張白杜，李文利，鮑麗娟，顧曉瓊，林 濤，皮 蕾

廣東省廣州市婦女兒童醫(yī)療中心：1.臨床檢驗(yàn)部；2.中心實(shí)驗(yàn)室；3.臨床生物資源庫(kù)，廣東廣州 510000

有研究表明，全球至少有10%的育齡期男性正經(jīng)歷不育癥[1]，不育男性都有不同程度的精液異常，如精子數(shù)量少、精子活力低下和精子功能受損，導(dǎo)致在沒有明確病因的情況下無法使卵母細(xì)胞受精[2]。近十年來，由于污染的空氣、有毒物質(zhì)、肥胖、吸煙、飲酒、手機(jī)電磁波和飲食等潛在因素，人類精液質(zhì)量一直在下降[2]。關(guān)于男性不育癥的研究范圍較廣，近年來，臨床研究者聚焦于維生素D與男性生殖健康的研究范疇。

25-羥維生素D3[25(OH)D3]是一種脂溶性營(yíng)養(yǎng)素，主要依賴于陽(yáng)光照射的過程在皮膚中合成[3]。據(jù)報(bào)道，低水平的25(OH)D3會(huì)增加各種健康問題的風(fēng)險(xiǎn)[3]。研究表明25(OH)D3對(duì)男性生殖功能至關(guān)重要，維生素D受體(VDR)和代謝酶在男性的生殖道和生殖細(xì)胞中表達(dá)[3]。然而，25(OH)D3是否與男性生殖生物學(xué)和生育狀況有關(guān)一直存在爭(zhēng)議。一項(xiàng)系統(tǒng)評(píng)價(jià)和薈萃分析表明，25(OH)D3可能在男性的性健康中發(fā)揮重要作用[4]。然而，25(OH)D3與不育癥的相關(guān)研究主要聚焦于血清25(OH)D3與精液質(zhì)量的關(guān)聯(lián)性，較少有關(guān)于精漿25(OH)D3與精液質(zhì)量的關(guān)聯(lián)性研究，本研究旨在探討血清和精漿25(OH)D3與精液質(zhì)量相關(guān)參數(shù)的關(guān)聯(lián)性，為治療不育癥提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2020年9月于本院生殖醫(yī)學(xué)中心門診就診的行體外受精-胚胎移植助孕的男性122例為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)根據(jù)《男性不育癥中西醫(yī)結(jié)合診療指南(試行版)》[5]，夫妻性生活正常，不采取避孕措施但12個(gè)月內(nèi)未懷孕，且女方的診治記錄表明無不孕相關(guān)因素；(2)年齡在18～50歲；(3)禁欲2～7 d后，能同時(shí)提供血液和精液標(biāo)本；(4)知情同意本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有心腦血管疾病、糖尿病、肺結(jié)核等慢性疾病史者；(2)取樣前3個(gè)月有性傳播疾病史、生殖系統(tǒng)炎癥、精索靜脈曲張等影響精液質(zhì)量的患者；(3)所從事的職業(yè)存在接觸射線、有機(jī)農(nóng)藥、有機(jī)化合物、高溫作業(yè)等影響精液質(zhì)量的因素者；(4)近3個(gè)月使用維生素D等藥物，影響25(OH)D3檢測(cè)質(zhì)量者。

1.2方法 患者禁欲3～7 d后，在取精當(dāng)日留取清晨空腹靜脈血5 mL，離心后使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)上機(jī)檢測(cè)血清25(OH)D3(天津市蘭標(biāo)電子科技發(fā)展有限公司的維生素檢測(cè)儀及其配套試劑，儀器型號(hào)LK3000V，試劑批號(hào)2112B11)。取精做完精液常規(guī)檢測(cè)后，再使用與血液標(biāo)本檢測(cè)同樣的方法檢測(cè)精漿25(OH)D3。根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[6]對(duì)精液質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)(SCA全自動(dòng)精液質(zhì)量分析系統(tǒng)購(gòu)自西安百德儀器設(shè)備有限公司，型號(hào)SCA-R-2005)。

1.3分組 根據(jù)精液質(zhì)量評(píng)估參數(shù)[6]，將所有研究對(duì)象分為兩組，少弱精子組(68例，精子密度每毫升<15×106個(gè)，前向運(yùn)動(dòng)精子百分比<32%)和正常精子組(54例，精子密度每毫升≥15×106個(gè)，前向運(yùn)動(dòng)精子百分比≥32%)。同時(shí)按照文獻(xiàn)[7]相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合血清25(OH)D3檢測(cè)值，以血清25(OH)D3<25 mmol/L作為25(OH)D3缺乏(48例)，血清25(OH)D3水平在25～<50 mmol/L作為25(OH)D3不足(59例)，血清25(OH)D3≥50 mmol/L作為25(OH)D3充足(15例)。

2 結(jié) 果

2.1正常精子組和少弱精子組相關(guān)指標(biāo)比較 與正常精子組比較，少弱精子癥組的精子密度、精子活力、精子正常形態(tài)率和前向運(yùn)動(dòng)精子百分比、精漿25(OH)D3水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 正常精子組和少弱精子組相關(guān)指標(biāo)比較

2.2不同血清25(OH)D3水平患者精液質(zhì)量和精漿25(OH)D3水平比較 不同血清25(OH)D3水平患者精液質(zhì)量和精漿25(OH)D3水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。將不同25(OH)D3水平患者進(jìn)一步分成少弱精子組和正常精子組，結(jié)果表明少弱精子癥組的精子密度、精子活力、精子正常形態(tài)率、前向運(yùn)動(dòng)精子百分比和精漿25(OH)D3水平均低于正常精子組(P<0.05)，見表3。

表2 不同血清25(OH)D3水平患者精液質(zhì)量和精漿25(OH)D3水平比較

表3 不同血清25(OH)D3水平患者精液質(zhì)量和精漿25(OH)D3水平比較

指標(biāo)25(OH)D3充足正常精子組(n=10)少弱精子組(n=5)tP精子密度(×106/mL)36.78±10.5611.14±3.2439.656<0.001精子活力(%)59.39±11.2726.64±8.3824.567<0.001精子正常形態(tài)率(%)52.37±3.3525.83±7.3823.102<0.001前向運(yùn)動(dòng)精子百分比(%)51.14±10.3518.81±6.6225.183<0.001精漿25(OH)D3(mmol/L)16.53±1.5314.47±1.423.2170.007

2.3血清、精漿25(OH)D3水平與精液質(zhì)量的相關(guān)性分析 血清25(OH)D3水平與精液質(zhì)量不相關(guān)，而精漿25(OH)D3水平與精子密度、精子活力及前向運(yùn)動(dòng)精子百分比呈正相關(guān)(P<0.05)，見表4。

表4 血清、精漿25(OH)D3水平與精液質(zhì)量的相關(guān)性分析

3 討 論

不孕不育夫婦中，男性因素約占50%[1]，精液參數(shù)異常是導(dǎo)致男性不育的主要因素，但仍有30%～40%的不育夫婦檢查不出相關(guān)病因。研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激、內(nèi)分泌因素、遺傳異常和免疫相關(guān)因素等可能是導(dǎo)致不育的主要原因[8]。

25(OH)D3的主要功能是通過調(diào)節(jié)鈣和磷的穩(wěn)態(tài)來促進(jìn)骨礦化。研究表明，25(OH)D3還參與到多器官和系統(tǒng)的生理功能調(diào)節(jié)中，如脂肪組織、甲狀腺、免疫系統(tǒng)、胰腺、心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)等[9]。存在于靶器官和組織上的VDR可促進(jìn)維生素D的結(jié)合并執(zhí)行其生物活性。VDR在男性生殖系統(tǒng)的各個(gè)組成部分(如前列腺、睪丸、射精和支持細(xì)胞)中均有表達(dá)，表明了維生素D及其受體在男性生育和生殖中起著重要的作用。然而許多關(guān)于維生素D總體水平與精液質(zhì)量之間關(guān)系的研究結(jié)果不一致[6-7]。如魏明明等[7]的研究表明男性不育患者血清25(OH)D3水平低于健康男性，但血清25(OH)D3水平與精液質(zhì)量的各個(gè)指標(biāo)之間無明顯相關(guān)性。?？″|等[6]的研究發(fā)現(xiàn)，血清25(OH)D3水平在少精子組、弱精子組、少弱精子組與正常精子組間無明顯差異，而少精子組和少弱精子組的精漿25(OH)D3水平低于弱精子組，男性不育患者的精漿25(OH)D3水平低于健康男性，此結(jié)果與本研究結(jié)果一致。本研究并未發(fā)現(xiàn)血清25(OH)D3水平與精液質(zhì)量間的關(guān)系，但當(dāng)將血清25(OH)D3水平細(xì)分為25(OH)D3不足、25(OH)D3缺乏和25(OH)D3充足3個(gè)亞組時(shí)，在亞組中比較正常精子組與少弱精子組的精子密度、精子活力、精子正常形態(tài)率和前向運(yùn)動(dòng)精子百分比時(shí)，發(fā)現(xiàn)亞組中少弱精子組的精子密度、精子活力、精子正常形態(tài)率和前向運(yùn)動(dòng)精子百分比均降低，此結(jié)果表明血清25(OH)D3水平進(jìn)行細(xì)分之后，更能反映機(jī)體的血清25(OH)D3水平與生精功能之間的關(guān)系。

本研究未發(fā)現(xiàn)血清25(OH)D3水平與精液質(zhì)量間的關(guān)系。然而，精漿25(OH)D3水平與精液質(zhì)量呈正相關(guān)，這表明與血清25(OH)D3水平相比，精漿25(OH)D3水平能更好地反映男性生殖狀況。人體睪丸、射精道和成熟精子中維生素D代謝酶的存在表明維生素D在精子產(chǎn)生過程中的重要作用[9]。此外，有研究表明，動(dòng)物和人類的維生素D缺乏癥與精液和激素功能差有關(guān)[9]。本研究結(jié)果顯示，18.52%的正常精子組患者血清25(OH)D3水平充足，而在少弱精子癥組中25(OH)D3水平充足者僅占7.35%，且少弱精子癥組的精漿25(OH)D3水平明顯低于正常精子組，表明精漿中25(OH)D3水平在精子存活和運(yùn)動(dòng)中發(fā)揮著重要的作用。

有研究表明25(OH)D3可能在Ca2+依賴性過程中發(fā)揮重要作用，例如過度活化的運(yùn)動(dòng)、獲能和頂體反應(yīng)。25(OH)D3通過調(diào)節(jié)重要過程(例如膽固醇流出和特定蛋白質(zhì)上酪氨酸和蘇氨酸殘基的磷酸化)來調(diào)節(jié)精子的存活和運(yùn)動(dòng)[4]。有研究表明正常無精子癥和少弱精子癥男性的血清25(OH)D3水平無明顯差異，但該研究發(fā)現(xiàn)血清25(OH)D3水平與所有患者的精子活力呈正相關(guān)，而在精子質(zhì)量正常的男性中血清25(OH)D3水平則與精子的正常形態(tài)呈正相關(guān)[10]。BARTL等[11]研究表明，25(OH)D3缺乏的男性總精子活力和進(jìn)行性精子活力降低，這表明25(OH)D3缺乏可能會(huì)影響不育男性的精液質(zhì)量。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果一致，精漿25(OH)D3水平與精子密度、精子活力及前向運(yùn)動(dòng)精子百分比呈正相關(guān)，表明精漿25(OH)D3水平在一定程度上反映了男性睪丸的生精功能。

綜上所述，少弱精子組患者的精液質(zhì)量及精漿25(OH)D3水平明顯低于正常精子組，精漿25(OH)D3水平與精子密度、精子活力和前向運(yùn)動(dòng)精子百分比呈正相關(guān)。本研究下一步將深入探討補(bǔ)充25(OH)D3水平是否可改善精液質(zhì)量。