組織有充足的氧氣供應(yīng)，促進(jìn)組織修復(fù)并降低凝膠劑對(duì)皮膚的刺激性。

2.4.4 體外生物降解試驗(yàn) 膠原在皮膚中含量豐富，而膠原酶由于其分解膠原的功能，有著維持皮膚生理功能以及傷口修復(fù)的作用[23]，因此，在研究凝膠外用制劑的降解中，膠原酶可作為一種模擬體表環(huán)境的生物酶。本研究選用膠原酶條件來模擬體表環(huán)境，并主要研究了水凝膠在該環(huán)境下的降解行為。在含有膠原蛋白酶的PBS中，在37 ℃下孵育若干質(zhì)量相同的凍干水凝膠（1）。在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)，取回水凝膠用去除表面多余的液體，再進(jìn)行凍干。將凍干水凝膠的質(zhì)量記錄為2。降解率的計(jì)算方法如下。

降解率＝(1－2)/2

如圖4所示，在該條件下SS-H在4 h降解約60%，隨后降解速度趨于平穩(wěn)。并在隨后的20 h中保持幾乎相同的質(zhì)量，最終質(zhì)量分?jǐn)?shù)為42.76%，表現(xiàn)出良好的生物降解性，可用于藥物釋放和透皮給藥。

圖4 體外生物降解曲線

2.4.5 體外釋放研究 取4 g SS-H、10 mL SS-T和1 mL粗提物分別放入透析膜中（截留相對(duì)分子質(zhì)量3500）并從兩端綁好，再放入由30 mL生理鹽水組成的試管里，在37 ℃下以100 r/min的速率搖動(dòng)。每隔一段時(shí)間，收集1 mL釋放介質(zhì)，并補(bǔ)充新鮮生理鹽水。測(cè)定釋放藥物的質(zhì)量濃度[24]。如圖5測(cè)定親水性藥物HYA與疏水性藥物樟腦、薄荷醇和冰片的體外釋放。這些曲線表明，水凝膠與傳統(tǒng)酊劑相比，凝膠劑中HYA的最高釋放率提高了約18%，最終釋放率提高了20%，總體趨勢(shì)均顯著提高（圖5-A），表明SS-H對(duì)促進(jìn)HYA的釋放有一定的作用，更重要的是，說明水凝膠可避免該成分分解。而粗提物中幾乎檢測(cè)不到HYA的釋放。對(duì)于其它脂溶性成分，3種制劑的釋放效率沒有顯著差異（圖5-B～D）。各藥物成分在前8 h內(nèi)釋放達(dá)到峰值，而后逐漸減小。

2.4.6 體外皮膚滲透研究 從SD大鼠背部切除皮膚置于供給和接收池之間，角質(zhì)層朝供給池。將麝香舒活靈凝膠劑、酊劑和粗提取物沉積在皮膚表面，接收池中注入20 mL正常生理鹽水，在32.5 ℃恒溫水浴中保持不斷攪拌。在不同的時(shí)間間隔收集1 mL等份接收液并補(bǔ)充等體積，測(cè)定取樣液中的藥物濃度[25]。如圖6所示，SS-H中HYA在72 h內(nèi)經(jīng)皮累積滲透率比SS-T提高了40%，這可歸因于SS-H的皮膚水化能力。與釋放試驗(yàn)結(jié)果類似，粗提物中幾乎檢測(cè)不到HYA的經(jīng)皮滲透。相比之下，對(duì)于樟腦、薄荷醇和冰片等脂溶性成分，SS-H、SS-T和粗提取物沒有顯著差異。水凝膠被證明是一個(gè)能夠兼具保證脂溶性成分透皮不受影響的同時(shí)，顯著加強(qiáng)水溶性成分的經(jīng)皮轉(zhuǎn)運(yùn)，超越了SS-T顯示出相當(dāng)高的皮膚滲透能力。

圖5 體外藥物釋放曲線

2.4.7 生物相容性評(píng)價(jià) 以HSF細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞為研究對(duì)象，以5×104/mL的密度接種到96孔板中，在加入SS-H、SS-T和粗提物之前，在37 ℃、5% CO2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜，再培養(yǎng)24 h后，進(jìn)行MTT檢測(cè)[26]。從表5可以看出，與粗提物活性相比，用SS-H處理的細(xì)胞活力最強(qiáng)，與細(xì)胞的生物相容性最高，且對(duì)HSF的生長表現(xiàn)出劑量依賴的促進(jìn)作用，在高濃度下對(duì)HaCaT的生長同樣表現(xiàn)出促增殖作用。而SS-T和粗提物對(duì)2種皮膚細(xì)胞的增殖均有一定的抑制作用。該結(jié)果進(jìn)一步證明SS-H的生物相容性優(yōu)于SS-T和粗提物。

圖6 皮膚滲透釋放曲線

表5 各組HSF和HaCaT存活率

與粗提物同劑量組比較：**＜0.01

**< 0.01the same dose group of crude extract

3 討論

以麝香舒活靈為代表的眾多藥用植物提取物中藥配方具有多種醫(yī)療作用，但傳統(tǒng)的劑型如膜劑、酊劑等存在制劑應(yīng)用不方便、藥物透皮效率低、制劑中所含的乙醇等有機(jī)溶劑對(duì)皮膚的刺激性等明顯的不足。因此，本研究設(shè)計(jì)采用水凝膠攜載麝香舒活靈提取物來改良SS-T。所制備的SS-H具有良好的涂抹性和穩(wěn)定性，對(duì)皮膚具有良好的透氧性、保濕性，能夠保證局部給藥的微環(huán)境中充足的氧氣供應(yīng)與水分截留，從而減少酊劑等傳統(tǒng)中藥外用制劑在使用過程中導(dǎo)致的脫水以及乙醇等有機(jī)溶劑濃度過高而引起的皮膚刺激性，從而大大改善對(duì)各種局部病變組織的生物相容性。

在愈合傷口邊緣表皮會(huì)主動(dòng)合成膠原酶并與真皮作用[27]，即水凝膠作用的皮膚環(huán)境中生物酶會(huì)以膠原蛋白酶為主，故選用膠原蛋白酶條件來模擬皮膚環(huán)境，確定SS-H在生理?xiàng)l件下有良好的生物降解性，能自發(fā)降解以控制藥物釋放和實(shí)現(xiàn)多樣化的醫(yī)療應(yīng)用。而改良凝膠劑在保證脂溶性（疏水性）藥物的體外釋放和皮膚滲透效率不受顯著影響的同時(shí)，還能有效促進(jìn)中藥復(fù)方中水溶性成分的經(jīng)皮轉(zhuǎn)運(yùn)，增強(qiáng)局部遞送效果，是一種有效傳統(tǒng)中藥創(chuàng)新策略。在本研究中，針對(duì)舒活靈酊劑的多類型活性成分和多重治療功能，對(duì)舒活靈酊劑在劑型上進(jìn)行的水凝膠制劑的創(chuàng)新性改良策略，為促進(jìn)中藥復(fù)方中不同理化特性的活性成分的共同遞送提供了劑型改良的可靠方案，對(duì)基于多組分、多靶點(diǎn)的中藥復(fù)方更好地發(fā)揮治療作用提供了科學(xué)經(jīng)驗(yàn)，為促進(jìn)中藥傳承創(chuàng)新提供了新的發(fā)展思路。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Preparation andevaluation of Shexiang Shuhuoling Hydrogel

PENG Li-hua1, 2, YUAN Tie-jun1, GAO Jin3, LI Dong4, 5, SHI Mu-yang1, SHANG Qiang4, 5

1. College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China 2. State Key Laboratory of Quality Research in Chinese Medicine, Macau University of Science and Technology, Macau 999078, China 3. Guangdong Engineering Research Center for Aerosol Inhalation Preparation, Zhuhai 528447, China 4. Livzon Pharmaceutical Group Inc., Zhuhai 519090, China 5. Engineering Research Center for Anti-Viral Traditional Chinese Medicine of Sichuan Province, Chengdu 611930, China

To Solve the problems of irritation of original Shexiang Shuhuoling Tincture (SS-T) and poor delivery of hydrophilic active ingredients by improving its formulation based on hydrogels.The optimum preparation conditions of hydrogels were selected by single factor experiment, and the rheological properties, equilibrium water content and oxygen permeability of hydrogels were investigated.biodegradation was investigated in a simulated body surface environment with collagenase, andrelease, skin permeability and biocompatibility of the gel were compared with crude extracts and original tinctures.The optimal prescription of Shexiang Shuohuoling Hydrogel (麝香舒活靈水凝膠劑, SS-H) was 2% carbomer, 5% glycerol, 1.6% triethanolamine, and no penetration enhancer was required. SS-H had considerable smear ability and physical strength, and also showed certain moisture retention, oxygen permeability, and good degradation performance. While therelease and skin permeability of lipophilic drugs were not significantly affected, the cumulative release and skin permeability of hydrophilic drug hydroxysafflor yellow A in SS-H were increased by 20% and 40% compared with those in SHL-T, respectively. In addition, SS-H increased the viability of skin cells by 20%—60% compared with crude extract, showing good biocompatibility, while SS-T had no obvious promoting effect on cell viability.The improvement of the gel preparation of SS-T is an effective formulation improvement strategy. The prepared SS-H has good physical and chemical properties, which can alleviate the irritation of the original tincture to human body and enhance the local delivery effect of hydrophilic active ingredients. This study provides a new formulation improvement strategy for optimizing the traditional topical preparation based on traditional Chinese medicine compound.

Shexiang Shuhuoling; tincture; hydrogel; topical preparation; drug delivery; percutaneous absorption

R283.6

A

0253 - 2670(2023)01 - 0092 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.01.012

2022-06-22

科技部重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2022YFC3501904）；科技部重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2021YFC1712805）；浙江省基礎(chǔ)公益計(jì)劃項(xiàng)目（LGF22H280001）；中央本級(jí)項(xiàng)目名貴中藥資源可持續(xù)利用能力建設(shè)（2060302）；中國澳門特別行政區(qū)澳門科技發(fā)展基金

彭麗華，女，副教授，從事經(jīng)皮與外用制劑、生物大分子與天然藥物遞釋技術(shù)研究。Tel/Fax: (0571)88981231 E-mail: lhpeng@zju.edu.cn

通信作者：尚 強(qiáng)，男，高級(jí)工程師，從事中藥新產(chǎn)品的研究與開發(fā)。Tel/Fax: (028)83871721 E-mail: sq8032004@sina.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]