徐 鋒

(湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，湖北 恩施 445000)

原發(fā)性免疫性血小板減少癥(primary immune thrombocytopenia，ITP)又稱原發(fā)性血小板減少性紫癜，是一種免疫性綜合病征[1-2]。ITP是由于機(jī)體免疫失調(diào)耐受，產(chǎn)生的抗血小板自身抗體與血小板表面特異性抗原結(jié)合，導(dǎo)致血小板在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)過度破壞引起血小板減少，是臨床最為常見的出血性疾病[3]。皮膚黏模出血、月經(jīng)過多、內(nèi)臟出血甚至顱內(nèi)出血是ITP患者的主要臨床表現(xiàn)。臨床上部分ITP患者病情反復(fù)，遷延難愈，病因機(jī)制尚不明確，給患者帶來巨大痛苦。為減少ITP的發(fā)病率，對(duì)ITP患者及時(shí)采取有效治療措施，因此ITP的早期篩查至關(guān)重要。β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2M)作為一類小相對(duì)分子質(zhì)量的蛋白，在腎小球被自由濾過后，在近曲小管處完全被重吸收。而近年來研究表明，在大量惡性血液系統(tǒng)疾病中β2M水平顯著增高[4]。CD62P是血小板活化依賴性顆粒表面膜蛋白，臨床把CD62P作為反應(yīng)血小板活化的“金標(biāo)準(zhǔn)”，用于血小板活化的檢測(cè)[5]。CD63是血小板溶酶體膜蛋白成分，能介導(dǎo)血小板內(nèi)皮細(xì)胞相互作用，可對(duì)血小板是否形成進(jìn)行反應(yīng)，臨床主要通過檢測(cè)其變化預(yù)測(cè)疾病的發(fā)展[6]。本研究旨在探討β2M、CD62P、CD63表達(dá)水平對(duì)ITP的臨床診斷價(jià)值，以期為臨床上ITP的發(fā)生提供有效參考。

1 資 料 與 方 法

1.1一般資料 選取2019年5月—2021年7月于我院接受治療的45例ITP患者作為ITP組，同期選取40例中重度貧血患者作為貧血癥組、40例健康體檢者作為對(duì)照組?；颊呋€資料見表1。

本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，所有患者及其家屬均知情并簽署知情同意書。

表1 基線資料Table 1 Baseline data

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《成人原發(fā)免疫性血小板減少癥診斷與治療中國(guó)專家共識(shí)(2016年版)》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；所有患者均有完整的臨床檔案資料；標(biāo)本采集時(shí)血小板低于30×109/L；沒有進(jìn)行ITP特異性治療或其他疾病的治療。

排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有糖尿病、高血壓、消化道潰瘍、妊娠、動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖癥、結(jié)核等急、慢性感染性疾病者；伴有自身免疫性疾病者；肝、腎、肺等重要臟器功能不全者；伴有紅斑狼瘡等結(jié)締組織疾病者。

1.2生化指標(biāo)檢測(cè)方法 于清晨采集三組空腹靜脈血5 mL，以2 000 r/min離心半徑15 cm離心處理5 min，取上血清，以比例為1∶10的乙二胺四乙酸二鉀抗凝管抗凝，-8 ℃環(huán)境保存待檢。

1.2.1血小板參數(shù)檢測(cè) 取2 mL血液加入惰性促凝劑后，應(yīng)用山東博宇醫(yī)療器械有限公司提供的BK-280型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。按儀器標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行測(cè)定，處理樣本、取樣、稀釋、檢測(cè)及結(jié)果打印均自動(dòng)完成。

1.2.2β2M、CD62P、CD63檢測(cè) 將采集到的血液在以3 000 r/min離心5 min，取上血清待檢。采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)血清β2M、CD62P、CD63水平。ELISA試劑盒由江西艾博因生物科技有限公司提供；ELISA試劑盒由上海繼和生物科技有限公司提供。

1.2.3臨床資料收集 收集所用研究對(duì)象一般資料[男性、女性、比例、年齡、體重指數(shù)(body mass indax，BMI)]、生命體征[體溫、呼吸、呼吸、心率、PLT、MPV、PCT、PDW]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。應(yīng)用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用levene法進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，三組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)，組間采用單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Logestic回歸分析確定ITP的影響因素。采用GraphPad Prism 7做ROC曲線，分析血小板相關(guān)參數(shù)表達(dá)對(duì)ITP患者的診斷價(jià)值。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1三組β2M、CD62P、CD63表達(dá)水平比較 對(duì)照組、貧血癥組、ITP組β2M、CD62P、CD63表達(dá)水平依次升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 三組β2M、CD62P、CD63表達(dá)水平比較Table 2 Comparison of expression levels of β2M, CD62P and CD63 in three groups

2.2發(fā)生ITP的影響因素分析 以貧血患者是否發(fā)生原發(fā)性免疫性血小板減少癥為因變量(否=0，是=1)，β2M(<216.52 mg/L=0，≥216.52 mg/L=1)、CD62P(<12.54%=0，≥12.54%=1)、CD63(<13.55%=0，≥13.55%=1)為自變量，建立Logistic回歸模型，并對(duì)年齡、性別等混雜因素影響進(jìn)行校正，最終β2M、CD62P、CD63表達(dá)升高是原發(fā)性免疫性血小板減少癥的影響因素，見表3。

表3 發(fā)生ITP的影響因素分析Table 3 Analysis of influencing factors of ITP

2.3ROC曲線分析β2M、CD62P、CD63表達(dá)水平對(duì)ITP的診斷價(jià)值 ROC曲線分析顯示，與β2M、CD62P、CD63單項(xiàng)診斷相比，聯(lián)合診斷對(duì)ITP診斷價(jià)值較高(P<0.05)，見表4、圖1。

表4 ROC曲線分析β2M、CD62P、CD63表達(dá)水平對(duì)ITP的診斷價(jià)值Table 4 ROC curve analysis of the diagnostic value of β2M, CD62P and CD63 expression levels in ITP

圖1 血清β2M、CD62P、CD63表達(dá)水平對(duì)ITP的診斷價(jià)值

3 討 論

ITP的主要特征是血小板計(jì)數(shù)降低，有較大出血性風(fēng)險(xiǎn)[8]。相關(guān)研究認(rèn)為，細(xì)胞免疫異常、體液免疫都有可能引發(fā)ITP[9]。自身抗體介導(dǎo)的血小板被破壞為ITP發(fā)病相關(guān)機(jī)制，自身抗體存在外周血中廣泛存在，可抑制血小板的產(chǎn)生，使血小板的生成減少，且自身抗體還可對(duì)血小板分泌顆粒進(jìn)行調(diào)節(jié)，導(dǎo)致ITP的生成。本研究通過探究β2M、CD62P、CD63表達(dá)水平對(duì)ITP的臨床診斷價(jià)值，以期為ITP患者的臨床治療提供有效依據(jù)。

β2M是一種相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量為11 800，存在于除紅細(xì)胞和胎盤滋養(yǎng)層以外的所有有核細(xì)胞，尤其在淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞中比較豐富，在其免疫應(yīng)答中起重要作用[10]。由于人體組織抗原的分解，以及代謝作用，β2M分離后，在細(xì)胞外液以游離的方式存在[11]。血清中的β2M能夠從腎小球毛細(xì)血管壁自由濾過,近端腎小球會(huì)對(duì)大部分β2M吸收并分解[12]。有相關(guān)研究表明，在惡性血液系統(tǒng)疾病中β2M表達(dá)水平顯著增高[13]。本研究結(jié)果顯示，ITP組患者β2M表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組、貧血癥組，說明β2M表達(dá)水平可以作為ITP早期篩查的重要指標(biāo)，原因可能機(jī)體內(nèi)免疫活性細(xì)胞的分泌增加可導(dǎo)致有核細(xì)胞的破壞，使細(xì)胞表面β2M釋放，導(dǎo)致患者血清內(nèi)β2M表達(dá)升高。

血小板活化后其質(zhì)膜糖蛋白較靜止期發(fā)生顯著變化，其中有標(biāo)志性的是黏附因子家族中的可溶性選擇素CD62P[14]。血小板在內(nèi)皮細(xì)胞上的黏附、滾動(dòng)主要是由CD62P介導(dǎo)，并可作用于血小板及單核細(xì)胞間[15]。CD62P在靜止期血小板上不表達(dá)或少量表達(dá)，當(dāng)血小板活化后，α顆粒膜蛋白迅速與血小板膜蛋白融合，使CD62P持久表達(dá)在活化的血小板膜表面，且CD62P只在活化的血小板表面表達(dá)，不被血漿蛋白所掩蓋，且不隨時(shí)間的推移而在活化血小板表面消失[16-17]。CD63是溶酶體顆粒糖蛋白，屬于黏附分子選擇素家族成員，主要位于靜止的血小板致密顆粒和溶酶體腔內(nèi)[18]。相關(guān)研究證實(shí)，只有在血小板活化時(shí)溶酶體膜溶解，CD63與血小板漿膜融合后才表達(dá)于血小板膜上[19-20]。但CD63需要很強(qiáng)的刺激劑的誘導(dǎo)才能緩慢地與血小板質(zhì)膜融合，從而釋放內(nèi)容物，使血小板表面表達(dá)溶酶體顆粒膜糖蛋白，因此，血小板質(zhì)膜上檢測(cè)溶酶體顆粒膜糖蛋白被認(rèn)為是血小板已被活化到較高程度[21-22]。本研究結(jié)果顯示，ITP組患者CD62P、CD63水平顯著高于對(duì)照組、貧血癥組，表明CD62P在ITP患者體內(nèi)存在一定活化程度，其原因可能為血小板受到炎性因子、化學(xué)物質(zhì)及血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變等刺激時(shí)，就會(huì)發(fā)生黏附、聚集、釋放等一系列變化，導(dǎo)致該病的發(fā)生[23]。說明CD63參與內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的黏附，在細(xì)胞黏附中起活化細(xì)胞傳遞作用。因此，可根據(jù)血小板膜糖蛋白CD62P、CD63表達(dá)水平的高低來判斷血小板的活化程度。

綜上所述，β2M、CD62P、CD63參與ITP的發(fā)生與發(fā)展，在ITP的早期診斷中，三項(xiàng)聯(lián)合診斷特異度和敏感度較高，對(duì)ITP的早期篩查有重要作用。但因納入樣本量較少，具有一定的局限性，因此后續(xù)研究還需進(jìn)一步的對(duì)β2M、CD62P、CD63進(jìn)行分析，以期望造福于更多的患者。