◎ 陳婉月，宋映蓮，吳瑞霞，張敬文，梁 艷，王 張

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，四川 成都 611137；2.成都中醫(yī)藥大學(xué) 民族醫(yī)藥學(xué)院，四川 成都 611137）

杏鮑菇[Pleurotus eryngii(DC.) Gillet]屬于側(cè)耳科、側(cè)耳屬[1]。醫(yī)學(xué)百科中稱杏鮑菇為“平菇王”[2]，另外在《中華本草》中平菇正名為“側(cè)耳”[3]。杏鮑菇營養(yǎng)價(jià)值極高，富含多糖、蛋白質(zhì)、甾醇類、萜類及核苷類等多種活性成分[4]。目前未見杏鮑菇的急性毒性公開報(bào)道，故根據(jù)國家食品藥品監(jiān)督管理局制定的《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[5-6]開展相關(guān)研究，確定無毒性反應(yīng)的食用量、安全食用量范圍、中毒食用量等安全性參數(shù)[7-10]，不僅有利于了解杏鮑菇的急性毒性強(qiáng)度，為日常生活中的毒副反應(yīng)監(jiān)測(cè)及解救提供參考依據(jù)，還可為后續(xù)開展量效關(guān)系、有效性、作用機(jī)制等研究提供安全劑量范圍參考[11-12]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

杏鮑菇，自購于成都市溫江區(qū)某超市，經(jīng)王張教授鑒定為Pleurotus eryngii(DC.) Gillet。

1.2 動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠，雌雄各半，50只，體重18～24 g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（川）2020-030，《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證》：№ 51203500022497。

1.3 試劑

血常規(guī)測(cè)試用試劑：溶血?jiǎng)ㄅ?hào)V-28CFL）、稀釋劑（批號(hào)M-3D）、清洗劑（批號(hào)V-28R），均來自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；血液生化指標(biāo)測(cè)試盒，均來自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.4 儀器

血常規(guī)檢測(cè)儀（型號(hào)BC-2800Vet，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)）；獸用生化分析儀（型號(hào)BS-240VET，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)）；電子稱（LQ-A6002，瑞安市安特稱重設(shè)備有限公司，量程為600 g，精確度為0.01 g）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（型號(hào)RE-2000A，上海亞榮生化儀器廠生產(chǎn)）；一次性使用真空采血管：13×100普通管（批號(hào)20201222，上海奧翔醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)）；一次性使用真空采血管：13×100肝素管（批號(hào)20210102，上海奧翔醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)）等。

1.5 其他材料

優(yōu)鮮湯骨：5.402 kg，購買于成都市溫江區(qū)某超市，生產(chǎn)和包裝日期均為2021年6月30日。

1.6 實(shí)驗(yàn)方法

1.6.1 藥液的配制

取杏鮑菇1.8 kg及豬骨頭5.4 kg，加適量水和鹽（液料比為3∶1）煮3次，每次1 h，分別收集濾液，合并后濃縮至適當(dāng)濃度，約為450 mL；取煮湯后烘干（100 ℃，4 h）的杏鮑菇，打粉，過100目藥典篩，再轉(zhuǎn)移至濃縮濾液中，配制成杏鮑菇供試混合液，藥液的最大濃度為 1.527 9 g·mL-1。

1.6.2 預(yù)實(shí)驗(yàn)

取SD小鼠10只，雌雄各半，給藥前禁食不禁水12 h，每只小鼠均按40 mL·kg-1的量一次性分別給予杏鮑菇供試混合液最大濃度（1.527 9 g·mL-1），最大食用量為61.116 0 g·kg-1，且該食用量為臨床日食用量（0.833 3 g·kg-1）的73倍，臨床日藥用劑量（0.150 0 g·kg-1）的407倍。連續(xù)觀察2 d，結(jié)果未見動(dòng)物死亡和明顯的不良反應(yīng)，無法計(jì)算杏鮑菇的LD50，故以最大給藥量進(jìn)行杏鮑菇急性毒性實(shí)驗(yàn)的正式實(shí)驗(yàn)[7,13-14]。

1.6.3 正式實(shí)驗(yàn)

取SD小鼠40只，雌雄各半，體重18～24 g，按體重分層后隨機(jī)分為杏鮑菇供試混合液組和空白對(duì)照組，每組20只（雌雄各半），給藥前12 h禁食不禁水。杏鮑菇供試混合液組小鼠一次性灌胃杏鮑菇最大濃度供試混合液（1.527 9 g食材·mL-1），給予體積均為小鼠能接受的最大容積（40 mL·kg-1）[8]，空白對(duì)照組給予生理鹽水。連續(xù)觀察14 d，并記錄各組動(dòng)物的外觀體征、精神狀況、行為活動(dòng)、分泌物、自主活動(dòng)、中毒癥狀及死亡情況[15]，同時(shí)觀察動(dòng)物中毒反應(yīng)的出現(xiàn)、維持時(shí)間，是否可逆以及嚴(yán)重程度，此外分析可能的靶器官、系統(tǒng)或組織，若出現(xiàn)動(dòng)物死亡則對(duì)其進(jìn)行組織病理學(xué)觀察[9,16]。分別在給藥前1 d、給藥當(dāng)天、給藥后第7 d和第14 d時(shí)，觀察并記錄各組動(dòng)物的體重（g）變化及進(jìn)食[飼料消耗量，g·（kg·d）-1]情況。第14 d時(shí)，觀察未死亡動(dòng)物的一般情況及天然孔道情況，而后動(dòng)物經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，其中每組的10只小鼠取0.5～1.0 mL抗凝處理，另外10只小鼠取凝固后分離血清0.3～0.5 mL，立即送檢，測(cè)試血常規(guī)和血液生化指標(biāo)[17]。

2 結(jié)果與分析

2.1 死亡情況、一般狀況及尸檢結(jié)果

經(jīng)灌胃后0.5～1.0 h內(nèi)，各小鼠均未出現(xiàn)異常。經(jīng)灌胃后第2～14 d，各實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均未出現(xiàn)不良反應(yīng)，在觀察期內(nèi)均無動(dòng)物死亡，其被毛、眼、口腔、鼻分泌物、運(yùn)動(dòng)功能、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、反射及痛覺均未見異常；各實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)解剖后體內(nèi)的臟器以及排列均無肉眼可見的異常。

2.2 體重及飼料消耗量變化情況

2.2.1 體重變化情況

杏鮑菇一次性灌胃給予雌雄小鼠后14 d內(nèi)，與給藥前1 d比較，給藥后第2 d時(shí)，空白對(duì)照組雌雄小鼠體重均明顯增加（P＜0.05），給藥后第7 d空白對(duì)照組雄性小鼠和杏鮑菇供試混合液組雌雄小鼠體重均明顯增加（P＜0.05或P＜0.01），給藥后第14 d時(shí)，空白對(duì)照組和杏鮑菇供試混合液組雌雄小鼠體重均明顯增加（P＜0.05或P＜0.01）；與空白對(duì)照組比較，給藥后第2 d、7 d、14 d時(shí)，杏鮑菇供試混合液組雌雄小鼠體重均無明顯差異（P＞0.05）?？傮w而言，空白對(duì)照組和杏鮑菇供試混合液組雌雄小鼠體重均自然增長，且最大給藥劑量61.116 0 g·kg-1的杏鮑菇供試混合液對(duì)小鼠體重沒有明顯影響。見表1。

表1 一次性給予杏鮑菇后14 d內(nèi)小鼠體重的變化情況表（g，）

表1 一次性給予杏鮑菇后14 d內(nèi)小鼠體重的變化情況表（g，）

注：與給藥前1 d對(duì)比，#意為P＜0.05，##意為P＜0.01；與空白對(duì)照組比，*意為P＜0.05，**意為P＜0.01。

組別 劑量/g·kg-1 性別 只數(shù)/只 給藥前1 d 給藥后第2 d 給藥后第7 d 給藥后第14 d空白對(duì)照組 — 雌 10 23.65±0.87 24.33±1.39# 25.38±3.52 26.85±4.19#雄 10 24.56±1.48 25.42±2.34# 28.77±3.10## 31.30±2.71##杏鮑菇供試混合液組 61.116 0 雌 10 24.30±0.69 24.25±1.09 25.93±1.31# 27.54±1.05##雄 10 23.89±1.95 24.33±2.11 28.12±3.10## 29.25±3.90##

2.2.2 飼料消耗量情況

杏鮑菇一次性灌胃給予雌雄小鼠后14 d內(nèi)，與給藥前1 d比較，給藥后第14 d時(shí)，空白對(duì)照組雄性小鼠飼料消耗量明顯降低（P＜0.05）；與空白對(duì)照組比較，給藥后第2 d、7 d、14 d時(shí)，杏鮑菇供試混合液組雌雄小鼠飼料消耗量均無明顯差異（P＞0.05）?？傮w而言，空白對(duì)照組和杏鮑菇供試混合液組雌雄小鼠飼料消耗量均呈降低趨勢(shì)，且最大給藥劑量61.116 0 g·kg-1的杏鮑菇供試混合液對(duì)小鼠飼料消耗量沒有明顯影響。見表2。

表2 一次性給予杏鮑菇后14 d內(nèi)小鼠飼料消耗量的情況表[g·（kg·d）-1，]

表2 一次性給予杏鮑菇后14 d內(nèi)小鼠飼料消耗量的情況表[g·（kg·d）-1，]

注：與給藥前1 d對(duì)比，#意為P＜0.05，##意為P＜0.01；與空白對(duì)照組比，*意為P＜0.05，**意為P＜0.01。

組別 劑量/g·kg-1 性別 籠數(shù)/籠 給藥前1 d 給藥后第2 d 給藥后第7 d 給藥后第14 d空白對(duì)照組 — 雌 2 350.03±132.68 316.37±24.87 284.02±61.94 318.23±277.04雄2 276.88±1.95 320.65±86.06 253.42±9.40 213.95±7.88#杏鮑菇供試混合液組 61.116 0 雌 2 337.53±47.09 238.90±14.84 337.76±190.79 238.11±175.20雄2 303.99±42.59 255.15±13.33 249.50±16.59 191.41±0.79

2.3 血常規(guī)

杏鮑菇經(jīng)口一次性灌胃給予雌雄小鼠后14 d，與空白對(duì)照組比較，杏鮑菇供試混合液組雄性小鼠的平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）明顯增加（P＜0.05），但仍在正常范圍之內(nèi)；其余雌雄小鼠各項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)均無明顯變化（P＞0.05）。見表3和表4。

表3 一次性給予杏鮑菇后小鼠的血常規(guī)測(cè)定結(jié)果表Ⅰ（）

表3 一次性給予杏鮑菇后小鼠的血常規(guī)測(cè)定結(jié)果表Ⅰ（）

注：與空白對(duì)照組比，*意為P＜0.05，**意為P＜0.01。

組別 劑量/g·kg-1性別只數(shù)/只紅細(xì)胞數(shù)目/（1012 L-1）血紅蛋白/g·L-1紅細(xì)胞壓積/%平均紅細(xì)胞體積/Fl平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量/Pg平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度 /g·L-1紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)/%白細(xì)胞數(shù)目/（109 L-1）淋巴細(xì)胞數(shù)目/（109 L-1）空白對(duì)照組 —雌 5 7.60±1.00 128.60±15.45 1.48±1.25雄 5 8.36±0.33 141.80±5.31 38.60±5.13 50.84±1.38 16.88±0.36 333.20±10.26 13.84±0.97 1.94±1.45 43.88±2.02 52.52±1.39 16.90±0.39 323.00±7.81 14.08±0.90 3.02±1.64 2.48±1.40杏鮑菇供試混合液組61.116 0雌 5 8.72±0.33 146.40±7.70 44.02±2.16 50.52±2.14 16.72±0.73 332.00±1.58 13.42±0.91 2.26±1.311.56±0.90雄 5 8.62±0.68 144.40±6.02 42.96±1.86 50.02±2.31 16.74±0.77 335.60±5.59*13.26±0.76 4.34±2.933.46±2.33

表4 一次性給予杏鮑菇后小鼠的血常規(guī)測(cè)定結(jié)果表Ⅱ（）

表4 一次性給予杏鮑菇后小鼠的血常規(guī)測(cè)定結(jié)果表Ⅱ（）

注：與空白對(duì)照組比，*意為P＜0.05，**意為P＜0.01。

組別 劑量/g·kg-1 性別 只數(shù)/只單核細(xì)胞數(shù)目/（109 L-1）中性粒細(xì)胞數(shù)目/（109 L-1）淋巴細(xì)胞百分比/%單核細(xì)胞百分比/%中性粒細(xì)胞百分比/%血小板數(shù)目/（109 L-1）平均血小板體積/Fl血小板壓積/%血小板分布寬度/%空白對(duì)照組 —雌 5 0.06±0.13 0.40±0.10 17.34±0.40雄 5 0.06±0.05 0.48±0.23 71.38±6.11 4.08±1.84 24.54±7.49 399.20±350.75 5.40±0.28 0.21±0.18 81.34±3.78 1.90±0.66 16.76±3.46 618.60±324.95 5.32±0.33 0.32±0.16 17.40±0.57杏鮑菇供試混合液組18.00±0.62 61.116 0雌 5 0.04±0.05 0.66±0.39 17.28±0.22雄 5 0.12±0.16 0.76±0.63 68.56±8.18 2.20±0.47 29.24±7.78 496.00±213.27 5.44±0.21 0.27±0.12 80.54±7.86 2.16±1.49 17.30±7.09 635.80±462.77 6.08±0.68 0.37±0.25

2.4 血液生化指標(biāo)

杏鮑菇經(jīng)口一次性灌胃給予雌雄小鼠后14 d，與空白對(duì)照組雄性小鼠比較，杏鮑菇供試混合液組雄性小鼠的白球比（A/G）明顯上升（P＜0.05），但此變化的毒理學(xué)價(jià)值有限。與空白對(duì)照組雌性小鼠比較，杏鮑菇供試混合液組雌性小鼠的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性十分明顯地降低（P＜0.01），但仍在正常范圍內(nèi)。其余雌雄小鼠各項(xiàng)血液生化學(xué)指標(biāo)均無明顯變化（P＞0.05）。見表5。

表5 一次性給予杏鮑菇后小鼠的血液生化測(cè)定結(jié)果表（）

表5 一次性給予杏鮑菇后小鼠的血液生化測(cè)定結(jié)果表（）

注：與空白對(duì)照組比，*意為P＜0.05，**意為P＜0.01。

組別 劑量/g·kg-1性別只數(shù)/只總蛋白/g·L-1白蛋白/g·L-1球蛋白/g·L-1白球比丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶/U·L-1天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶/U·L-1葡萄糖/mmol·L-1總膽紅素/umol·L-1總膽固醇/mmol·L-1甘油三酯/mmol·L-1空白對(duì)照組 —雌 5 49.98±3.16 1.39±0.38雄 5 49.50±4.09 27.82±2.52 22.16±1.43 1.26±0.13 69.56±13.86 118.06±15.03 15.73±2.32 8.22±2.57 2.23±0.32 25.88±1.66 23.62±2.53 1.10±0.06 49.28±17.82 88.52±16.14 16.38±2.07 8.04±2.14 2.99±0.17 1.50±0.29杏鮑菇供試混合液組1.41±0.08 61.116 0雌 5 46.44±2.49 1.47±0.34雄 5 46.34±0.82 25.76±1.19 20.68±1.65 1.25±0.08 38.34±5.70**78.42±11.37**14.51±2.01 5.30±1.70 2.08±0.15 25.26±0.59 21.08±0.74 1.20±0.06*42.38±4.07 81.22±16.42 17.29±4.85 8.49±4.94 2.86±0.42

3 討論

杏鮑菇菌肉肥厚，口感獨(dú)特，香味濃郁，營養(yǎng)豐富，具有抗氧化、抗病毒等活性，是一種營養(yǎng)價(jià)值和保健價(jià)值極高的珍貴食用菌[18]。谷延澤[19]測(cè)定出杏鮑菇中必需氨基酸、甜味氨基酸和鮮味氨基酸分別占氨基酸總量的40.06%、19.39%和24.64%。YAOITA等[20]從杏鮑菇中分離到5α,9α-表雙氧-8α,14α-環(huán)氧-（22E）-麥角甾-6,22-雙烯-3β-醇和3β,5α-雙羥麥角甾-7-烯-6-酮兩種新的甾醇，同時(shí)分離到6β-乙酰-（22E）-麥角甾-7,22-雙烯-3β,5α-二醇、3β,5α-雙羥基-（22E）-麥角甾-7,22-雙烯-6-酮、麥角甾醇過氧化物（Ergosterol peroxide）、5α,9α-表雙氧-（22E）-麥角甾-7,22-雙烯-3β,6β-二醇、5α,9α-表雙氧-3β-羥基-（22E）-麥角甾-7,22-雙烯-6-酮和 3β,5α-9α-三羥基-（22E）-麥角甾-7,22-雙烯-6-酮6種已知的甾醇。杏鮑菇多糖具有抗氧化、抗癌、保護(hù)肝臟、降血脂、抗疲勞、抗損傷和抗菌作用[21-24]，故具有很高的開發(fā)價(jià)值。

本文中杏鮑菇的最大給藥量為61.116 0 g·kg-1，該劑量下均未見動(dòng)物的死亡、中毒等癥狀，未發(fā)現(xiàn)肉眼可見的臟器異常，體重及飼料消耗量均無明顯變化。杏鮑菇的最大給予劑量61.116 0 g·kg-1，為臨床日食用量 0.833 3 g·kg-1的 73 倍，臨床日藥用劑量 0.150 0 g·kg-1的407倍，顯示杏鮑菇為無毒性的受試物。結(jié)果表明，杏鮑菇毒性低，服用安全。此外，小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)中的血液測(cè)試結(jié)果表明，與空白組相比較，杏鮑菇可明顯升高血液中平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度，降低天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）的活性，但仍在正常范圍之內(nèi)且毒理學(xué)價(jià)值有限。該變化的機(jī)制及毒效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確，可能與杏鮑菇所含某些化學(xué)成分有關(guān)，但也可能是單次試驗(yàn)的偶然現(xiàn)象，故有待進(jìn)一步的研究。杏鮑菇的急性毒性實(shí)驗(yàn)可為其合理使用以及今后的長期毒性和有效性實(shí)驗(yàn)提供劑量參考依據(jù)。