段毅超，郭汝悅，劉懷高，臧春華，馬夢(mèng)雅，衣大龍*，任雪玲，3*

（1.鄭州大學(xué) 藥學(xué)院，河南 鄭州 450001；2.安徽國(guó)肽生物科技有限公司，安徽 宣城 242100；3.河南省腫瘤重大疾病靶向治療與診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450001）

免疫力是機(jī)體自身防御能力，惡性腫瘤、慢性腎炎、風(fēng)濕等重大疾病的發(fā)生發(fā)展都與人體免疫失調(diào)密切相關(guān)[1-2]。因此維持機(jī)體免疫平衡至關(guān)重要。食源性生物活性肽是一類含有2個(gè)～20個(gè)氨基酸殘基的多肽混合物，通常由特定食物蛋白經(jīng)酶解等方法制備得到。近年來，越來越多的研究表明，食源性生物活性肽除具有明確的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值之外，還可以通過多種機(jī)制調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力，促進(jìn)人體健康[3-4]。如紫蘇籽蛋白可以通過增加免疫低下小鼠的脾臟和胸腺指數(shù)、促進(jìn)T/B淋巴細(xì)胞的增殖、提高半數(shù)溶血值、自然殺傷細(xì)胞殺傷力、巨噬細(xì)胞吞噬能力及白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-2含量等從而發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用[5]。Li等[6]發(fā)現(xiàn)從蠶蛹蛋白水解物中分離出的多肽可以促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖，刺激IL-6、IL-12等免疫因子的產(chǎn)生，具有免疫調(diào)節(jié)活性。因此，利用食源性生物活性肽促進(jìn)機(jī)體免疫平衡是一種有效的方法，同時(shí)也為抵抗疾病侵襲提供了一種有益的選擇。

黃牛骨肽（cattle bone peptide，CBP）是一種以秦川牛、南陽(yáng)牛等牛骨骼為來源制備得到的食源性生物活性肽，具有來源廣泛，易消化吸收，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、抗原性弱等優(yōu)點(diǎn)，在食品領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用[7-10]。已有研究表明，包括CBP在內(nèi)的來源于動(dòng)物骨骼的生物活性肽通常具有調(diào)節(jié)骨代謝、抗骨質(zhì)疏松等生物活性[11-12]?；诜肿铀降难芯堪l(fā)現(xiàn)，骨肽抵抗骨質(zhì)疏松的作用機(jī)制與核因子 κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）信號(hào)通路密切相關(guān)[13-15]，而NF-κB信號(hào)通路在免疫系統(tǒng)中起著至關(guān)重要的作用，這表明動(dòng)物骨肽或許具有一定免疫調(diào)節(jié)功能。有研究發(fā)現(xiàn)來源于豬骨、羊骨或牦牛骨的生物活性肽具有一定的免疫調(diào)節(jié)活性[16-18]，但是關(guān)于CBP的免疫調(diào)節(jié)活性鮮有報(bào)道。

本研究以CBP為原料，基于巨噬細(xì)胞RAW264.7和氫化可的松所致免疫低下小鼠分別在細(xì)胞水平和動(dòng)物水平考察其免疫調(diào)節(jié)活性，檢測(cè)指標(biāo)包括細(xì)胞增殖率、小鼠的體質(zhì)量變化、相對(duì)免疫器官指數(shù)、外周血白細(xì)胞相對(duì)數(shù)量、碳廓清能力、吞噬熒光微球能力、耳腫脹法遲發(fā)型變態(tài)（delayed type hypersensitivity，DTH）反應(yīng)。本研究將為CBP的免疫調(diào)節(jié)作用提供數(shù)據(jù)支撐，也為CBP在食品及醫(yī)藥領(lǐng)域的進(jìn)一步應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

小鼠源巨噬細(xì)胞株RAW264.7：鄭州大學(xué)藥學(xué)院保存；SPF級(jí)雄性BALB/c小鼠，6周～8周齡，體質(zhì)量（18±2）g，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（豫）2017～0001。

CBP（新鮮牛骨經(jīng)生物酶降解制得的生物活性肽，平均分子量為962.0 Da）：安徽國(guó)肽生物科技有限公司；氫化可的松（hydrocortisone，HCT）注射液：山西省芮城縣紅寶獸藥有限責(zé)任公司；二硝基氟苯（2，4-dinitrofluorobenzene，DNFB）：上海凜恩科技發(fā)展有限公司；綿羊紅細(xì)胞（sheep red blood cell，SRBC）、DMEM培養(yǎng)基、噻唑藍(lán)[3-（4，5）-dimethylthiahiazo（-z-y1）-3，5-di-phenytetrazoliumromide，MTT]：北京索萊寶科技有限公司；磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）：武漢賽維爾生物科技有限公司；胎牛血清：浙江天行生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

倒置顯微鏡（IX53型）：日本Olympus公司；全自動(dòng)血液分析儀（BC-2800）：上海泰益醫(yī)療儀器設(shè)備有限公司；CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（E191型）：美國(guó)SIM公司；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（Spectra Mr型）：美國(guó)DYNEX公司；紫外分光光度計(jì)（UV-2600）：日本SHIMADZU公司；流式細(xì)胞儀（FACS Calibur型）：美國(guó)BD公司。

1.3 方法

1.3.1 CBP對(duì)RAW264.7細(xì)胞增殖的影響

將指數(shù)生長(zhǎng)期的RAW264.7細(xì)胞消化為單細(xì)胞懸液，以 1.000×104個(gè)/孔接種于 96孔板中，于 37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)，棄去舊培養(yǎng)基，分別加入含 1.6、8.0、40.0、200.0、1 000.0 μg/mL CBP 的培養(yǎng)基100 μL，空白對(duì)照組加入100 μL未含有CBP的培養(yǎng)基，每組5個(gè)復(fù)孔。將細(xì)胞繼續(xù)正常培養(yǎng)24 h，采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖率。

1.3.2 CBP對(duì)RAW264.7細(xì)胞吞噬作用的影響

將RAW264.7細(xì)胞在含不同濃度CBP（濃度范圍同1.3.1）的培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)24 h后，按照每孔100 μL的劑量加入含0.05%中性紅的無菌PBS溶液，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h，PBS溶液洗滌3次，每孔加入200 μL 細(xì)胞裂解液（無水乙醇∶乙酸=1∶1，體積比），于4℃靜置過夜，細(xì)胞完全裂解后于540 nm處測(cè)定OD值，按照以下公式計(jì)算吞噬率。其中空白對(duì)照組為不經(jīng)CBP處理組。

1.3.3 動(dòng)物分組與給藥

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均飼養(yǎng)于20℃～26℃、明暗周期12 h/12 h的恒溫恒濕室內(nèi)，實(shí)驗(yàn)期間，正常飼喂，自由飲水。48只BALB/c小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組，每組12只，分籠飼養(yǎng)。按照人體推薦量的1倍、5倍和10倍設(shè)置CBP低（CBP-L）、中（CBP-M）、高（CBP-H）劑量干預(yù)組，劑量分別為 1.20、6.00、12.00g/kg，并以給予與給藥組相同體積生理鹽水為免疫低下對(duì)照組（HCT），每日口服灌胃給藥一次，共連續(xù)干預(yù)30 d。在CBP干預(yù)的第21天，各組小鼠分別按照40.00 mg/kg隔天肌肉注射氫化可的松，共注射5次，建立免疫低下小鼠模型。末次給藥結(jié)束后，各組小鼠禁食不禁水12h，進(jìn)行后續(xù)指標(biāo)的檢測(cè)。

1.3.4 小鼠相對(duì)體質(zhì)量變化及免疫器官相對(duì)臟器指數(shù)

實(shí)驗(yàn)期間，每3 d對(duì)各組小鼠進(jìn)行稱重并記錄，相對(duì)體質(zhì)量為各組小鼠的體質(zhì)量與HCT組小鼠體質(zhì)量均值的比值。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，脫頸椎處死小鼠，剝離胸腺、脾臟組織，生理鹽水清洗干凈后用濾紙將水分吸干并進(jìn)行稱重，按照以下公式計(jì)算臟器指數(shù)。相對(duì)臟器指數(shù)為各組小鼠的臟器指數(shù)與HCT組小鼠臟器指數(shù)均值的比值。

1.3.5 小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)

由小鼠眼眶靜脈叢采血，利用血液分析儀對(duì)各組小鼠外周血白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)分析，小鼠的相對(duì)白細(xì)胞數(shù)量為各組的白細(xì)胞數(shù)量與HCT組白細(xì)胞數(shù)量均值的比值。

1.3.6 小鼠碳廓清能力的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[19]中方法，將墨汁稀釋液按照0.1mL/10 g的劑量經(jīng)尾靜脈注射至各小鼠體內(nèi)，分別于注射后2 min和10 min時(shí)，由小鼠眼眶靜脈叢采血20.0 μL，加入2.00 mL Na2CO3溶液，渦旋混勻。用紫外分光光度計(jì)測(cè)定600 nm波長(zhǎng)處的吸光度。小鼠脫頸椎處死后，剝離肝臟和脾臟，生理鹽水清洗干凈后用濾紙將水分吸干并稱量。按照下列公式計(jì)算吞噬指數(shù)a，相對(duì)吞噬指數(shù)為各組小鼠的a與HCT組小鼠a均值的比值。

式中：k為吞噬速率（未經(jīng)校正的吞噬指數(shù)）；A1、A2分別是2 min和10 min的吸光度；t1=2 min，t2=10 min。

1.3.7 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬熒光微球?qū)嶒?yàn)

小鼠處死前4 d，經(jīng)腹腔注射0.2 mL 2.0%SRBC。脫頸椎處死后提取腹腔巨噬細(xì)胞，以2.000×105個(gè)/孔接種于12孔板中，常規(guī)培養(yǎng)過夜后，更換為含熒光微球新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2 h，棄去培養(yǎng)基，PBS洗滌3次，使巨噬細(xì)胞重懸于1.00 mL PBS內(nèi)，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，熒光微球相對(duì)吞噬率為各組小鼠巨噬細(xì)胞熒光微球吞噬率與HCT組小鼠巨噬細(xì)胞熒光微球吞噬率均值的比值。

1.3.8 耳腫脹法DTH反應(yīng)

參考文獻(xiàn)[19]中方法，小鼠腹部經(jīng)脫毛處理后，均勻涂抹50.0 μL DNFB進(jìn)行致敏。5 d后，在小鼠右耳內(nèi)外均勻涂抹10.0 μL DNFB進(jìn)行攻擊。24 h后，處死小鼠，取下小鼠左右耳殼，用打孔器取下直徑約8 mm的耳片，稱量，以兩側(cè)耳片質(zhì)量的差值表示DTH程度，相對(duì)耳腫脹度為各組小鼠的耳腫脹度值與HCT組小鼠耳腫脹度值均值的比值。

1.3.9 血清溶血素的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[20]中方法，利用2.0%SRBC對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔免疫，4 d后，通過眼眶靜脈叢采血，經(jīng)生理鹽水倍比稀釋后，分別取100.0 μL加入微量血凝實(shí)驗(yàn)板內(nèi)，隨后加入100.0 μL 0.5%SRBC并混勻。37℃恒溫孵育3 h后，觀察血球凝集程度并計(jì)算抗體積數(shù)。抗體積數(shù)越大，表示小鼠體內(nèi)抗體水平越高。

血球凝集程度分為5級(jí)（0～Ⅳ），0級(jí)：紅細(xì)胞全部下沉，在孔底集中并形成致密圓點(diǎn)狀，周圍液體清晰。Ⅰ級(jí)：紅細(xì)胞大部分沉集在孔底成圓點(diǎn)狀，周圍有少量凝集的紅細(xì)胞。Ⅱ級(jí)：凝集的紅細(xì)胞在孔底形成薄層，中心有一個(gè)明顯疏松的紅點(diǎn)。Ⅲ級(jí)：凝集的紅細(xì)胞均勻地鋪散在孔底形成一薄層，中心隱約可見一個(gè)小紅點(diǎn)。Ⅳ級(jí)：凝集的紅細(xì)胞均勻地鋪散在孔底形成一薄層，凝塊有時(shí)可成卷折狀。依據(jù)下列公式計(jì)算抗體積數(shù)。相對(duì)抗體積數(shù)為各組小鼠的抗體積數(shù)與HCT組小鼠抗體積數(shù)均值的比值。

抗體積數(shù)=（S1+2S2+3S3+……nSn）

式中：1、2、3……n分別代表對(duì)倍稀釋的指數(shù)，S代表凝集程度的級(jí)別。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Origin 2019b軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和圖表繪制，處理所得數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)比較組間差異，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 CBP的體外免疫活性

巨噬細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要細(xì)胞，主要通過其吞噬功能對(duì)機(jī)體的非特異性免疫進(jìn)行調(diào)節(jié)，也是用于檢測(cè)食源性生物活性肽是否具有免疫調(diào)節(jié)活性的主要細(xì)胞模型[21-22]。因此首先以巨噬細(xì)胞株RAW264.7為模型，通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)CBP的免疫調(diào)節(jié)活性進(jìn)行初步探究。體外免疫實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組相比，不同劑量的CBP對(duì)巨噬細(xì)胞的增殖能力和吞噬能力均有不同程度的促進(jìn)作用，具體結(jié)果如圖1所示。

圖1 CBP對(duì)RAW264.7細(xì)胞增殖和吞噬能力的影響Fig.1 Effects of CBP on the proliferation and phagocytosis of RAW264.7 cells

由圖1a可知，與空白對(duì)照組相比，CBP在1.6μg/mL～1 000.0 μg/mL濃度內(nèi)均能夠顯著增強(qiáng)RAW264.7細(xì)胞的增殖活性。當(dāng)濃度為40.0 μg/mL時(shí)，巨噬細(xì)胞增殖率最高，可達(dá)（123.9±6.5）%。此外，由圖 1b可知，CBP可以提高RAW264.7細(xì)胞的吞噬能力，且呈劑量依賴性增長(zhǎng)，當(dāng)濃度增加至1 000.0 μg/mL時(shí)，其吞噬率為空白對(duì)照組的1.920倍。表明CBP能夠促進(jìn)免疫相關(guān)巨噬細(xì)胞的增殖作用，且可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬作用，在體外細(xì)胞水平具有一定的免疫調(diào)節(jié)活性，之后在動(dòng)物水平對(duì)CBP的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行考察。

2.2 小鼠的生長(zhǎng)狀況

不同劑量的CBP對(duì)免疫低下小鼠生長(zhǎng)狀況的影響情況如圖2所示。

圖2 CBP對(duì)小鼠生長(zhǎng)狀況的影響Fig.2 Effects of CBP on growth of mice

體質(zhì)量變化是反映機(jī)體健康狀態(tài)的一個(gè)重要指標(biāo)，通常免疫力低下都會(huì)伴隨著體質(zhì)量下降。如圖2a所示，免疫抑制之前，各組小鼠相對(duì)體質(zhì)量隨時(shí)間延長(zhǎng)不斷增加。第21天，經(jīng)肌肉注射免疫抑制劑氫化可的松后，各組小鼠相對(duì)體質(zhì)量均明顯下降。由圖2b可知，第30天時(shí)，與免疫低下對(duì)照組相比，CBP中劑量組和高劑量組的小鼠相對(duì)體質(zhì)量顯著增加（P<0.05），增長(zhǎng)率分別為（110.74±9.20）%和（113.65±14.43）%。因此，CBP可以改善氫化可的松對(duì)體質(zhì)量的抑制作用，延緩小鼠體質(zhì)量下降，有助于改善小鼠的免疫功能。

2.3 CBP對(duì)小鼠免疫器官臟器指數(shù)的影響

不同劑量的CBP對(duì)免疫低下小鼠免疫器官的影響情況如圖3所示。

圖3 免疫組織相對(duì)臟器指數(shù)Fig.3 Relative organ index of immune tissues

臟器指數(shù)，尤其是免疫器官臟器指數(shù)的變化能直接反映機(jī)體免疫功能的改變[23-24]。脾臟和胸腺是機(jī)體內(nèi)重要的免疫器官，其臟器指數(shù)的變化能夠有效反映機(jī)體免疫狀態(tài)。如壇紫菜中分離的R-藻紅蛋白肽可以通過提高小鼠的脾臟和胸腺指數(shù)改善免疫低下小鼠的免疫活性[25]。由圖3可知，與免疫低下對(duì)照組相比，CBP中劑量組（P<0.01）和高劑量組小鼠（P<0.05）的相對(duì)脾臟指數(shù)顯著增加，相對(duì)胸腺指數(shù)也表現(xiàn)出相似的顯著性差異（P<0.05）。結(jié)果表明，CBP可以改善免疫低下小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，這有助于改善免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)能力。

2.4 CBP對(duì)小鼠非特異性免疫的影響

不同劑量的CBP對(duì)免疫低下小鼠白細(xì)胞相對(duì)數(shù)量的影響情況如圖4所示。

由圖4可知，CBP處理組小鼠白細(xì)胞相對(duì)數(shù)量呈劑量依賴性增長(zhǎng)，與免疫低下組小鼠相比，中劑量組（P<0.05）和高劑量組（P<0.01）小鼠白細(xì)胞相對(duì)數(shù)量顯著增加。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CBP可以增加免疫低下小鼠的白細(xì)胞數(shù)量，改善小鼠的非特異性免疫調(diào)節(jié)能力。

圖4 小鼠白細(xì)胞相對(duì)數(shù)量Fig.4 Relative count of white blood cells in mice

巨噬細(xì)胞是除淋巴細(xì)胞外免疫系統(tǒng)中另一主要的細(xì)胞群，其吞噬能力越強(qiáng)，說明細(xì)胞的免疫活性越強(qiáng)。有研究發(fā)現(xiàn)骨酶解產(chǎn)物可以提高吞噬細(xì)胞清除碳顆粒能力，這是衡量生物活性肽非特異性免疫調(diào)節(jié)活性的重要指標(biāo)[17]。因此，本研究重點(diǎn)考察基于腹腔巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)活性，采用小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)和腹腔巨噬細(xì)胞吞噬熒光微球?qū)嶒?yàn)考察小鼠單核/巨噬細(xì)胞的吞噬能力，進(jìn)而探究CBP對(duì)小鼠非特異性免疫的影響。不同劑量的CBP對(duì)免疫低下小鼠單核/巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響見圖5。

圖5 CBP對(duì)小鼠非特異性免疫的影響Fig.5 Effects of CBP on non-specific immunity of mice

由圖5a可知，CBP低、中、高劑量組的相對(duì)吞噬指數(shù)均高于免疫低下對(duì)照組，呈劑量依賴性，且低劑量組（P<0.05）與高劑量組（P<0.001）具有顯著差異，說明CBP可提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的碳廓清能力。由圖5b可知，CBP中劑量組和高劑量組的腹腔巨噬細(xì)胞的熒光微球相對(duì)吞噬率顯著高于免疫低下對(duì)照組（P<0.01），且呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。結(jié)果表明，CBP可使免疫低下小鼠單核/巨噬細(xì)胞的吞噬、清除異物的能力增強(qiáng)，改善免疫低下小鼠的非特異性免疫功能。

2.5 CBP對(duì)小鼠特異性免疫的影響

當(dāng)機(jī)體與特異性抗原接觸后，響應(yīng)性地產(chǎn)生針對(duì)該抗原的特異性免疫，該類免疫應(yīng)答也稱為適應(yīng)性免疫，主要由T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)完成，是機(jī)體抵抗病原體感染的主要方式[26-27]。遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)是T細(xì)胞介導(dǎo)的一種細(xì)胞免疫應(yīng)答，其反應(yīng)強(qiáng)度反映了機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。不同劑量的CBP對(duì)免疫低下小鼠特異性免疫功能的影響見圖6。

圖6 CBP對(duì)小鼠特異性免疫的影響Fig.6 Effects of CBP on specific immunity of mice

由圖6a可知，CBP組小鼠的相對(duì)耳腫脹程度均高于免疫低下對(duì)照組，雖無顯著性差異，但呈劑量依賴性增長(zhǎng)。血清溶血素抗體水平反映小鼠體液免疫功能，以抗體積數(shù)表示血清溶血素的水平，抗體積數(shù)越高表明小鼠的特異性體液免疫能力越強(qiáng)。由圖6b可知，與免疫低下對(duì)照組相比，CBP高劑量組（P<0.001）和中劑量組（P<0.05）小鼠相對(duì)抗體積數(shù)顯著增加。結(jié)果表明，CBP能提高機(jī)體的特異性體液免疫功能，改善小鼠的特異性免疫功能。

3 討論與結(jié)論

研究結(jié)果表明，黃牛骨肽（cow bone peptide，CBP）可促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的增殖及吞噬作用，證明了其在體外細(xì)胞水平具有一定的免疫調(diào)節(jié)活性，而后系統(tǒng)考察CBP對(duì)免疫低下小鼠的免疫調(diào)節(jié)活性。機(jī)體免疫應(yīng)答是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，一般可以分為固有免疫和適應(yīng)性免疫。固有免疫是機(jī)體抵抗病原體的首道防線，主要是皮膚及黏膜的物理阻擋作用，以及非特異性免疫效應(yīng)細(xì)胞和免疫分子對(duì)抗原的清除作用[28]。改善固有免疫是食源性生物活性肽發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的最主要方式。如豬骨活性肽可以顯著促進(jìn)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖活性[16]；山藥蛋白肽可以提高免疫低下小鼠的體質(zhì)量及免疫器官指數(shù)[29]。研究結(jié)果表明CBP可以緩解由于免疫抑制造成的小鼠體質(zhì)量下降，增加小鼠相對(duì)脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，提高外周血中白細(xì)胞相對(duì)數(shù)量，與豬骨活性肽和山藥蛋白肽的免疫調(diào)節(jié)活性相似。此外，與免疫低下組小鼠相比，高劑量CBP組小鼠的碳廓清能力及熒光微球吞噬能力可提高至1.43倍和1.44倍，顯著增加腹腔巨噬細(xì)胞活性。充分表明CBP具有較好的固有免疫調(diào)節(jié)活性。部分食源性生物活性肽在強(qiáng)化機(jī)體固有免疫的同時(shí)，可以激活機(jī)體適應(yīng)性免疫[30-31]。如牦牛骨生物活性肽可以有效緩解環(huán)磷酰胺引起的小鼠免疫力下降，除小鼠臟器指數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)等非特異性免疫指標(biāo)明顯改善之外，B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫球蛋白A、免疫球蛋白G含量，以及IL-1β、IL-6和腫瘤壞死因子-α等細(xì)胞因子含量也明顯升高，表明牦牛骨肽可以通過激活小鼠適應(yīng)性免疫應(yīng)答表現(xiàn)其免疫調(diào)節(jié)活性。本研究結(jié)果中，與免疫低下小鼠相比，中劑量和高劑量組CBP小鼠的血清溶血素抗體水平顯著增加，表現(xiàn)出明顯的體液免疫活性。以相對(duì)耳腫脹度為指標(biāo)的細(xì)胞免疫活性并沒有顯著變化。表明CBP可能通過體液免疫調(diào)節(jié)小鼠適應(yīng)性免疫應(yīng)答活性。綜上所述，CBP在體內(nèi)外均有較好的免疫調(diào)節(jié)活性，為CBP的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。