蘆 杰，胡海霞，佟學(xué)穎*

（1.吉林省臨床檢驗(yàn)中心/吉林省醫(yī)療機(jī)構(gòu)質(zhì)量監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)中心質(zhì)量控制科，吉林長(zhǎng)春 130021；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院胃腸結(jié)直腸外科，吉林長(zhǎng)春 130033）

子宮腫瘤多發(fā)生于圍絕經(jīng)期與絕經(jīng)后女性，因其性激素水平偏低，且隨著年齡增長(zhǎng)、不良生活方式及飲食習(xí)慣導(dǎo)致其免疫功能低下，易引起婦科疾病[1-3]。免疫功能障礙可能導(dǎo)致惡性腫瘤患者單純手術(shù)、放化療或使用抗癌藥物等被動(dòng)治療也不能完全阻止癌細(xì)胞的遷移和侵襲，部分良性腫瘤也具有復(fù)發(fā)或惡化的風(fēng)險(xiǎn)[4-5]。因此，評(píng)估子宮腫瘤的轉(zhuǎn)歸結(jié)局以降低疾病對(duì)患者的不良影響至關(guān)重要。癌胚抗原（CEA）為臨床常用的腫瘤標(biāo)記物，細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶1（Chk1）、細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶2（Chk2）是細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，可以阻滯細(xì)胞周期運(yùn)行，而抑制T 細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（Tim3）的表達(dá)可提高抗癌T 細(xì)胞反應(yīng)[6-7]。因此，本研究探求Chk1、Chk2、Tim3 聯(lián)合CEA 對(duì)子宮腫瘤患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1 月至2020 年1 月吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院收治的160 例子宮腫瘤患者為研究對(duì)象進(jìn)行回顧性分析，根據(jù)患者病理學(xué)檢查結(jié)果的不同分為良性組（73 例）和惡性組（87 例）。良性組患者年齡40~65 歲，平均年齡（55.14±5.18）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）18~24 kg/m2，平均BMI（21.97±1.03）kg/m2；病程1~7 年，平 均病程（4.71±1.54）年；Karnofsky 功能狀態(tài)量表（KPS）[8]評(píng)分70~85 分，平均KPS 評(píng)分（78.16±3.69）分；美國(guó)東部腫瘤協(xié)作組（ECOG）[9]評(píng)分0~2 分，平均ECOG 評(píng)分（0.97±0.29）分。惡性組患者年齡41~65 歲，平均年齡（54.45±4.34）歲；BMI 18~25 kg/m2，平 均BMI（21.99±1.17）kg/m2；病程2~7 年，平均病程（4.69±1.28）年；KPS 評(píng)分71~85 分，平均KPS 評(píng)分（77.76±3.51）分；ECOG評(píng)分0~2分，平均ECOG評(píng)分（0.99±0.32）分。兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。本研究經(jīng)吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《子宮肉瘤診斷與治療指南（第4 版）》[10]中子宮腫瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理學(xué)檢查確診為子宮腫瘤；②ECOG 評(píng)分在0~2 分；③KPS 評(píng)分≥60 分；④預(yù)計(jì)生存期超過(guò)研究時(shí)間。排除標(biāo)準(zhǔn)：①惡性腫瘤腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（TNM）分期[11]為 Ⅲ~Ⅳ期；②近期接受過(guò)腫瘤疾病系統(tǒng)性治療；③合并嚴(yán)重實(shí)質(zhì)性器官功能損傷、嚴(yán)重凝血造血障礙、嚴(yán)重自身免疫性疾病；④合并認(rèn)知障礙、精神疾病。

1.2 研究方法 將兩組患者手術(shù)切除下的腫瘤病理及周圍組織分別使用10%甲醛（國(guó)藥化學(xué)試劑有限公司，規(guī)格：500 mL/瓶）固定，進(jìn)行包埋處理，切至呈厚度約為4 μm 切片，隨后進(jìn)行免疫組化染色。染色過(guò)程包括烤片、乙醇順濃度水化處理、微波修復(fù)抗原、磷酸鹽緩沖液（北京Solarbio 公司，規(guī)格：500 mL/瓶）洗滌、牛血清白蛋白封閉切片。每位患者的病理組織和病理周圍組織樣本切片任選一個(gè)做陰性對(duì)照；其余組織與來(lái)源切片依次滴加一抗、二抗、鏈霉親和素-生物素復(fù)合物，每次滴加后在37 ℃下靜置1 h。兩種切片用聚丁二酸丁二醇酯（PBS）（上海源葉生物科技有限公司，規(guī)格：25 g/瓶）沖洗3 次，3 min/次，隨后進(jìn)行下一步操作；最后滴加細(xì)胞增殖檢測(cè)（DAB）染色液進(jìn)行顯色反應(yīng)，蘇木素復(fù)染后乙醇逆濃度脫水，用樹(shù)膠封片，放至顯微鏡（日本OLYMPUS，型號(hào)：DSX1000）下觀察。步驟中的一抗分別為抗Chk1 抗體、抗Chk2 抗體、抗Tim3抗體和抗CEA 抗體，二抗為生物標(biāo)記羊抗兔IgG。Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 免疫組化試劑盒購(gòu)于上海雅吉生物科技有限公司。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較兩組患者病理組織和病理周圍組織細(xì)胞中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 陽(yáng)性情況。結(jié)果判讀：隨機(jī)選取每張切片5 個(gè)顯微鏡下400 倍視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，采用顯微鏡攝像計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)，計(jì)算細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)量并計(jì)分，總分0~12 分，0 分為陰性，1~4 分為弱陽(yáng)性，5~8 分為中陽(yáng)性，9~12 分為強(qiáng)陽(yáng)性，分?jǐn)?shù)越高，陽(yáng)性程度越高[12]。②比較兩組患者腫瘤轉(zhuǎn)歸情況。記錄患者截至2021 年6 月的疾病轉(zhuǎn)歸情況，腫瘤疾病緩解、穩(wěn)定或未復(fù)發(fā)為良好，腫瘤疾病進(jìn)展或復(fù)發(fā)為惡化[13]。③分析Chk1、Chk2、Tim3和CEA 水平對(duì)子宮腫瘤轉(zhuǎn)歸的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布的計(jì)量資料以P50（P25，P75）表示，組間比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用受試者操作特征（ROC）曲線分析研究指標(biāo)對(duì)腫瘤患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者病理組織及其周圍組織細(xì)胞中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 陽(yáng)性情況比較 惡性組患者病理與其周圍組織中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 陽(yáng)性表達(dá)水平高于良性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組患者病理組織中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA陽(yáng)性表達(dá)水平高于病理周圍組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組患者病理組織及其周圍組織細(xì)胞中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 陽(yáng)性情況比較 [分，P50(P25,P75)]

2.2 兩組患者腫瘤轉(zhuǎn)歸情況 良性組患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局良好55 例，惡化18 例，惡化率為24.66%；惡性組患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局良好37 例，惡化50 例，惡化率為57.47%。良性組患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局優(yōu)于惡性組（χ2=4.569，P＜0.05）。

2.3 Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 水平預(yù)測(cè)子宮腫瘤轉(zhuǎn)歸結(jié)局的ROC 分析 ROC 分析結(jié)果顯示，病理組織Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 預(yù)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)歸的AUC值分別為0.773、0.780、0.792、0.779，病理周圍組織Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 預(yù)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)歸的AUC 值分別為0.696、0.677、0.688、0.638，見(jiàn)表2、圖1。

表2 Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 水平預(yù)測(cè)子宮腫瘤轉(zhuǎn)歸結(jié)局的ROC 分析

圖1 Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 預(yù)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)歸預(yù)測(cè)的ROC 曲線

3 討論

CEA 作為一種鑒別惡性腫瘤的廣泛性腫瘤標(biāo)記物，對(duì)惡性、良性腫瘤患者治療后的轉(zhuǎn)歸結(jié)局預(yù)測(cè)評(píng)估有一定干擾性[14]。研究發(fā)現(xiàn)，病理組織中Chk1表達(dá)陰性的腫瘤患者生存期較長(zhǎng)，轉(zhuǎn)歸結(jié)局較好[15]，Chk2 也被證實(shí)在病理組織中過(guò)表達(dá)與患者不良腫瘤特征有關(guān)，推測(cè)Chk1 和Chk2 還可作為腫瘤預(yù)后評(píng)估標(biāo)記物[16]。另一項(xiàng)研究指出，有高水平Tim3 陽(yáng)性細(xì)胞的腫瘤患者化學(xué)治療效果不佳，推測(cè)Tim3 過(guò)表達(dá)可能阻礙腫瘤治療[17]。

本研究結(jié)果顯示，惡性組患者Chk1、Chk2、Tim3和CEA在病理組織中的表達(dá)水平高于良性組，良性組患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局優(yōu)于惡性組。這提示隨著子宮腫瘤疾病病情的加重，Chk1、Chk2、Tim3 和CEA在病理組織中的表達(dá)水平越高，且過(guò)表達(dá)的患者治療效果不佳，復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較高。

本研究通過(guò)ROC 曲線分析，病理組織Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 預(yù) 測(cè) 腫 瘤 轉(zhuǎn) 歸 的AUC 值 分別為0.773、0.780、0.792、0.779，病理周圍組織Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 預(yù)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)歸的AUC值分別為0.696、0.677、0.688、0.638，說(shuō)明病理組織中Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 陽(yáng)性表達(dá)水平對(duì)腫瘤患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局的具有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。Tim3過(guò)表達(dá)對(duì)腫瘤患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局有負(fù)面影響，通過(guò)抑制Tim3 表達(dá)，可改善患者轉(zhuǎn)歸結(jié)局。分析原因可能是細(xì)胞周期中也存在負(fù)反饋調(diào)節(jié)，激活Chk1 而使細(xì)胞周期阻滯，為損傷DNA 創(chuàng)造修復(fù)時(shí)間，并誘導(dǎo)未修復(fù)成功的細(xì)胞凋亡[18]。Chk2 是DNA 損傷反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子和腫瘤抑制因子，也參與促進(jìn)細(xì)胞周期阻滯、凋亡和DNA 修復(fù)。Tim3 可抑制自然殺傷性細(xì)胞免疫功能而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)展，過(guò)表達(dá)可能抑制嵌合抗原受體T 細(xì)胞功能[19]。

綜上所述，Chk1、Chk2、Tim3 和CEA 在子宮腫瘤患者病理組織中的陽(yáng)性表達(dá)水平越高，腫瘤越容易進(jìn)一步發(fā)展，可作為子宮腫瘤轉(zhuǎn)歸的預(yù)測(cè)指標(biāo)。