曾文興，萬 穎，敖繼紅

江西省宜春市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西宜春 336000

淋巴瘤原發(fā)于淋巴結(jié)或其他淋巴組織，發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，是嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤[1]。淋巴瘤分為B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)、T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)和霍奇金淋巴瘤(HL)。有研究表明，EB病毒(EBV)的潛伏膜蛋白、核抗原1、編碼的小RNA蛋白被激活時(shí)，與淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)系，并影響淋巴瘤的轉(zhuǎn)歸[2]。隨著研究的深入，近年來發(fā)現(xiàn)越來越多的血清標(biāo)志物與腫瘤發(fā)病密切相關(guān)，而某些靈敏度及特異度較高的血清標(biāo)志物對(duì)臨床診斷、療效及預(yù)后的評(píng)估至關(guān)重要。其中β2微球蛋白(β2-MG)與乳酸脫氫酶(LDH)在淋巴瘤診斷中的意義越來越受到重視[3]；而國(guó)外研究表明，細(xì)胞因子具有細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、促炎癥和免疫調(diào)節(jié)功能，其中白細(xì)胞介素(IL)-2R表達(dá)異常與淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[4]。因此，淋巴瘤作為人體免疫系統(tǒng)的惡性腫瘤，血清標(biāo)志物L(fēng)DH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平與EBV感染相關(guān)淋巴瘤及其組織免疫學(xué)類型發(fā)生、發(fā)展等的關(guān)系值得研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018-2021年于本院確診的50例淋巴瘤患者作為淋巴瘤組，其中男32例，女18例；年齡23～76歲；HL患者3例作為HL組，B-NHL患者34例作為B-NHL組，T-NHL患者13例作為T-NHL組；臨床分期Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期35例；存在EBV感染者35例作為EBV+組，不存在EBV感染者15例作為EBV-組；有骨髓浸潤(rùn)34例，無骨髓浸潤(rùn)16例。選取同期體檢健康者20例作為對(duì)照組，其中男12例，女8例；年齡32～70歲。淋巴瘤組和對(duì)照組年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。淋巴瘤納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理組織或細(xì)胞學(xué)確診；(2)患者年齡≥18歲。排除其他惡性腫瘤，溶血，心、肝、腎功能嚴(yán)重?fù)p傷，肝硬化，免疫性疾病等。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均知情同意。

1.2儀器與試劑 LDH和β2-MG檢測(cè)試劑購(gòu)自寧波美康生物科技有限公司；IL-2R和IL-10檢測(cè)試劑購(gòu)自青島瑞斯凱爾生物科技有限公司；ADVIA2400全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)自美國(guó)西門子公司；流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD公司。

1.3檢測(cè)方法 采集受試者空腹靜脈血3 mL，室溫靜置20 min，以3 000 r/min離心10 min，分離血清。LDH采用速率法檢測(cè)，β2-MG采用膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法檢測(cè)，IL-2R和IL-10采用免疫熒光法檢測(cè)。

1.4治療方案 NHL患者接受CHOP方案(靜脈推注環(huán)磷酰胺750 mg/m2，第1天；靜脈推注長(zhǎng)春新堿1.4 mg/m2，第1天；靜脈滴注阿霉素50 mg/m2，第1天；口服醋酸潑尼松100 mg/m2，第1～5天，21 d為1個(gè)周期，療程間隔3周)，HL患者接受ABVD方案(靜脈推注阿霉素25 mg/m2，第1及第15天；靜脈推注博萊霉素10 mg/m2、長(zhǎng)春堿6 mg/m2、達(dá)卡巴嗪375 mg/m2，療程間隔2周)，并結(jié)合放療治療；2個(gè)周期后觀察患者血清LDH、β2-MG、IL-2R和IL-10水平變化。

2 結(jié) 果

2.1淋巴瘤組與對(duì)照組血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平比較 與對(duì)照組比較，淋巴瘤組血清中LDH、β2-MG、IL-2R及IL-10水平升高(P<0.05)。見表1 。

表1 淋巴瘤組與對(duì)照組血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平比較

2.2血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平在不同EBV狀態(tài)淋巴瘤患者中的比較 與EBV-組比較，EBV+組血清LDH、IL-2R、β2-MG水平升高(P<0.05)，但I(xiàn)L-10水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平在不同EBV狀態(tài)淋巴瘤患者中的比較

2.3血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平在不同組織免疫學(xué)類型淋巴瘤患者中的比較 與對(duì)照組比較，T-NHL、B-NHL、HL組血清LDH、β2-MG、IL-2R及IL-10水平升高(P<0.05)；但T-NHL、B-NHL、HL組血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平在不同組織免疫學(xué)類型淋巴瘤患者中的比較

2.4血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平在不同臨床分期淋巴瘤患者中的比較 與臨床分期Ⅰ～Ⅱ期患者比較，Ⅲ～Ⅳ期患者血清LDH、β2-MG、IL-2R水平升高(P<0.05)，但I(xiàn)L-10水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表4。

表4 血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平在不同臨床分期淋巴瘤患者中的比較

2.5血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平在不同骨髓浸潤(rùn)情況淋巴瘤患者中的比較 與無骨髓浸潤(rùn)患者比較，有骨髓浸潤(rùn)患者血清LDH、β2-MG、IL-2R水平明顯升高(P<0.05)，但I(xiàn)L-10水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表5。

表5 血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平在不同骨髓浸潤(rùn)情況淋巴瘤患者中的比較

2.6血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平在淋巴瘤患者治療前、后的比較 與治療前比較，治療后血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平降低(P<0.05),見表6。

表6 血清LDH、β2-MG、IL-2R、IL-10水平在淋巴瘤患者治療前、后的變化

組別nIL-2R(U/mL)治療前治療后IL-10(pg/mL)治療前治療后淋巴瘤組503 112.56±1127.09825.5±130.21a77.33±13.0825.37±11.76aEBV+組353 692.92±981.391 677.56±526.36a81.85±14.3934.12±14.56aEBV-組152 068.45±617.11607.25±113.36a74.25±4.7116.75±9.63a

3 討 論

淋巴瘤是嚴(yán)重危害人體健康的惡性腫瘤之一，常以淺表淋巴結(jié)無痛性進(jìn)行性腫大或伴發(fā)熱、消瘦及肝脾腫大為表現(xiàn)。研究發(fā)現(xiàn)EBV基因組的相對(duì)高拷貝性、EBV的持續(xù)潛伏感染等均是致瘤的重要因素，與HL、伯基特淋巴瘤、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤、結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤、外周T細(xì)胞淋巴瘤(非特指型)及血管免疫母T細(xì)胞淋巴瘤等的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[5]。原因[6]：(1)曾經(jīng)患傳染性單核細(xì)胞增多癥的人群HL發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)是健康人群的4倍；(2)EBV包膜抗原抗體效價(jià)上升；(3)淋巴瘤細(xì)胞中證實(shí)存在單克隆性的EBV附加體。(4)大多數(shù)淋巴瘤細(xì)胞中存在克隆游離的EBV。目前淋巴瘤EBV感染患者實(shí)驗(yàn)室檢查僅表現(xiàn)為血清C-反應(yīng)蛋白升高及白細(xì)胞、血小板、血紅蛋白降低等，結(jié)果缺乏特異性[7]。隨著研究的深入，某些靈敏度及特異度較高的指標(biāo)對(duì)疾病的診斷、療效及預(yù)后的評(píng)估至關(guān)重要。

LDH是一種糖酵解酶，在無氧酵解和糖異生中發(fā)揮重要作用。有研究認(rèn)為惡性腫瘤患者LDH水平升高的原因?yàn)槟[瘤細(xì)胞的糖酵解速度高于健康人群，且糖酵解會(huì)導(dǎo)致多種酶活性改變，而作為糖酵解重要酶類的LDH活性也隨之升高，由于惡性腫瘤細(xì)胞的代謝加快及細(xì)胞膜通透性改變等，導(dǎo)致癌組織酶釋放至血液，從而破壞了血液循環(huán)中酶的正常動(dòng)態(tài)平衡，使患者血清LDH水平升高[8]。在本研究中，淋巴瘤組血清LDH水平高于對(duì)照組(P<0.05)，EBV+患者血清LDH水平高于EBV-患者(P<0.05)，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期患者血清LDH水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，有骨髓浸潤(rùn)患者血清LDH水平高于無骨髓浸潤(rùn)患者(P<0.05)，治療后淋巴瘤患者LDH水平較治療前降低(P<0.05)，但在不同組織免疫學(xué)類型淋巴瘤患者中LDH水平無明顯差異(P>0.05)。分析原因可能與淋巴瘤細(xì)胞酵解酶系統(tǒng)活躍有關(guān)，特別是EBV影響酶代謝系統(tǒng)，使LDH酶活性升高，但其具體機(jī)制尚不十分明確；隨著病情進(jìn)展，淋巴瘤細(xì)胞大量增殖浸潤(rùn)，影響其他正常組織的代謝及造成組織細(xì)胞溶解破壞，廣泛病變者LDH水平高于局限病變者，說明病情加重；當(dāng)有效治療后，大量淋巴瘤細(xì)胞被殺傷，酶活性減低，說明病情穩(wěn)定。因此本研究提示淋巴瘤患者血清LDH水平與淋巴瘤負(fù)荷、分期、骨髓浸潤(rùn)及EBV感染有關(guān)，也是判斷療效及預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)，但不能反映淋巴瘤組織免疫學(xué)類型。有研究表明LDH水平提示惡性程度，惡性程度越高，血清LDH水平越高；LDH水平與腫瘤分期有關(guān)，分期越晚，血清LDH水平越高；LDH水平與結(jié)外轉(zhuǎn)移相關(guān)，侵犯肝、脾及骨髓患者血清LDH水平升高；LDH水平與NHL腫瘤負(fù)荷有關(guān)[9]。

β2-MG主要由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，是細(xì)胞膜上完整組織相容性抗原的一部分，能夠透過腎小球?yàn)V過膜，被近曲小管重吸收。近年研究報(bào)道顯示，腫瘤細(xì)胞和淋巴細(xì)胞均可產(chǎn)生大量的β2-MG，且植物血凝素能夠加速這一合成過程[10]。在本研究中，淋巴瘤組血清β2-MG水平高于對(duì)照組(P<0.05)，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期患者血清β2-MG水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，有骨髓浸潤(rùn)患者血清β2-MG水平高于無骨髓浸潤(rùn)患者(P<0.05)，治療后淋巴瘤組β2-MG水平較治療前降低(P<0.05)，EBV+患者β2-MG水平高于EBV-患者(P<0.05)，在不同組織免疫學(xué)類型淋巴瘤患者中β2-MG水平無明顯變化(P>0.05)。分析原因?yàn)棣?-MG是有核細(xì)胞膜可溶性成分，且淋巴瘤細(xì)胞本身可以合成及分泌大量β2-MG，但其具體機(jī)制尚不十分明確，可能與細(xì)胞周轉(zhuǎn)增加有關(guān)；并與EBV感染相關(guān)；隨著病情進(jìn)展，淋巴瘤細(xì)胞大量增殖浸潤(rùn)，造成組織細(xì)胞溶解破壞，廣泛病變者β2-MG水平高于局限病變者，說明病情加重；當(dāng)有效治療后，大量淋巴細(xì)胞被殺傷，β2-MG合成及分泌減少，說明病情穩(wěn)定。因此本研究提示血清β2-MG水平與淋巴瘤負(fù)荷、分期、骨髓浸潤(rùn)及EBV感染有關(guān)，也是判斷療效及預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)，但不能反映淋巴瘤組織免疫學(xué)類型。有研究表明淋巴瘤、淋巴增殖性疾病等的β2-MG水平升高，提示病情惡化，治療后β2-MG水平降低往往提示病情趨向穩(wěn)定，其結(jié)外浸潤(rùn)的傾向更大，提示血清β2-MG水平測(cè)定不僅是惡性腫瘤診斷的重要指標(biāo)之一，其動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)還是療效觀察和判斷預(yù)后的重要指標(biāo)之一[3]。

細(xì)胞因子包括IL、干擾素、腫瘤壞死因子及各種造血相關(guān)細(xì)胞因子，由腫瘤細(xì)胞和周圍的免疫細(xì)胞產(chǎn)生，在調(diào)節(jié)免疫的關(guān)鍵途徑中起重要作用，在多種血液惡性腫瘤包括淋巴瘤中細(xì)胞因子的表達(dá)失調(diào)，并且使機(jī)體處于持續(xù)的炎癥環(huán)境，影響腫瘤和基質(zhì)細(xì)胞的存活和增殖。有研究表明一些細(xì)胞因子水平的升高可作為侵襲性淋巴瘤的標(biāo)志物[11]。

IL-2R是一種免疫抑制物，研究表明與免疫功能紊亂有關(guān)的疾病如惡性腫瘤，IL-2R可在其細(xì)胞中持續(xù)存在或表達(dá)紊亂，可能在惡性腫瘤環(huán)境中扮演重要角色[12]。在本研究中，淋巴瘤組血清IL-2R水平高于對(duì)照組(P<0.05)，EBV+患者血清IL-2R水平高于EBV-患者(P<0.05)，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期患者血清IL-2R水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，有骨髓浸潤(rùn)患者血清IL-2R水平高于無骨髓浸潤(rùn)患者(P<0.05)，治療后淋巴瘤患者IL-2R水平較治療前明顯降低(P<0.05)，在不同組織免疫學(xué)類型淋巴瘤患者中IL-2R水平無明顯變化(P>0.05)。分析原因?yàn)镮L-2R作為膜受體的一部分，在淋巴瘤細(xì)胞中持續(xù)存在或表達(dá)紊亂，特別是EBV感染的淋巴瘤細(xì)胞可使IL-2R水平升高，且延長(zhǎng)IL-2R的半衰期，但其具體機(jī)制尚不十分明確，可能與人類嗜T淋巴細(xì)胞瘤1的PX基因產(chǎn)物相關(guān)；隨著病情進(jìn)展，淋巴瘤細(xì)胞大量增殖浸潤(rùn)，其膜受體IL-2R水平與淋巴瘤細(xì)胞呈正相關(guān)，說明病情惡化；當(dāng)有效治療后，大量淋巴細(xì)胞被殺傷，IL-2R水平降低，說明病情穩(wěn)定。因此本研究提示血清IL-2R水平可以反映淋巴瘤負(fù)荷、分期、骨髓浸潤(rùn)，也是判斷療效及預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

IL-10通過抑制促炎細(xì)胞因子分泌而具有較強(qiáng)的免疫抑制作用，還可通過誘導(dǎo)B細(xì)胞的增殖和分化產(chǎn)生免疫刺激效應(yīng)[13]。本研究表明，淋巴瘤組血清IL-10 水平高于對(duì)照組(P<0.05)，治療后淋巴瘤組IL-10水平較治療前降低(P<0.05)，但在不同組織免疫學(xué)類型、臨床分期、有無骨髓浸潤(rùn)的淋巴瘤患者比較中，血清IL-10水平無明顯差異(P>0.05)。分析原因可能為免疫功能紊亂的淋巴瘤患者，特別是EBV感染免疫功能低下的兒童或老年患者，可能對(duì)淋巴瘤細(xì)胞的免疫性清除功能減弱，腫瘤細(xì)胞使機(jī)體持續(xù)處于炎癥環(huán)境，刺激機(jī)體免疫細(xì)胞分泌IL-10，使IL-10水平升高；當(dāng)有效治療后，大量淋巴瘤細(xì)胞被殺傷，機(jī)體炎癥刺激減輕，免疫細(xì)胞分泌IL-10減少，說明病情穩(wěn)定。因此本研究提示血清IL-10水平可以反映淋巴瘤負(fù)荷，是判斷療效及預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)。有研究表明IL-10水平升高在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，可能是機(jī)體對(duì)腫瘤的一種免疫反應(yīng)，由激活的免疫細(xì)胞產(chǎn)生，并非源于腫瘤細(xì)胞，其確切機(jī)制不明[14]。

一種腫瘤可含多種腫瘤標(biāo)志物，通過選擇特異性腫瘤標(biāo)志物或最佳組合進(jìn)行檢測(cè)有利于惡性腫瘤的早期篩查，病情監(jiān)測(cè)及對(duì)腫瘤治療療效、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的判斷。本研究結(jié)果顯示，在不同組織免疫學(xué)類型的淋巴瘤患者中，血清LDH、β2-MG、IL-2R及IL-10水平無明顯差異，而LDH和β2-MG、IL-2R均反映了腫瘤的負(fù)荷、分期、骨髓浸潤(rùn)、EBV感染程度及療效預(yù)后，IL-2R 及IL-10反映了免疫功能狀況。因此，監(jiān)測(cè)血清LDH、β2-MG、IL-2R水平的變化對(duì)淋巴瘤患者的輔助診斷、臨床分期、療效、預(yù)后及EBV感染評(píng)估具有重要的臨床價(jià)值。