朱曉晨

核酸檢測(cè)(nucleic acid testing,NAT)可直接在檢測(cè)當(dāng)中使用,在診斷乙肝上意義重大。有相關(guān)研究顯示,此種檢測(cè)方式優(yōu)點(diǎn)在于高靈敏度且結(jié)果準(zhǔn)確,在臨床檢驗(yàn)當(dāng)中得到了廣泛使用,針對(duì)于各種原因?qū)е碌穆z血液具有高準(zhǔn)確度,顯著減少了因輸血引起的病毒感染發(fā)生率,為臨床檢查提供了有效措施［1,2］。為探究NAT、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)在血液標(biāo)本內(nèi)HBV 檢測(cè)中的價(jià)值,故選擇20140例合格血液標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2019年7月～2020年8月間20140 份無(wú)償獻(xiàn)血血液合格標(biāo)本納入研究,經(jīng)過(guò)干化學(xué)法進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)檢測(cè),選擇金標(biāo)試紙法對(duì)乙肝病毒表面抗原(HBsAg)進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果合格。

1.2 方法

1.2.1 血液采集方法 樣管離心速率3000 r/min,離心力1600 g,時(shí)間為15 min,在4℃環(huán)境下進(jìn)行保存,檢測(cè)時(shí)間在48 h 內(nèi),對(duì)血液采集日期、樣品編碼等信息進(jìn)行記錄保存。對(duì)標(biāo)本的處理時(shí)間在2 h 內(nèi),轉(zhuǎn)存至冰箱,冰箱溫度設(shè)定在2～8℃,經(jīng)過(guò)2～3 h 后進(jìn)行離心儲(chǔ)存處理,在24 h 內(nèi)進(jìn)行血清學(xué)檢查。

1.2.2 檢測(cè)方式 所有操作均按照規(guī)定進(jìn)行,試劑在有效期內(nèi)使用,選擇STAR 全自動(dòng)樣儀、BEHRUNG全自動(dòng)酶免后處理機(jī)、Cobas s201 核酸檢測(cè)系統(tǒng)、COBAS Ampliprep 核酸提取儀、COBAS Taqman 核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀。ELISA 檢測(cè)：對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行HBsAg 檢測(cè),選擇2 種ELISA 試劑,在實(shí)驗(yàn)中設(shè)定陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、室內(nèi)質(zhì)控品組與空白對(duì)照組,檢驗(yàn)結(jié)果判定：樣本光密度值與臨界值的比值(S/CO)≥1 為陽(yáng)性,此狀態(tài)血液不符合標(biāo)準(zhǔn)；0.5＜S/CO＜1 為灰區(qū),此狀態(tài)血液不符合標(biāo)準(zhǔn)；S/CO＜0.5 為陰性,此狀態(tài)血液符合標(biāo)準(zhǔn)。NAT 檢測(cè)：選擇混樣方案進(jìn)行NAT 檢測(cè),在混樣中設(shè)定6 個(gè)標(biāo)本,設(shè)定對(duì)照組,混合測(cè)定陰性為陰性,對(duì)混合測(cè)定陽(yáng)性者進(jìn)行拆分,如拆分檢測(cè)表現(xiàn)陰性則為NAT 陰性,如拆分測(cè)定呈現(xiàn)陽(yáng)性,則為NAT 陽(yáng)性。針對(duì)NAT 陽(yáng)性標(biāo)本中,經(jīng)過(guò)NAT 檢查判定為陽(yáng)性,HBsAg 檢測(cè)結(jié)果為陰性與NAT 判定陰性獻(xiàn)血者進(jìn)行隨訪(fǎng),在2 個(gè)月后進(jìn)行重新采樣。

2 結(jié)果

20140 份血液標(biāo)本中,ELISA 檢測(cè)雙試劑陽(yáng)性6 份,單試劑陽(yáng)性8 份,雙試劑陰性20126 份。在雙試劑陰性標(biāo)本中,NAT 檢測(cè)呈陰性20111 份,陽(yáng)性15 份,在確認(rèn)陽(yáng)性的15 份標(biāo)本中,對(duì)符合診斷條件的獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤,ELISA 陰性轉(zhuǎn)化陽(yáng)性3 份,均在ELISA 窗口期經(jīng)過(guò)NAT 檢測(cè)確認(rèn),NAT 檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)2 份隱匿性HBV 感染。

3 討論

HBV、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒三類(lèi)病毒的特點(diǎn)在于均為血液傳播,嚴(yán)重威脅了人們的生命安全。相關(guān)資料顯示,對(duì)發(fā)展中國(guó)家的血液標(biāo)本進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)5%～20%的血液中存在感染的危險(xiǎn),歷年的輸血以及非安全性注射當(dāng)中,HBV 感染人數(shù)為1600 萬(wàn),丙型肝炎病毒感染人數(shù)為470 萬(wàn),艾滋病病毒感染人數(shù)為16 萬(wàn),高感染率對(duì)人民的生命安全造成了威脅,且對(duì)國(guó)家經(jīng)濟(jì)以及社會(huì)安全造成了嚴(yán)重影響［3,4］。當(dāng)患者身體虛弱時(shí),免疫功能顯著下降,相比于健康者有更大幾率感染血液中的病毒,且因?yàn)椴《靖腥驹斐蓢?yán)重后果,嚴(yán)重影響了醫(yī)患關(guān)系,為保證患者的輸血安全性,維護(hù)正常的醫(yī)療秩序,我國(guó)臨床對(duì)血液的安全性十分重視。

我國(guó)是HBV 感染高發(fā)國(guó)家,HBV 作為一種可通過(guò)血液傳播的病毒,對(duì)獻(xiàn)血人群進(jìn)行血液檢測(cè)是防控HBV 感染的最佳手段。在臨床診斷中ELISA 的使用較為廣泛,在正常情況下,HBsAg 是臨床檢測(cè)的常用指標(biāo),同時(shí)ELISA 檢測(cè)方式的優(yōu)點(diǎn)在于價(jià)格低廉、操作便捷［5］,所以在血液檢查當(dāng)中具有重要意義。但因?yàn)殡[匿性HBV、HBV 感染窗口期的存在,在臨床檢驗(yàn)中同樣有較高的漏診情況。NAT 作為臨床血清學(xué)診斷方法,也是新型分子生物學(xué)診斷措施,同時(shí)對(duì)HBV-DNA含量進(jìn)行檢測(cè)能直接檢測(cè)出患者的感染情況,因?yàn)橛懈哽`敏性、高特異性等優(yōu)點(diǎn),在臨床血液檢查中得到了廣泛使用［6］。在輸血的過(guò)程中是否有可靠的安全性,關(guān)鍵在于檢查病毒的窗口期,根據(jù)相關(guān)結(jié)果顯示,通過(guò)NAT 檢測(cè)后能顯著降低HBV 的窗口期,降低率已經(jīng)達(dá)到了40%～75%,能有效減少病毒通過(guò)血液傳輸途徑傳播的可能性。在本研究中,對(duì)NAT 檢驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性標(biāo)本中,NAT 確認(rèn)為陽(yáng)性,但檢驗(yàn)結(jié)果為陰性以及NAT 確認(rèn)陰性獻(xiàn)血者進(jìn)行隨訪(fǎng)追蹤,經(jīng)過(guò)ELISA 檢測(cè)陰性轉(zhuǎn)化為陽(yáng)性3例,該血樣于ELISA 窗口期通過(guò)NAT 檢測(cè)方法確認(rèn),并且發(fā)現(xiàn)隱匿性HBV 感染者,同時(shí)說(shuō)明了NAT 在血液檢驗(yàn)中具有重要價(jià)值［7］。NAT 檢測(cè)中所選擇的試劑同樣具有高靈敏性和高特異性,同時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境也有一定的要求,在血液篩查的過(guò)程中所應(yīng)用的設(shè)備和試劑應(yīng)當(dāng)具有更高要求,盡管顯著提升了血液篩查的成本,但同時(shí)也大大提升了血液安全的保證,同時(shí),NAT 自身存在一定約束,如果病毒含量較低,選擇NAT 檢測(cè)無(wú)法得到準(zhǔn)確結(jié)果［8］。然而在檢測(cè)當(dāng)中選擇NAT 檢測(cè)方式能有效提升病毒檢測(cè)準(zhǔn)確率,為輸血安全性提供了保障,并且NAT 檢測(cè)可以顯著減少窗口期,降低了通過(guò)輸血方式傳播病毒的可能,不過(guò)在血液檢測(cè)中可能會(huì)發(fā)生漏檢情況,在進(jìn)行NAT 檢測(cè)的時(shí)候,應(yīng)當(dāng)特別注意病毒核酸,ELISA 則為抗原或抗體,所以,兩種方法在檢測(cè)原理上具有一定差異性,所以,兩種檢測(cè)方式可以同時(shí)應(yīng)用于血液檢測(cè)中,發(fā)揮互補(bǔ)的效果,兩種措施針對(duì)于血液篩查均為關(guān)鍵檢測(cè)方案。因?yàn)镠BV 作為一種能通過(guò)血液傳播的病毒,能使患者傳染乙肝,在近年來(lái),外界環(huán)境逐漸復(fù)雜,乙肝傳染率開(kāi)始逐漸上升,所以為降低感染發(fā)生、縮短輸血傳播的窗口期,開(kāi)展了NAT 檢測(cè),增強(qiáng)獻(xiàn)血血液的檢查力度。ELISA 作為臨床中最常見(jiàn)的血液標(biāo)本HBV 檢驗(yàn)方式,能通過(guò)血液標(biāo)本中HBsAg 的檢測(cè)對(duì)HBV 進(jìn)行篩查,具有高檢出率的特點(diǎn),但是對(duì)于窗口期、特異性以及靈敏度存在一定的局限性,有一定的漏診情況［9,10］。然而NAT 檢測(cè)法能通過(guò)直接檢測(cè)血液標(biāo)本內(nèi)的HBV數(shù)量進(jìn)行HBV 篩查,所以能更直觀(guān)的篩查出檢測(cè)血液標(biāo)本內(nèi)是否存在HBV,對(duì)血液標(biāo)本的篩查和排查具有積極意義。

因?yàn)檠簜鞑ナ荋BV 感染的重要途徑之一,所以HBV 篩查是血液系統(tǒng)中最為主要的內(nèi)容,當(dāng)下ELISA作為一類(lèi)血清學(xué)方法,也成為了診斷HBV 使用最為廣泛的方法,在臨床診斷和血液篩查當(dāng)中具有關(guān)鍵作用,HBV-DNA 檢測(cè)是近年來(lái)快速發(fā)展起來(lái)的分子生物學(xué)診斷措施,對(duì)于發(fā)現(xiàn)早期HBV 具有重要意義,且結(jié)果可靠,根據(jù)相關(guān)資料顯示,ELISA 檢測(cè)HBV-DNA和HBsAg 的結(jié)果存在一定差異,主要原因可能是HBV感染早期,獻(xiàn)血者血液中病毒數(shù)量較低,HBsAg 不能被ELISA 檢測(cè)到,然而DNA 已經(jīng)存在于血清當(dāng)中,所以,HBV-DNA 檢測(cè)呈現(xiàn)陽(yáng)性。雖然HBV-DNA 檢測(cè)是快速發(fā)展的分子生物學(xué)診斷措施,但是針對(duì)于早期HBV 感染并不能對(duì)病毒進(jìn)行定量,盡管近年來(lái)ELISA試劑盒的靈敏度、特異性正在改善,但依然無(wú)法避免病毒感染窗口期、病毒免疫、免疫沉默等因素引發(fā)的漏檢情況,然而NAT 技術(shù)不斷被亞洲歐美等多個(gè)國(guó)家作為篩查獻(xiàn)血者血液的主要方法,作為高度敏感、特異的篩查輸血傳染因子的檢測(cè)方法主要針對(duì)人類(lèi)免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒以及HBV,在我國(guó),NAT 檢測(cè)HBV 的方法正逐漸被推廣開(kāi)來(lái),根據(jù)相關(guān)研究表示,在獻(xiàn)血者的血液篩查當(dāng)中,選擇NAT 檢測(cè)技術(shù)能顯著提升輸血的安全性,在經(jīng)過(guò)NAT 檢測(cè)后,能夠顯著縮短人類(lèi)免疫缺陷病毒、HBV、丙型肝炎病毒的ELISA 窗口期,在一定程度上降低了病毒經(jīng)過(guò)血液傳播的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述,NAT 以及ELISA 在臨床診斷中均存在一定效果,兩種試驗(yàn)方式具有一定互補(bǔ)性,且NAT 在臨床診斷中具有高靈敏度以及高特異性,在進(jìn)行血液檢查中能顯著降低漏診情況的發(fā)生,縮短了HBV 的窗口期,確保輸血治療安全性。上述兩種檢測(cè)方式在原理以及方法上存在區(qū)別,但在篩查結(jié)果中不存在重復(fù)性,均為血液篩查的關(guān)鍵檢測(cè)方式。