李革 余怡如 陳放

作為兒科常見疾病,上呼吸道感染發(fā)病率高且病情易反復(fù),多發(fā)于兒童群體,發(fā)病時(shí)不及時(shí)若治療不但會(huì)引發(fā)小兒哮喘,還會(huì)嚴(yán)重影響患兒的成長發(fā)育［1］。有研究顯示,小兒上呼吸道感染的發(fā)生與病毒感染密切相關(guān),病毒感染所致的小兒上呼吸道感染占80%以上,感染病毒類型較多,除了常見流感病毒和腺病毒之外,還包括副流感病毒等。傳統(tǒng)病毒分離法雖然可以對(duì)感染病毒進(jìn)行檢測和鑒定,但其操作相對(duì)復(fù)雜,增加了臨床應(yīng)用難度［2,3］。免疫熒光技術(shù)通過結(jié)合免疫學(xué)方法與熒光標(biāo)記技術(shù),不但檢測效率高,而且敏感性和特異性均較強(qiáng),因此在臨床診斷中被廣泛應(yīng)用。為了探討在小兒上呼吸道感染微生物快速檢驗(yàn)中免疫熒光法的應(yīng)用效果,本研究選取本院2021 年1～12 月收治的400 例上呼吸道感染患兒作為研究對(duì)象,具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2021 年1～12 月收治的 400 例上呼吸道感染患兒作為研究對(duì)象,其中男210 例,女190 例；年齡2 個(gè)月～10 歲,平均年齡(4.53±0.34)歲；體重6～41 kg,平均體重(15.75±2.56)kg；病程3～72 h,平均病程(18.66±3.23)h；感染部位：咽部感染237 例,鼻部感染163 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)相關(guān)檢查和臨床診斷確診,符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在凝血功能異常和患有血液系統(tǒng)疾病及其他慢性病患兒；②存在意識(shí)和認(rèn)知障礙患兒；③已接受激素或抗病毒治療患兒；④臨床資料有缺損患兒。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 熒光顯微鏡,旋渦振蕩器,離心機(jī)、由優(yōu)寧維提供的單克隆熒光標(biāo)記抗體和呼吸道病毒抗原檢測試劑盒,試劑盒包括腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒A 型和B 型、副流感病毒2 型和3 型、肺炎支原體等。

1.2.2 標(biāo)本采集和制片 標(biāo)本采集使用小兒微細(xì)型鼻咽植絨拭子深入患兒鼻腔6～8 cm 旋轉(zhuǎn)2 圈完成采集,將標(biāo)本保存于生理鹽水塑料試管中。使用旋渦振蕩器對(duì)標(biāo)本中的細(xì)胞進(jìn)行振蕩將植絨拭子上的細(xì)胞振落。將植絨拭子取出后,對(duì)標(biāo)本以2000 r/min 轉(zhuǎn)速離心 10 min,將上清液取出后,觀察是否有較多剩余沉淀,較多則再次進(jìn)行離心處理,合格后將黏液去除并搖勻。在板孔中滴入細(xì)胞懸液,之后將25 μl 細(xì)胞懸濁液加入,在溫度為35℃干燥箱中干燥處理10 min 后使用冷丙酮固定。

1.2.3 檢測方法 在樣孔細(xì)胞中滴入熒光抗體20 μl,置于保濕箱中進(jìn)行孵育0.5 h,分別使用洗滌液和蒸餾水進(jìn)行反復(fù)洗滌3 次后,進(jìn)行干燥處理。在玻璃樣孔中滴入1 滴細(xì)胞液,置于熒光顯微鏡小進(jìn)行觀察。熒光標(biāo)記的病毒克隆抗體結(jié)合抗原后,形成免疫熒光抗原抗體復(fù)合物。有綠色熒光的為陽性感染細(xì)胞,無熒光的為陰性未感染細(xì)胞。調(diào)整顯微鏡倍數(shù),為400 倍,熒光細(xì)胞2 個(gè)以上為陽性。陽性對(duì)照孔內(nèi)細(xì)胞感染病毒類型不同。

1.3 觀察指標(biāo) 分析病毒抗原陽性檢出情況、病毒類型和年齡、季節(jié)分布特點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1 病毒抗原陽性檢出情況 400 例患兒中345 例檢出病毒抗原陽性,陽性檢出率為86.25%(345/400)。

2.2 病毒類型 345 例病毒抗原檢出陽性患兒中,195 例為流感病毒,占比56.52%；65 例為腺病毒,占比18.84%；34 例為呼吸道合胞病毒,占比9.86%；25 例為副流感病毒,占比7.25%；12 例為腸道病毒,占比3.48%；間質(zhì)肺病毒和其他各7 例,占比2.03%。其中占比最高的為流感病毒,明顯高于其他類型病毒。見表1。

表1 345 例病毒抗原檢出陽性患兒的病毒類型(n,%)

2.3 年齡分布情況 345例病毒抗原檢出陽性患兒中,1～6 個(gè)月、7～12 個(gè)月、13～24 個(gè)月和＞24 個(gè)月患兒占比分別為46.38%、27.54%、14.49%和11.59%,其中1～6 個(gè)月患兒占比明顯高于其他年齡段。見表2。

表2 345 例病毒抗原檢出陽性患兒的年齡分布情況(n,%)

2.4 季節(jié)分布情況 小兒上呼吸道病毒感染呈現(xiàn)出季節(jié)性特點(diǎn),病毒感染主要集中于春冬季,夏秋季少發(fā),其中流感病毒主要集中在冬季,副流感病毒集中在春季。見表3。

表3 345 例小兒上呼吸道病毒感染的季節(jié)分布情況(n)

3 討論

作為兒童感染性疾病中的常見疾病,發(fā)病率較高,在發(fā)生上呼吸道感染時(shí),患兒會(huì)出現(xiàn)咽喉疼痛、干癢、充血等癥狀,對(duì)患兒食欲造成嚴(yán)重影響。除此之外,上呼吸道感染還會(huì)繼發(fā)鼻塞、打噴嚏、流鼻涕等癥狀,同時(shí)患兒還會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、頭疼等,病情發(fā)展嚴(yán)重甚至還會(huì)導(dǎo)致肺炎發(fā)生,在對(duì)患兒健康造成影響的同時(shí)也對(duì)其正常發(fā)育造成影響［5］。患兒因?yàn)槟挲g較小,對(duì)于自身病情、病因等無法準(zhǔn)確描述,因此也增加了臨床診斷難度。超過80%的兒童呼吸道感染疾病由病毒感所致,通過進(jìn)行免疫熒光法檢測不但可以對(duì)患兒疾病進(jìn)行有效診斷,而且可以對(duì)患兒病情嚴(yán)重程度進(jìn)行判斷［6］。

上呼吸道感染的發(fā)生與多種病毒有關(guān),包括腺病毒、流感病毒和副流感病毒等。近幾年來,細(xì)菌性呼吸道感染發(fā)生率因抗生素在臨床的廣泛使用逐漸降低,而病毒性呼吸道感染發(fā)生率逐漸上升［7］。在本次研究中,345 例檢出陽性患兒中病毒類型包括流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腸道病毒、間質(zhì)肺病毒等。在康月茜等［8］的研究中,使用直接免疫熒光法對(duì)2881 例患兒進(jìn)行呼吸道病毒抗原檢測,結(jié)果顯示陽性患兒有813 例,病毒類型包括流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等,與本次研究結(jié)果相似。

尋找一種可以對(duì)上呼吸道感染早期快速準(zhǔn)確診斷的方法不但可以對(duì)疾病進(jìn)行有效診斷,而且可以為臨床治療方案的制定提供指導(dǎo),有利于臨床選擇針對(duì)性抗病毒治療藥物,對(duì)于減少臨床抗生素濫用情況具有重要意義。目前上呼吸道病毒感染檢測方法較多,包括電鏡檢測病毒顆粒、病毒培養(yǎng)、病毒核酸檢測、酶聯(lián)免疫法等,但均存在不足。作為傳統(tǒng)檢測方法,電鏡檢測病毒顆粒檢測時(shí)間較長且陽性率低；病毒培養(yǎng)需要花費(fèi)較長時(shí)間,延誤了診斷治療時(shí)間,而且需要較高的培養(yǎng)環(huán)境,培養(yǎng)難度高,容易出現(xiàn)假陰性的情況；病毒核酸檢測有較高的靈敏度,但提取相較復(fù)雜,在檢測過程中容易造成污染,嚴(yán)重影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性,同時(shí)對(duì)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室具有較高要求；酶聯(lián)免疫法檢測病毒抗體檢測結(jié)果的時(shí)效性較差,對(duì)于臨床診斷意義 較?。?,10］。而臨床進(jìn)行特異性免疫球蛋白G(IgG)陽性檢測只能對(duì)患兒既往病毒感染情況進(jìn)行了解,對(duì)于患兒早期感染的判斷和臨床療效的評(píng)估意義并不大,IgM抗體雖然敏感性較強(qiáng),但是對(duì)于免疫反應(yīng)較弱的患兒假陰性發(fā)生率較高［11］。相較于抗體檢測,抗原檢測敏感性更強(qiáng)。免疫熒光技術(shù)如今已經(jīng)在臨床廣泛應(yīng)用,其不但操作簡單和取材方便,對(duì)患兒配合度依賴性不大,而且可以進(jìn)行快速檢驗(yàn),經(jīng)濟(jì)性高,同時(shí)適用于基層衛(wèi)生單位和兒童檢驗(yàn)［12］。345 例檢出病毒抗原陽性,陽性檢出率為86.25%,同時(shí)也有效鑒別了病毒類型,表明在小兒上呼吸道疾病微生物快速檢驗(yàn)中,免疫熒光法陽性檢出率較高,而且可以對(duì)病毒類型進(jìn)行鑒定,有利于臨床對(duì)疾病進(jìn)行診斷,還能為臨床抗病毒治療合理選擇提供科學(xué)和可靠依據(jù)。本次研究中,345 例 病毒抗原檢出陽性患兒中,1～6 個(gè)月、7～12 個(gè)月、13～24 個(gè)月和＞24 個(gè)月患兒占比分別為46.38%、27.54%、14.49%和11.59%,其中1～6 個(gè)月患兒占比明顯高于其他年齡段。該結(jié)果出現(xiàn)的原因可能與低齡患兒母體抗體減少和免疫球蛋白水平低有關(guān)。研究結(jié)果還顯示小兒上呼吸道病毒感染呈現(xiàn)出季節(jié)性特點(diǎn),病毒感染主要集中于春冬季,夏秋季少發(fā),其中流感病毒主要集中在冬季,副流感病毒集中在春季。對(duì)小兒上呼吸道感染季節(jié)性特點(diǎn)進(jìn)行分析有利于臨床對(duì)患兒的發(fā)病特征和疾病類型進(jìn)行診斷。

綜上所述,免疫熒光法操作簡單、經(jīng)濟(jì)性和重復(fù)性高,在小兒上呼吸道疾病微生物快速檢驗(yàn)中應(yīng)用效果確切,可快速準(zhǔn)確檢出感染病毒,對(duì)病毒類型進(jìn)行有效鑒別,有利于臨床對(duì)患兒早期感染進(jìn)行判斷,不但可以指導(dǎo)臨床抗病毒治療的合理選擇,而且對(duì)于治療效果的評(píng)估和減少臨床濫用抗生素現(xiàn)象有積極意義,值得推廣應(yīng)用。由于此次研究時(shí)間緊張、試劑材料等原因,鼻病毒檢測未能納入分析比較,研究存在一定局限,需要在以后的研究中進(jìn)一步探討。